微柱凝膠法抗人球蛋白試驗檢測孕婦IgG抗體效價診斷新生兒溶血病的應用研究

陳曉軍，艾 清

（1.長春市婦產醫院 檢驗科，吉林 長春 130042；2.吉林大學第一醫院 檢驗科）

微柱凝膠法抗人球蛋白試驗檢測孕婦IgG抗體效價診斷新生兒溶血病的應用研究

陳曉軍1，艾 清2＊

（1.長春市婦產醫院 檢驗科，吉林 長春 130042；2.吉林大學第一醫院 檢驗科）

＊通訊作者

微柱凝膠法免疫檢測技術是20世紀90年代進入我國并逐步廣泛應用于臨床的實驗室項目檢測。抗人球蛋白試驗是目前對IgG抗體檢測國際公認的最經典、可靠的實驗室方法。由于傳統的間接抗人球蛋白試驗（試管法）操作繁瑣、時間長、重復性不好等缺點，一直不能被臨床常規應用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗比試管法抗人球蛋白試驗敏感性高10倍左右［1］，且方法簡單、耗時少、結果可重復、試驗流程標準化等優點。本文就微柱凝膠抗人球蛋白試驗與試管法抗人球蛋白分別對225例懷孕3個月以上孕婦的血清進行IgG抗體效價檢測，現報道如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 檢測對象 2009年8月至2010年6月期間，懷孕3個月以上到本院進行產前檢查的孕婦225例。年齡28-38周歲，ABO血型為O型的孕婦，丈夫ABO血型均為A型、B型、AB型。

1.1.2 主要試劑 微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡（長春博迅生物技術有限責任公司生產）。廣譜抗人球蛋白試劑（長春博德生物技術有限責任公司生產），2-Me試劑（長春博德生物技術有限責任公司生產）。

1.1.3 主要儀器 TD-3A型血型血清學用離心機和FYQ型免疫微柱孵育器（長春博研科學儀器有限責任公司生產）。光學顯微鏡（日本Olympus CX-31）。

1.2 方法

1.2.1 標本處理 取試管一支，加受檢孕婦血清0.2ml及2-Me試劑0.2ml，加塞混合，置37℃水浴30min，充分破壞血清中IgM抗體，另取6支干凈試管，第1支試管加處理后血清50μl和350μl生理鹽水混勻，第2－6支試管分別加入200μl生理鹽水，從第1支試管中吸取200μl混合液加入第2支試管中混勻，再從第2支試管中吸取200μl混合液加入第3支試管中混勻，依次倍比稀釋。第1－6支試管稀釋倍數依次為：1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512。

1.2.2 采用微柱凝膠抗人球蛋白試驗對受檢孕婦血清進行IgG抗體效價檢測：取出微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡，標記標本號，6孔中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的0.8%紅細胞懸液50μl，從第1－6支試管中各取50μl混合液分別加入微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡對應的孔中，置37℃孵育箱中孵育15min后，離心5min，肉眼觀察結果。

1.2.3 采用試管法抗人球蛋白試驗對同一受檢孕婦血清進行IgG抗體效價檢測：取六支標記好的試管，六管中分別加入與該孕婦丈夫ABO血型同型的2%紅細胞懸液100μl，用生理鹽水反復洗滌4次，再對應加入上述第1－6支試管中混勻液100μl，37℃水浴60min后，在反復洗滌4次，在六支試管中分別加入廣譜抗人球蛋白試劑各100μl，離心1min（1 000 r／min），輕輕搖動試管，觀察血凝結果。

2 結果

結果判定：以凝集強度≥1＋判定為陽性結果，凝集強度＜1＋判定為陰性結果。注：由于抗體效價1∶4、1∶8在診斷新生兒溶血病中的意義不明確，故本實驗研究將抗體效價＜1∶16視為陰性［2］。

兩種方法的檢測結果見表1。從表可見：微柱凝膠抗人球蛋白試驗較試管法抗人球蛋白試驗靈敏度高，且滴度越高，差異越明顯。

3 討論

母嬰ABO血型不合是新生兒溶血病的重要原因，對ABO血型為O型的孕婦，丈夫ABO血型為A型、B型、AB型者，在孕期進行IgG抗體效價檢測是非常有必要的，對有異常者（目前臨床普遍認為IgG抗體效價≥1：64有意義［2］），可以早發現早治療，可以有效的預防及減少由母嬰ABO血型不合引起的新生兒溶血病的發生。

表1 225例微柱凝膠法與試管法抗人球蛋白（IgG）抗體效價檢測結果比較

傳統使用的試管法抗人球蛋白試驗操作步驟煩瑣、時間長，不能標準化、人為因素干擾大等缺點，很難在臨床推廣應用。微柱凝膠抗人球蛋白試驗是建立在傳統的試管法抗人球蛋白試驗基礎之上的一種新方法，在凝膠中進行反應，利用紅細胞的可變形性的特點，通過離心力作用使未經抗人球蛋白橋聯的單個紅細胞可通過凝膠介質的原理，用以檢測血清中的IgG抗體，并采用目測直接觀察到檢測結果。且對陰性、陽性結果一目了然，避免了試管血凝法憑經驗判斷結果的錯誤。抗人球蛋白試驗是目前國際公認的最可靠的不完全抗體的檢測方法，由于繁瑣的操作程序一直不能實現臨床常規化，微柱凝膠抗人球蛋白試驗法徹底改變了試管法抗人球蛋白試驗的弊端，其無需繁瑣的洗滌過程、操作方法簡單、結果準確、重復性好、標本用量少（減少操作污染的同時還節省患者的紅細胞和血清，特別有利于新生兒及某些血液病標本量很少時的檢測［3］）等優點已被臨床廣泛應用。

綜上所述，微柱凝膠抗人球蛋白試驗應用于孕婦IgG抗體效價檢測是可行的。

［1］李 勇，楊貴貞.人類紅細胞血型血清學實用理論與實驗技術［M］.北京：中國科學技術出版社，1999：251.

［2］魏亞明，歐英賢.紅細胞免疫抗體檢查在輸血及產前診斷中的應用［J］.中國輸血雜志，2000，13（4）：266

［3］李 勇，馬學年.實用血液免疫學血型理論與實驗技術［M］.北京：科學出版社，2006：637.

1007－4287（2012）02－0330－02

2010－11－30）