正交設(shè)計優(yōu)選延胡索中延胡索乙素及原阿片堿的最佳提取工藝

敖志遠

（阜新蒙藥有限責任公司，遼寧 阜新 123000）

延胡索為罌粟科植物CorydaLis yanhusuo W.T.Wang的干燥塊莖,其味辛、苦，溫,歸肝、脾經(jīng),具有活血、利氣、止痛之功效，用于胸脅、脘腹疼痛、經(jīng)閉通經(jīng)、產(chǎn)后瘀阻、跌撲腫痛等[1]。延胡索的主要活性成分為生物堿，其具有強烈的生理活性，可擴張冠狀動脈，具有一定的中樞鎮(zhèn)靜作用，故急需建立一種簡單可行，穩(wěn)定性高的提取延胡索中生物堿的方法，為進一步研究其活性成分提供理論依據(jù)。在本試驗過程中，我們以不同濃度的乙醇為提取溶劑，不同提取時間，不同提取次數(shù)和溶劑用量為因素，用L9（34）正交設(shè)計，以延胡索乙素含量，原阿片堿含量，提取液的得膏率為指標，選擇最佳的提取工藝。

1 儀器與試藥

HSS型電子恒溫水浴鍋：上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；

RE－52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；

SHZ－DⅢ型循環(huán)水式真空泵：鞏義市予華儀器有限責任公司；

Agilent 1100 Series高效液相色譜儀（配有DAD、自動進樣器）、ChemStation工作站（Agilent科技有限公司）；

HS6150型超聲波清洗器（天津恒奧科技發(fā)展有限公司）；CP225D電子分析天平（德國Sartorius,十萬分之一）；

延胡索藥材（由遼寧省本溪三藥有限公司提供），經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定為罌粟科植物CorydaLis yanHusuo W.T.Wang的干燥根；

延胡索乙素（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號 110726-201011）；

原阿片堿（供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所，批號 110853-200402）；

甲醇（色譜純，購于天津市科密歐化學試劑開發(fā)中心）；

其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交實驗法優(yōu)選延胡索提取工藝：選用L9（34）因素水平表，結(jié)合成分性質(zhì)及生產(chǎn)實際選擇乙醇濃度，乙醇用量，提取時間，提取次數(shù)為因素，各因素水平見表1[2-4]。根據(jù)正交安排9種提取工藝，見表2。

2.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Agilent TC－C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-磷酸鹽溶液（64：36）流速：1 mL·min-1；柱溫：25℃；檢測波長：283 nm。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取延胡索乙素對照品適量，加甲醇制成0.104 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

精密稱取原阿片堿對照品適量，加甲醇制成0.094 mg·mL-1的溶液，作為對照品溶液。

2.4 供試品溶液的制備

等量稱取9份樣品各100g，以表3的9種工藝組合進行乙醇回流提取，備用。

2.5 驗證和補充試驗：為了判定A1B2C3D1結(jié)果是否最佳，對上述因素和水平有待于驗證；由于溶劑用量影響顯著，又以6倍量提取最好，因為又增加了4倍和12倍提取試驗，結(jié)果見表4。量）×0.4；原阿片堿評分（Y）=（原阿片堿含量/最大原阿片堿含量）×0.4；干膏收率評分(M)=（干膏收率/最大干膏收率）×0.2；綜合評分（Z）=X+Y+M

表2 延胡索提取條件正交試驗表

表3 方差分析

方差分析：由直觀分析表3和方差分析表4，可知A因素對延胡索提取工藝有顯著性影響，各因素作用主次為A＞B＞C＞D，A因素中以A1最大，B，C，D因素均無顯著性影響，綜合考慮工藝成本最終確定最佳工藝為A1B2C3D2，即最佳提取工藝為:6倍量70%乙醇提取2次，2h。

表4 驗證補充試驗

表4 結(jié)果表明，正交試驗優(yōu)選條件A1B2C3D2經(jīng)驗證結(jié)果，比正交表內(nèi)9份樣品提取效果都好，增加溶劑用量可以提高提取效果，減少溶劑用量即降低提取效果，綜合考慮工藝成本最終仍確定最佳提取工藝為A1B2C3D2，即最佳提取工藝為:6倍量70%乙醇提取2次，2h。

3 討論

3.1 延胡索為臨床常用藥,其主要活性成分為生物堿,延胡索中生物堿具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗?jié)冏饔谩⒁种莆阜置凇⒔獐d及增加冠脈血流量,抗心律失常等作用。延胡索生物堿含量較低,其在酸水或乙醇中有較好的溶解性能。為充分提高生物堿的利用率,采用乙醇回流提取,進行正交試驗法優(yōu)選提取工藝,為延胡索的臨床合理應用及其進一步研究開發(fā)打下良好的基礎(chǔ)[5－7]。

3.2 應用多指標正交設(shè)計法試驗進行工藝優(yōu)選時，首先要解決指標間量綱不一致和指標間的矛盾問題。針對指標間的重要性差異給出各指標權(quán)重系數(shù)，然后進行綜合評分分析。故本試驗將指標的權(quán)重系數(shù)設(shè)為延胡索乙素含量為0.4、原阿片堿含量為0.4 ，出膏率為0.2。綜合評分后，數(shù)據(jù)間具有顯著性差異，綜合考慮工藝成本最終確定最佳工藝為6倍量70%乙醇提取2次，每次2小時。對該提取方法進行方法學分析，結(jié)果均表明該方法穩(wěn)定可行。可為延胡索的進一步開發(fā)提供理論依據(jù)。

3.3 本試驗亦考察了2010版藥典所用含量測定方法及乙腈－水系統(tǒng)，發(fā)現(xiàn)該法易出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象。且流動相配制復雜，故本試驗選取甲醇－磷酸鹽溶液（64：36）為流動相，流動相現(xiàn)配現(xiàn)用，條件穩(wěn)定，峰形佳，分離度好，理論塔板數(shù)達到要求。經(jīng)過方法學試驗表明該工藝穩(wěn)定可行，并且延胡索中2種生物堿得率較高，從而有利于提高對延胡索的綜合利用。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：94.

[2]黃春青，林亞平，靳鳳云,等.均勻設(shè)計法結(jié)合藥效學指標優(yōu)選金鐵鎖提取工藝[J].中國中藥雜志，2008，33（15）：1817-1820.

[3]張志國，歐陽榮，黃曉霞,等.正交設(shè)計優(yōu)選抗瘤升白片的提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志，2002，8（2）：1-3.

[4]張紹軒，李勇，黃青,等.用正交試驗優(yōu)選鹽酸乙醇回流法提取麻黃的工藝研究[J].中成藥，2008，30（5）：758-760.

[5]廖維，夏新.華延胡索提取工藝的研究[J].中成藥，2004，26（10）：6-8.

[6]王寧寧，焉媛媛，李月,等.不同提取方式對天麻復方中藥的藥效學影響[J].中藥材，2007，30（4）：452-454.

[7]李麗，周軍，張瑩,等.多指標綜合評分法優(yōu)化痛風寧顆粒提取工藝[J].中成藥，2007，29（2）：281-285.