HPLC法測定瑤族藤茶中沒食子酸的含量

黃秋潔　葉勇　歐賢紅　劉華鋼

摘要：采用Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｌｕｎａ）Ｃ１８（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）色譜柱，流動相為甲醇－０．０５％磷酸（１０∶９０，Ｖ／Ｖ），檢測波長為２８０ｎｍ，流速０．８ｍＬ／ｍｉｎ，柱溫３０℃，建立了瑤族藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）中沒食子酸的ＲＰ－ＨＰＬＣ定量分析方法。結果表明，沒食子酸進樣量在０．０５７４～０．３４４４μｇ范圍內與峰面積線性關系良好（ｒ＝０．９９９９），平均回收率為９９．１５％（ＲＳＤ＝１．８０％）。本法簡便快捷，可用于瑤族藤茶中沒食子酸的含量測定。

關鍵詞：藤茶（Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）；沒食子酸；高效液相色譜

中圖分類號：Ｏ６５７．７＋２ 文獻標識碼：Ａ 文章編號：0439－８114（２０12）24－5764-02

藤茶是葡萄科蛇葡萄屬中的一種野生藤本植物，學名為顯齒蛇葡萄［Ａｍｐｅｌｏｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ（Ｈａｎｄ．－Ｍａｚｚ．）Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ］，俗稱藤茶、藤婆茶等［１］。藤茶是瑤族常用藥之一，入藥以葉為主，至今已有數百年的藥用歷史。廣西瑤族人民常將其幼嫩莖葉制成保健茶，用于治療感冒發熱、咽喉腫痛等癥，藥理研究表明藤茶及其提取物具有抑菌、降血脂、降血壓等功效［２］。現已從該植物體中分離了二氫楊梅素（ｄｉｈｙｄｒｏｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、楊梅素（ｍｙｒｉｃｅｔｉｎ）、沒食子酸甲酯、沒食子酸、沒食子酸乙酯等成分［３－６］，目前已有關于藤茶中黃酮類成分含量測定的文獻報道［７，８］，但未見藤茶中沒食子酸含量測定的報道。本試驗建立了ＨＰＬＣ法測定藤茶中沒食子酸含量的方法，為藤茶及其制劑的研制提供質量控制依據。

１ 材料與方法

１．１ 材料

藤茶購于廣西恭城縣，并經廣西中醫藥大學劉壽養副教授鑒定為顯齒蛇葡萄的干燥嫩莖葉。

甲醇為色譜純，磷酸為分析純，水為去離子水；沒食子酸對照品，購于桂林萊茵生物科技股份有限公司，含量大于９８％）。

１．２ 儀器

Ａｇｉｌｅｎｔ－１２００高效液相色譜儀（美國Ａｇｉｌｅｎｔ公司），包括四元梯度泵、二極管陣列檢測器、微量自動進樣器、柱溫箱和化學工作站；ＸＳ２０５ＤＵ電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；ＳＫ２５１０ＨＰ超聲儀（上海科導超聲儀器有限公司）。

１．３ 方法

１．３．３ 樣品溶液的制備 準確稱取樣品粉末０．５ｇ，甲醇溶解，超聲３０ｍｉｎ至樣品完全溶解后，定容至２５ｍＬ，過０．４５μｍ的微孔濾膜后待測。

２ 結果

２．１ 線性關系考察

２．２ 精密度試驗

精確吸取濃度為０．０２８７ｍｇ／ｍＬ的沒食子酸對照品溶液１０μＬ，按以上色譜條件連續進樣６次，測定峰面積。測定值的ＲＳＤ為０．５８％，表明儀器精密度良好。

２．３ 穩定性試驗

分別于０、２、４、８、１０、１２ｈ吸取供試品溶液１０μＬ注入色譜儀，測定峰面積，測定值的ＲＳＤ為０．９６％，表明供試品溶液在１２ｈ內穩定性良好。

２．４ 重復性試驗

取６份同一批藥材樣品，制備供試品溶液后，各取１０μＬ注入色譜儀，測定峰面積，測定值的ＲＳＤ為２．１２％，表明方法重復性良好。

２．５ 加樣回收率試驗

２．６ 樣品含量測定

３ 討論

在預試驗中考察了溫浸提取法、超聲法及加熱回流法等方法，其中溫浸提取法時間長、效率低、操作繁瑣，加熱回流法與超聲提取法的結果沒有明顯差異，但加熱回流法的雜質較多，干擾樣品的測定，而超聲法提取效率高、快速、雜質干擾少、操作簡單，因此最終選擇超聲提取法。同時比較了不同超聲提取時間的測定結果，結果表明超聲提取３０ｍｉｎ后樣品中沒食子酸含量不再增加，因此選取３０ｍｉｎ為超聲提取時間。本試驗還考察了不同提取溶劑：甲醇、體積分數為５０％（下同）的甲醇-水、３０％的甲醇-水及水等，發現用甲醇和５０％甲醇-水作為溶劑提取沒食子酸含量較高，兩者所得結果無明顯差異，但５０％甲醇-水提取的樣品中雜質干擾較多，難以分離測定，故以甲醇作為提取溶劑。

本試驗建立了測定瑤族藤茶中沒食子酸含量的HPLC方法，結果表明，該法簡便快捷，測定結果準確，能分析藤茶藥材中沒食子酸的含量，完善了藤茶藥材中黃酮類成分含量進行測定的質量控制方法，對藤茶藥材及其制劑的質量控制具有現實的指導意義。

參考文獻：

［１］中國科學院植物研究所．中國高等植物圖鑒（第二冊）補編［Ｍ］．北京：科學出版社，１９８３．３４９．

［２］莫國艷．藤茶藥理作用研究進展［Ｊ］．廣西中醫學院學報，２００３，６（４）：６６－６７．

［３］袁阿興，黃筱美，陳 勁．顯齒蛇葡萄化學成分的研究［Ｊ］．中國中藥雜志，１９９８，２３（６）：３５９．

［４］王定勇，劉佳銘，章駿德，等．顯齒蛇葡萄（藤茶）化學成分研究［Ｊ］．亞熱帶植物通訊，１９９８，２７（２）：３９．

［５］王 巖，周莉玲，李 銳，等．顯齒蛇葡萄化學成分的研究［Ｊ］．中藥材，２００２，２５（４）：２５４．

［６］張友勝，楊偉麗，崔 春．顯齒蛇葡萄化學成分的研究［Ｊ］．中草藥，２００３，３４（５）：４０２．

［７］覃潔萍，譚建寧，歐 瑩，等．廣西瑤族藤茶中雙氫楊梅樹皮素的含量測定方法研究［Ｊ］．中國新藥雜志，２００４，１３（１０）：９１５．

［８］張友勝，楊偉麗，龔雨順．ＲＰ－ＨＰＬＣ法測定顯齒蛇葡萄中楊梅素的含量［Ｊ］．中草藥，２００１，３２（１１）：９８３．