高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細胞中表達的相關性和臨床意義

張哲雄，徐承來，曹永濤

（連云港市第二人民醫院 檢驗科，江蘇 連云港 222023）

高危型人乳頭狀病毒和IL-17在宮頸病變患者宮頸脫落細胞中表達的相關性和臨床意義

張哲雄，徐承來，曹永濤

（連云港市第二人民醫院 檢驗科，江蘇 連云港 222023）

目的 探討高危人乳頭狀病毒和白細胞介素17（interleukin，IL-17）在宮頸病變中的表達及臨床意義。方法應用多重PCR技術和流式細胞技術對來我院就診的66例婦女宮頸病變患者進行HPV-DNA、IL-17含量檢測。結果HPV陰性患者29例、HPV陽性患者20例、宮頸癌患者17例。三組所表達的IL-17的含量分別為（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。HPV陽性患者、宮頸癌患者的IL-17的含量比 HPV陰性患者顯著增高（P＜0.01），HPV陽性患者與宮頸癌患者之間無明顯差別（P＞0.05）。結論IL-17與宮頸癌的發生發展相關，檢測IL-17含量對宮頸癌診斷和病情變化有重要意義。

白細胞介素-17；宮頸癌；HPV-DNA

（ChinJLabDiagn，2012，16：0252）

宮頸癌，是最常見的高發惡性腫瘤之一，嚴重影響和威脅著婦女的健康。研究發現宮頸癌的發病與人乳頭狀瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染密切相關，許多腫瘤來源于炎癥浸潤，腫瘤發展與炎癥反應導致周圍組織浸潤有關，因此聯合檢測宮頸病變炎癥程度和HPV反映了宮頸癌發生的連續發展過程。

白細胞介素17（interleukin，IL-17）是一類主要由活化CD4＋記憶性T淋巴細胞分泌的具有促炎作用的細胞因子，在天然免疫和宿主防御中有特殊功能，在炎癥反應中對細胞增殖分化、免疫調節及腫瘤生長方面發揮重要作用。本文通過檢測宮頸脫落細胞中IL-17含量，研究IL-17的表達與宮頸疾病的相關性，深入了解IL-17在腫瘤發生發展過程中作用，為宮頸病變疾病的進一步篩查奠定基礎。

1 對象與方法

1.1 對象

連云港市第二人民醫院2009年5月至2010年11月婦科住院、門診送檢宮頸病變病人宮頸脫落細胞66例。年齡18－61歲，平均42歲。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 使用一次性宮頸細胞采集器，用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，深入受檢者宮頸口內2－3cm，順時針旋轉3-5圈。取出宮頸刷放入裝有保存液的樣本管中，將多余的刷柄折斷，旋緊管蓋，注明編號，立即送檢。

1.2.2 儀器和主要試劑 美國BD公司流式細胞分析儀，配套BD公司IL-17PE試劑，DA7600擴增儀，港龍生物技術有限公司高危型人乳頭瘤病毒多重核酸擴增熒光檢測試劑。

1.2.3 流式標本的制備 取宮頸脫落細胞懸液200μl，分別加入熒光標記抗體IL-17 20μl，振蕩混勻后室溫避光孵育20min，用0.1mol／L pH 7.0 PBS×2ml，離心1 000rpm洗滌2遍，棄上清后，加入500μl的PBS混勻，懸浮細胞上機待測。

1.2.4 流式細胞術測定 流式細胞儀使用CELLQuest功能軟件進行雙參數獲得數據分析，激光光源15mW氬離子激光，波長523nm，先用標準熒光微球對儀器作校對，使半峰變異系數在2%之內。以前向角散射光對側向角散射點圖確定淋巴細胞群，檢測IL-17PE表達百分率，同期用同一患者標本不添加任何抗體作自身陰性對照。

1.2.5 多重PCR方法檢測 HPV-DNA 取宮頸脫落細胞以13 000rpm離心5min，棄上清，加入50 μl DNA提取液，100℃干浴10min，再13 000rpm離心10min。取上清液擴增。PCR反應條件為50℃2min，95℃10min，1循環；95℃15s，52℃30 s，62℃60s，40循環。將臨界陽性的Ct值設定為36，以儀器分析樣本的Ct值，根據說明書提示方法判定結果。

1.3 統計學方法

2 結果

HPV陰性患者29例、HPV陽性患者20例、宮頸癌患者17例。三組所表達的IL-17的含量分別為（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。HPV陽性、宮頸癌患者的IL-17的含量比HPV陰性患者顯著增高（P＜0.01）（如圖1），HPV陽性患者與宮頸癌患者之間無明顯差別（P＞0.05）。

3 討論

IL-17是近年來發現的前炎癥細胞因子家族成員，IL-17又稱IL-17A，不同于Th1、Th2、Treg的細胞亞群，是由Th17細胞高水平分泌。IL-17可誘發涉及炎癥的多種細胞因子和趨化因子的產生，具有重大的促炎作用，與多種自身免疫疾病和炎癥性疾病有關。宮頸的人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌的主要危險因素，至少有75%的女性會在一生中的某個時間感染HPV，根據HPV致病力的大小分為高危型和低危型兩類。低危型多導致CINⅠ及扁平濕疣，高危型多導致CINⅡ、CINⅢ及宮頸癌。

