小花玄參中總皂苷的定性定量分析

包錦淵 朱海旭 高潔 桂光菊

摘要：采用化學(xué)試劑法和分光光度法對小花玄參（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）中總皂苷成分進(jìn)行定性、定量分析。以菝葜皂苷元為對照品，于３１１ ｎｍ處比色測定，測得小花玄參中總皂苷含量為１１．０５ ｍｇ／ｇ，平均回收率為９７．５％，ＲＳＤ為１．５９％（ｎ＝６），該測定方法簡便、準(zhǔn)確，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好。

關(guān)鍵詞：小花玄參（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）；總皂苷；定性分析；定量分析

中圖分類號：Ｒ２８４.２文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）18－4109-02

Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｔｏｔａｌ Ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ sｏｕｌｉｅｉ

ＢＡＯ Ｊｉｎ－ｙｕａｎ，ＺＨＵ Ｈａｉ－ｘｕ，ＧＡＯ Ｊｉｅ，ＧＵＩ Ｇｕａｎｇ－ｊｕ

（Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉｎｉｎｇ ８１０００７，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ. was conducted ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ. According to A311 nm of sample tested using Ｓａｒｓａｓａｐｏｇｅｎｉｎ ａｓ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ． Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ ｗａｓ １１．０５ ｍｇ／ｇ ｉｎ Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ.. Tｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｗａｓ ９７．５％； ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．５９％ （ｎ＝６）． Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ， ｗｉｔｈ ｅｘｃｅｌｌｅｎｔ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ； ｔｏｔａｌ ｓａｐｏｎｉｎｓ； ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ； ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ

小花玄參（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａ ｓｏｕｌｉｅｉ Ｆｒａｎｃｈ．）屬玄參科（Ｓｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｃｅａｅ）玄參屬細(xì)弱小草本，為我國特有種，產(chǎn)于四川西部、青海東部和甘肅東南部。玄參科植物中含有皂苷類成分，主要為甾體皂苷，由此推測小花玄參中含有甾體皂苷。皂苷具有多種藥理學(xué)功能，如抗炎、抗腫瘤等［１］。因此，有必要對小花玄參中的皂苷進(jìn)行研究。本研究通過化學(xué)試劑法和分光光度法對小花玄參中總皂苷成分［３］進(jìn)行定性［２］和定量測定，為總皂苷的快速定性定量分析提供參考。

１材料與方法

１．１材料

ＨＨ－４數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司），ＲＥ ５２８５Ａ旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生華儀器廠），ＴＵ－１２２１型紫外分光光度計（北京普析通用有限公司），索氏提取裝置。

對照品：菝葜皂苷元（中國藥品生物制品檢定所）；供試樣品：小花玄參莖葉（２０１１年７月采于青海省玉樹州代格村農(nóng)作物地，中科院西北高原生物研究所鑒定）；所用試劑均為分析純。

１．２方法

１．２．１供試品溶液的制備稱取０．５ ｇ小花玄參莖葉粉末（１００目），精確到０．０００ １ ｇ，置于索氏提取器中，加適量石油醚脫脂１ ｈ，冷卻后，傾出石油醚提取液，殘渣蒸干后加入甲醇１００ ｍＬ，提取至無色，回收減壓至干，加蒸餾水１０ ｍＬ溶解，用飽和正丁醇萃取４次（１５、１０、１０和１０ ｍＬ），合并正丁醇部分，減壓回收至干，加２０ ｍＬ ２ ｍｏｌ／Ｌ HCl，水浴回流３ ｈ后冷至室溫，用氯仿萃取３次，２０ ｍＬ／次，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加甲醇溶解，轉(zhuǎn)至２５ ｍＬ容量瓶中，定容，制得供試品溶液。

１．２．２定性檢識①醋酐－濃硫酸（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ）檢測：取供試液２ ｍＬ，沸水浴上蒸干，加入濃硫酸－醋酐（１∶２０，V/V）數(shù)滴，觀察顏色變化情況；②三氯醋酸檢測：將供試液滴在濾紙上，噴灑２５％（ｍ／Ｖ）三氯醋酸－乙醇溶液，加熱并觀察６０ ℃和１００ ℃時顏色變化情況；③氯仿－濃硫酸（Ｓａｌｋｏｗｓｋｉ）檢測：將供試液水浴蒸發(fā)所得樣品溶于氯仿后加入濃硫酸，觀察氯仿層和硫酸層顏色和熒光。

１．２．３對照品溶液的制備稱取７．５ ｍｇ菝葜皂苷元對照品以甲醇定容于２５ ｍＬ容量瓶中，配制成０．３ ｍｇ／ｍＬ的對照品溶液。

１．２．４測定波長選擇分別精密吸取對照品溶液０．２ ｍＬ、供試品溶液０．１ ｍＬ置１０ ｍＬ具塞試管中，揮盡溶劑，加入５ ｍＬ高氯酸，７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷卻后，在２１０～４５０ ｎｍ范圍內(nèi)掃描，取最大吸收波長為檢測波長。

