HPLC法測定朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量

王明新朱艷紅

（1.內蒙古呼倫貝爾市人民醫院，內蒙古 海拉爾 021000；2.通遼市藥品檢驗所，內蒙古 通遼 028000）

朱格倫烏日-6是由蓮子、石榴、肉桂、豆蔻、蓽茇、紅花六味藥組成的復方蒙藥制劑。功能主治為使反常之精華歸位，調經。用于由赫依所致的白帶過多，月經淋漓，腰腎部疼痛，不消化引起的胃痛等病。紅花為該方中主要成份之一，具有活血通經，散瘀止痛功效。對本方的臨床療效有重要作用，以紅花中主要有效成分羥基紅花黃色素A為定量監控指標可有效地控制產品的質量。本文采用HPLC法測定其中羥基紅花黃色素A的含量，方法簡單、準確、重現性好。可作為質量控制的方法。

1 儀器、試劑和藥品

島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10Avp檢測器、CTO-2A柱溫箱、SIL-HTA自動進樣器、CLASS-VP工作站組成。甲醇、乙腈為色譜純，水為高純水，磷酸為分析純。羥基紅花黃色素A（批號：111637-200503購自中國藥品生物制品檢定所。朱格倫烏日-6批號:20061208 20090606 20090612由呼倫貝爾市蒙醫院制劑室提供。

2 方法和結果

2.1 色譜條件：色譜柱：phenomenexC18柱(250mm×4。6mm,5μm),流動相為甲醇-乙腈-0.7%磷酸溶液（26：2：72）,檢測波長為 403nm,流速為 1.0mL·min-1，進樣量 10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液制備:精密稱取羥基紅花黃色素A對照品適量，加50%甲醇制成每1mL含羥基紅花黃色素A 0.04275mg·mL-1。

2.2.2 供試品溶液：取朱格倫烏日-6，研細，取粉末2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，密塞，超聲（功率90W，頻率59kHz）處理40min，放冷，過0.45μm微孔濾膜取續濾液，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液：按照朱格倫烏日-6的制備工藝制備不含紅花的陰性樣品，并按“2.2.2”項下方法制成陰性樣品溶液。

2.3 系統適用性試驗：取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，理論塔板數按羥基紅花黃色素A峰計算不低于3000。樣品中其他成分對羥基紅花黃色素A的測定無干擾。結果見圖1。

圖1 羥基紅花黃色素A對照品（A）、樣品（B）、缺紅花陰性樣品（C）高效液相色譜圖

2.4 線性關系考察：精密吸取配制好的對照品溶液2、6、8、10、15、20、30μL分別進樣。以峰面積A為縱坐標，以對照品進樣量X（μg）為橫坐標，繪制標準曲線。羥基紅花黃色素A進樣量在0.0855～1.2825μg范圍內線性關系良好。回歸方程為Y=3045787.8X-71952.8 r=0.999。

2.5 精密度試驗：取取“2.2.1”項下的對照品溶液，在上述色譜條件下連續進樣6次，羥基紅花黃色素A色譜峰面積的RSD（n=6）為0.42%。

2.6 重復性試驗：取樣品粉末6份，按“2.2.2”項下方法操作，平行制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下進行分析測定。結果羥基紅花黃色素A含量的平均值（n=6）為1.09mg·g-1，RSD為0.9%。

2.7 穩定性試驗：取同一供試品溶液，室溫放置，分別于0，2，4，6，8，12，24h 按上述色譜條件測定。測得羥基紅花黃色素A峰面積的RSD（n=6）1.6%。結果表明供試品溶液室溫旋轉24h內穩定。

2.8 回收率試驗：精密稱取已知含量的樣品約1g，共6份，分別精密加入羥基紅花黃色素A對照品溶液適量，按“2.2.2”項下方法操作，測定含量，并計算回收率。結果見表1。羥基紅花黃色素A平均回收率（n=9）為100.1%。

表1 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的回收率

2.9 樣品測定：取朱格倫烏日-6，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進樣分析，記錄色譜峰面積，計算含量。結果見表2。

表2 朱格倫烏日-6中羥基紅花黃色素A的含量測定結果（n=3）

3 討 論

3.1 試驗對提取方法、提取時間進行了考察，結果采用50%甲醇超聲提取40min進行供試品溶液的制備，該法提取效能高，干擾物質少，操作簡單、快捷。

3.2 配制一定濃度的羥基紅花黃色素A對照品溶液，分別在200～500nm波長內進行全掃描，羥基紅花黃色素A在403nm處有較強的紫外吸收。實驗選擇403nm進行測定。

3.3 本文建立了一種準確可靠、專屬性強、簡單快捷的定量方法，通過對黃芩苷的含量測定，達到控制該制劑質量的目的。