圖1 IL-17在宮頸病變患者脫落細胞中的表達

本實驗結果顯示IL-17在宮頸癌組和HPV陽性組表達增高。提示IL-17的高表達參與了宮頸癌的發生發展過程，與Numasaki等［1］發現IL-17具有促腫瘤血管生成的作用有關。也與IL-17雖然不直接促進血管內皮細胞生長，但可促進血管內皮細胞的遷移，明顯上調由成纖維細胞或腫瘤細胞生成的前血管生成因子表達和IL-17通過刺激腫瘤細胞表達IL-6，誘導巨噬細胞募集及調節腫瘤細胞表型，使其生長快速一致［2］。

研究表明：實驗中的高危HPV陽性組和宮頸癌組宮頸脫落細胞IL-17細胞百分比明顯高于高危HPV陰性組。這與相關文獻報道：IL-17可以誘導MMP-9的表達，并可增強JEG-3的侵襲能力［3］，促進生長因子，降解細胞外基質［4，5］，誘導腫瘤細胞凋亡耐受，促進腫瘤血管生成［3，4］，從而加速腫瘤生長、侵襲、轉移，可能是其促腫瘤發展的機制之一。

IL-17A促進人宮頸癌細胞腫瘤原性（tumorgenicity），在腫瘤部位促進IL-6表達。它分泌TNF-α、IFN-γ及IL-2等致炎因子，可活化巨噬細胞，清除細胞內病原體，介導細胞免疫應答［6］。IL-17在蛋白質和mRNA水平可促進宮頸癌細胞株分泌IL-6和IL-8。IL-6可能參與宮頸癌發生發展，IL-6可刺激正常宮頸細胞、宮頸癌相關細胞株生長一致。也可能IL-17具直接促進宮頸癌細胞增殖作用，有相關研究將人類宮頸癌細胞移植到裸鼠體內發現，IL-17可促進人類宮頸癌細胞生長，且腫瘤體積明顯增大。小鼠腫瘤模型中，IL-17可以促進血管形成，促進腫瘤的生長。研究發現在卵巢癌中IL-17有一定程度的表達，并且其表達同腫瘤的血管生成有關［7］。

因此IL-17在宮頸癌的診斷、治療及預后判斷有一定價值。而聯合檢測高危 HPV-DNA和IL-17，可提高宮頸癌尤其是早期病變的檢出率，對宮頸癌的早期發現、早期診斷、早期治療有重要意義。

［1］Numasaki M，Fukushi J，Ono M，et al.Interleukin 17gene transfection into murine fibrosarcoma cell line MCA increases tumorigenicity correlated with enhanced tumor microuascularity［J］.Blood，2003，101（7）：2620.

［2］巴 羅，劉亞峰.IL-17及其相關因子在呼吸道炎癥疾病中的研究進展［J］.華西醫學，2008，23（2）：401.

［3］Takahashi H，Numasaki M，Lotze MT.Interleukin-17enhances bFGF-，HGF-and VEGF-induced growth of vascular endothelial cells［J］.Immunol Lett，2005，98（2）：189.

［4］Hwang SY，Kim JY，Kim KW，et al.IL-17induces production of IL-6and IL-8in rheumatoid arthritis synovialfibroblasts via NF-kappaB-and PI3-kinase／Akt-dependent pathways［J］.Arthritis Res Ther，2004，6：R120.

［5］Fossiez F，Djossou O，Chomarat P，et al.T cell interleukin-17induces stromal cells to produce proinflammatory and hematopoietic cytokines［J］.J Exp Med，1996，183：2593.

［6］Park H，Li ZX，Zhang XO，et al.A distinct lineage of CD4＋T cells regulatestissue inflammation by producing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6（11）：1133.

［7］青文婕，呂 莎，侯倩男，等.白細胞介素-17在婦科腫瘤中的研究進展［J］.中華婦幼臨床醫學雜志，2010，6（5）：364.

Correlations between human papillomavirus testing and Interleukin-17in cervical exfoliated cells with cervical cancer and its clinical significonce

ZHANGZhe-xiong，XUCheng-lai，CAOYong-tao.（TheSecondHospitalofLianyungang，Lianyungang222023，China）

ObjectiveTo investigate the correlations between of high-risk human papillomavirus-DNA and interleukin（IL）-17their clinical implications.MethodsPeripheral blood was obtained from 66women in our cervical out-patient clinic.Real-time RT-PCR to measure the DNA expressions of HPV.Flow cytometric analysis（FCM）was performed to detect the percentage of IL-17cells.ResultsThe negative HPV DNA patients were 29cases The positive HPV DNA patients were 20cases cervical cancer patients were 17cases.expressions of IL-17were（2.37±2.03）%、（27.99±11.28）%、（35.4±11.59）%。Patients with HPV（＋）and cervical cancer showed a significant increase in the percentage of IL-17cells.No significant difference was observed in the percentage of IL-17patients with HPV（＋）and cervical cancer.ConclusionThe expression of IL-17might play an important role in human cervical cancerl，it might be used to evaluate tumor malignancy and prognosis of cerviacal careinoma.

IL-17；cervical cancer；HPV-DNA

R737.33

A

1007－4287（2012）02－0252－03

2011－01－14）