１．２．５標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密吸取不同體積的對照品溶液于１０ ｍＬ具塞試管中，揮干后加入５ ｍＬ高氯酸， 于７０ ℃水浴１５ ｍｉｎ，冰水冷卻，最大吸收波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)（Ｃ），吸光度為縱坐標(biāo)（Ａ），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

１．２．６精密度試驗(yàn)取對照品溶液４．０ ｍＬ，以甲醇調(diào)零，在最大吸收波長處測定吸光度，重復(fù)測定６次。

１．２．７穩(wěn)定性試驗(yàn)取供試品溶液０．６ ｍＬ，定容至１０ ｍＬ，間隔１０ ｍｉｎ測定吸光度，重復(fù)測定６次。

１．２．８重復(fù)性試驗(yàn)精密稱取５份同一供試樣品，同上方法處理，測定吸光度。

１．２．９加標(biāo)回收試驗(yàn)稱取０．１００ ０ ｇ已知含量的供試樣品粉末６份，分別準(zhǔn)確加入對照品溶液，測定吸光度，計算含量。

１．２．１０樣品測定稱取０．５ ｇ小花玄參莖葉粉末，精確到０．０００ １ ｇ，制得供試品溶液，測定吸光度，根據(jù)回歸方程計算總皂苷含量。

２結(jié)果與分析

２．１定性結(jié)果

通過定性試驗(yàn)可判斷小花玄參莖葉中主要含有甾體皂苷類成分，可能含有三萜類化合物。

２．２定量檢識結(jié)果

２．２．１選擇測定波長并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線在２１０～４５０ ｎｍ進(jìn)行掃描，選擇測定波長，發(fā)現(xiàn)對照品和供試品溶液均在３０８～３１５ ｎｍ 處有最大吸收，選擇３１１ ｎｍ作為測定波長。在此波長下測吸光度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Ａ＝０．１０３ ２Ｃ＋０．１９４，ｒ＝０．９９９ １。結(jié)果表明，菝葜皂苷元在０．２９３ ５～０．７１４ ７ ｍｇ／ｍＬ范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

２．２．２方法評價精密度試驗(yàn)中，６次測定吸光度的ＲＳＤ為１．０４％，表明儀器精密度良好；穩(wěn)定性試驗(yàn)中，每隔１０ ｍｉｎ測定吸光度的ＲＳＤ為１．１２％，表明在６０ ｍｉｎ內(nèi)樣品溶液的穩(wěn)定性良好。重復(fù)試驗(yàn)的ＲＳＤ為１．０８％，表明本方法重現(xiàn)性較好。

加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見表１。由表１可知，該方法的平均回收率為９７．５％，符合回收率要求（９５％～１０５％），ＲＳＤ為１．５９％。

２．２．３樣品測定結(jié)果樣品的總皂苷平均含量為１．１０５％，ＲＳＤ為２．４０％，結(jié)果見表２。

３討論

預(yù)試驗(yàn)分別對提取溶劑（不同濃度乙醇和甲醇）、提取方法（超聲和回流）及提取時間進(jìn)行了單因素和正交試驗(yàn)分析［４，５］，最后確定了文中供試液的制備方法。小花玄參莖葉中主要含有甾體皂苷，菝葜皂苷元為各類甾體皂苷的母核皂苷元，故可采用該化合物作為對照品；本試驗(yàn)采用分光光度法測定小花玄參中總皂苷含量，線性關(guān)系好，方便快速。本結(jié)果表明，小花玄參莖葉中總皂苷含量較高，為開發(fā)小花玄參中的皂苷提供了依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 孫耀軍，鄒建．皂苷不同測定方法的比較［Ｊ］．江西食品工業(yè)，２００９（２）：３０－３１．

［２］ 宋曉凱．天然藥物化學(xué)［Ｍ］．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，２０１０．１８８－２３１．

［３］ 郭秋平，吳湖坤，關(guān)紅暉，等．不同產(chǎn)地的知母中總皂苷和菝葜皂苷元的含量測定［Ｊ］．時珍國醫(yī)國藥，２００８，１９（６）：１４１０．

［４］ 王瑩瑩，寇永奎，朱建松．甾體皂苷提取分離及結(jié)構(gòu)研究方法［Ｊ］． 華中師范大學(xué)研究生學(xué)報， ２００７，１４（１）：１４３－１４７．

［５］ 奚廣生，張影．玉竹中甾體皂甙提取工藝研究［Ｊ］．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１１，５０（１）：１４０－１４２．

收稿日期：２０１２－０７－０２

基金項目：國家自然科學(xué)基金資助項目（３０９６０２０７）；青海省重點(diǎn)攻關(guān)課題（２００９－Ｚ－７０５）

作者簡介：包錦淵（１９５８－），男，甘肅通渭人，教授，主要從事植物化學(xué)研究，（電話）１３８９７４２１８７８（電子信箱）ｂａｏｊｉｎｙｕａｎｄ＠１２６．ｃｏｍ。