HPLC法測定川黃醒腦口服液中黃芪甲苷的含量

鄭緋，徐娟

1.解放軍302醫院藥學部，100024. 2.北京軍區總醫院藥理科，100700

黃芪(Radix astragali)是多年生草本豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranceus(Fisch.) Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜夾黃芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根。含有多種化學成分，如皂苷類、黃酮類、多糖類等，黃芪甲苷(ASI)為黃芪中10多種皂苷的主要成分，為黃芪制劑質量檢定的指標成分，結構為三萜皂苷。其中皂苷類是黃芪的主要活性成分，具有降血壓、鎮靜、鎮痛等作用。目前，關于黃芪皂苷的定量測定多采用比色法、薄層掃描法、HPLC-UV法、HPLC-示差折光檢測器法。

川黃醒腦口服液是由黃芪、川芎、當歸等五味藥材組成的純中藥復方制劑，具有益氣活血、化瘀通絡之功效，主要用于腦梗塞急性期的治療。本文采用高效液相色譜法對其中的主要成分黃芪中的黃芪甲苷進行了定量測定，實驗表明，測定方法回收率及精密度都較好，結果準確可靠。

1 儀器、藥品與試劑

1.1 儀器 日本島津液相色譜儀，LC-6A泵，SIL-6A自動進樣器，SPD-6AV紫外檢測器及C-R3A數據處理裝置。

1.2 藥品 黃芪甲苷對照品，購自中國藥品生物制品檢定所(批號110781-200512；規格：20mg，供含量測定用)；川黃醒腦口服液:沈陽市康元制藥廠生產；

1.3 試劑 甲醇和乙腈均為色譜純，水為雙蒸水；其他試劑均為分析純。

2 實驗方法和結果

2.1 色譜條件 色譜柱：YWG-C18柱(4.6mm×250mm)，流動相:乙腈:水(1:2)，磷酸調PH值=3；流速：0.8mL/min；檢測波長：205nm；靈敏度：0.1AUFS。在該色譜條件下，黃芪甲苷的保留時間約為18分鐘。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇溶解并定容至每1mL含0.5mg的溶液作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密量取樣品20mL，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次25mL，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次15mL，棄去水液，正丁醇溶液用無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液置水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至2mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 陰性對照樣品溶液的制備 取不含黃芪藥材的處方其他藥材，按相同工藝制得陰性對照樣品，再按上述供試品溶液制備方法，制得陰性對照樣品溶液。

2.5 線性關系考察 分別精密吸取標準品溶液5、10、15、20、25μL，按上述色譜條件測定，以峰面積的對數為縱坐標，黃芪甲苷進樣量的對數為橫坐標，繪制標準曲線，結果表明，黃芪甲苷在2.5～12.5μg范圍內線性關系良好，其線性回歸方程為Y=1.0097X+5.9010，r=0.9998。

2.6 精密度實驗 分別精密吸取黃芪甲苷標準溶液15μl，按色譜條件連續進樣5次，測定峰面積，結果RSD為1.78%(n=5)，精密度良好。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已測黃芪甲苷含量的川黃醒腦口服液樣品20mL，5份(已知含量為34.0μg/mL)。分別精密加入黃芪甲苷對照品，按樣品測定項下供試品溶液制備方法操作，進樣測定，計算平均回收率為95.32%，RSD=1.69%，結果見表1：

2.8 穩定性實驗 樣品溶液在室溫放置，每隔0.5h測定一次，共測定4次，測定峰面積，計算黃芪甲苷的含量(μg/mL)，分別是0.0341、0.0349、0.0345、0.0342，RSD為1.04%，證明樣品溶液中黃芪甲苷含量至少在2h內穩定。

2.9 重復性試驗 分別平行取同一批號樣品6份，依法處理后，進樣10μL測定，計算黃芪甲苷的含量，平均值為34μg/mL，RSD=1.98%。

表1 加樣回收率試驗結果Tab 1 The results of the recovery test

3 討論

3.1 黃芪甲苷的測定 黃芪中有十幾種皂苷，以黃芪甲苷含量最高，為主要有效成分，我們參照中國藥典(95版)的提取方法，有效的去除了其他皂苷的干擾。

3.2 測定波長的選擇 黃芪甲苷在紫外區僅在200nm左右有末端吸收，因此在200～210nm范圍內選擇測定波長，實驗表明，波長越長，噪音越小，但靈敏度也隨之降低，綜合這兩個因素，我們選205nm為測定波長。

3.3 流動相的選擇 本文考察了乙腈:水(1:2.0，1:2.2，1:2.4，1:3.0)等不同流動相，根據實驗結果選擇乙腈:水(1:2)，磷酸調PH=3為最佳流動相，且PH值越小，峰型越好，保留時間越短，考慮到柱子的壽命，所以我們選PH=3。

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