瑤藥葫蘆鉆不同提取部位體外抗腫瘤實驗研究

黃琳蕓 郭力城 余勝民 陳少鋒 楊東愛 廖安妮

（廣西民族醫藥研究院，廣西 南寧 530001）

葫蘆鉆為天南星科植物石柑子Pothos chinensis(Raf.)Merr.的全草，性微溫，味苦辛，無毒，入心、胃二經，具有清熱，解毒，祛風濕的功效。是瑤族傳統治癌“打藥”【1】。前期對葫蘆鉆進行抗腫瘤實驗研究結果表明，葫蘆鉆提取物具有抗腫瘤作用【2】。為闡明葫蘆鉆的抗腫瘤作用機制，本實驗對葫蘆鉆不同提取部位在體外進行了抗腫瘤活性研究。現報道如下。

1 實驗材料

1.1 受試樣品：葫蘆鉆不同提取部位的制備：葫蘆鉆全草粉碎，75%乙醇回流提取3次，回收乙醇至無醇味（乙醇總提物）后加水混懸，水液分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物。回收溶劑，提取物干燥至干，均用含有DMSO的培養基溶解，配成濃度為400μg·mL-1溶液，置于-20℃冰箱密閉避光保存。臨用前用不含血清和抗生素的RPMI1640液稀釋至所需濃度，DMSO最終濃度小于0.01%。

1.2 腫瘤細胞株：人胃癌細胞株SGC7901購自上海細胞生物研究所細胞庫。

1.3 試劑：MTT為美國Sigma公司產品 ；FBS（胎牛血清）為杭州四季青生物工程材料有限公司產品，批號090306；RPMI1640培養基為GIBCO分裝，LOT.NO 1397535；DMSO(二甲基亞砜)購自天津匯英化學試劑有限公司，批號：20030526。

1.4 細胞培養：腫瘤細胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培養基在37℃，10%CO2條件下培養，取對數生長期細胞用于實驗。

1.5 實驗儀器：Thermo Forma型CO2培養箱，美國產；Thermo Forma型酶標儀；LEICA倒置顯微鏡，德國產；Corning型96孔板，美國產；Millpore超純水儀，美國產；HV-50全自動高壓滅菌器，日本產；DLE560型超凈工作臺，荷蘭產；BP211d型萬分之一克電子天平，德國賽多利斯產；磁力攪拌器，意大利IKA產。

2 實驗方法

2.1 RPMI1640完全培養液的配置：含RPMI1640培養基、3%谷氨酰胺、卡那霉素 750μg·mL-1、10%FBS（臨用前加）。

2.2 體外抗腫瘤實驗（MTT法）：取對數生長期細胞用0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化后，用培養液稀釋。在96孔培養板中每孔加入200μL(含有5000個/ml腫瘤細胞)10%FBS的RPMI1640培養液，置37℃，10%CO2培養箱中培養24h后，棄去舊培養液。實驗組分別加入新的培養液190μL∕孔，然后加入不同濃度的葫蘆鉆各提取物，10μL∕孔，使終濃度分別為 12.5、25、50、100μg·mL-1，對照組則加入200μL∕孔新的培養液。每組 3平行孔，置37℃，10%CO2培養箱中培養4d后，棄去上清液，每孔加入200μL新鮮配制的含0.2mg·mL-1MTT的無血清培養液，37℃繼續培養4h，棄上清液，加入200μL∕孔DMSO，振蕩混勻后，在酶標儀上以試驗波長為570nm，參比波長為450 nm測定OD值，按下式計算藥物對腫瘤細胞生長的抑制率：腫瘤細胞生長抑制率（%）=（1-實驗組平均OD值∕對照組平均OD值）×100%[3]。

3 實驗結果

MTT法測定葫蘆鉆不同提取部位對SGC7901腫瘤細胞株生長的抑制。結果見表1。

結果顯示，葫蘆鉆的乙酸乙酯部位和正丁醇部位對SGC7901腫瘤細胞株有一定的抑制作用，并與濃度呈正相關作用。

表1 葫蘆鉆不同提取部位對SGC7901腫瘤細胞的抑制作用（%）

4 討論

本實驗通過采用MTT法研究葫蘆鉆不同提取部位體外抗腫瘤作用。結果顯示葫蘆鉆的乙酸乙酯和正丁醇部位對SGC7901體外培養細胞有一定的抑制作用，其抑制率隨著藥物濃度增加而相應增高。石油醚部位的細胞毒作用不明顯，可能石油醚部位通常為去除鞣質、葉綠素等干擾成分。提示葫蘆鉆提取物乙酸乙酯和正丁醇部位在體外對腫瘤細胞生長具有抑制作用。

近年來，從天然植物中尋找新的抗腫瘤藥物已成為新藥研究的主要發展方向之一。本研究為揭示葫蘆鉆抗腫瘤作用及其物質基礎，實現藥材可持續開發利用提供實驗依據。

[1]戴斌，丘翠嫦，李釗東，等.瑤醫用藥品種調查報告[J].中草藥，1997，28（12）：746～749.

[2]黃琳蕓，余勝民，鐘鳴，等.瑤藥葫蘆鉆提取物抗腫瘤作用的實驗研究[J].時珍國醫國藥，2007,18（7）：1590.

[3]張均田.現代藥理實驗方法（上冊）［M］.北京醫科大學中國協和醫科大學聯合出版社，1998，818.