陜西衛矛組織培養的影響因素探析

袁云香

摘要：為探討影響陜西衛矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）愈傷組織誘導的因素，找到陜西衛矛愈傷組織培養方法，以陜西衛矛莖段和葉片為外植體，研究不同外植體、不同培養基及不同植物生長調節劑種類及配比對陜西衛矛愈傷組織誘導和生長的影響。結果表明，不同外植體中，莖段愈傷組織誘導率最高，達８８．２％，且發生最早，愈傷組織化程度高，故莖段是誘導愈傷組織的最佳外植體；ＭＳ培養基有利于愈傷組織的誘導；ＭＳ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖最有利于陜西衛矛愈傷組織的誘導。

關鍵詞：陜西衛矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）；組織培養；影響因素

中圖分類號：Ｑ９４９．７５４．７；Ｑ８１３．１＋２ 文獻標識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1265-03

Study on Tissue Culture of Different Organs of Euonymus schensianus

ＹＵＡＮ Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｗｅｉｎａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｅｉｎａｎ ７１４０００， Ｓｈａａｎｘｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｔｉａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ. ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｅ． ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ， ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｔｅｍ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ as ｉｔｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗａｓ ８８．２％ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｓｐｒｏｕｔｅｄ ｔｈｅ ｅａｒｌｉｅｓｔ． ＭＳ＋６－ＢＡ ３．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ ３０ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒｍｕｌａ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ． ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．； ｅｘｐｌａｎｔｓ； ｃａｌｌｕｓ； ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ

陜西衛矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）為衛矛科落葉灌木，又叫金線吊蝴蝶、金絲吊燕。其果序下垂，果色鮮紅艷麗，果翅形狀奇特酷似蝴蝶，是有趣而奇特的觀果佳品。陜西衛矛適應性強，喜光、較耐陰、耐干旱、耐修剪，但其繁殖比較麻煩，目前廣泛栽培于陜西、甘肅、湖北、四川等省份［１－３］。常規栽培方法由于受到生長條件及時間的限制，遠遠不能滿足市場對其苗木的需求。而組織培養技術因其不受時間條件的限制可以快速獲得大量的種苗而倍受青睞。

試驗采用不同外植體研究不同培養基及不同濃度的植物生長調節劑對陜西衛矛愈傷組織誘導的影響，為進一步研究陜西衛矛愈傷組織再分化打下基礎。

１材料與方法

１．１材料

以渭南師范學院校園栽培當年生陜西衛矛嫩枝條為試驗材料。

１．２方法

１．２．１外植體的滅菌剪取一年生陜西衛矛莖段和葉片，放入燒杯中加入適量洗衣粉，在自來水下沖洗２ ｈ左右，再用去離子水沖洗５ ｍｉｎ，于超凈工作臺內，先用體積分數為７５％的乙醇處理２０ ｓ，再用１ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２處理４ ｍｉｎ，然后用無菌水沖洗５～６次，將莖段切成１．０～１．５ ｃｍ長、葉片剪成１．５ ｃｍ × １．５ ｃｍ大小作為外植體，每瓶接種４個外植體于不同的誘導培養基上。

１．２．２愈傷組織的誘導

１）不同外植體與不同誘導培養基的篩選。誘導培養基基本成分為Ｎ６、ＭＳ、ＮＭＢ、１／２ＭＳ。其中，１／２ＭＳ為１／２的ＭＳ大量元素＋微量元素＋有機元素，ＮＭＢ為Ｎ６大量元素＋ＭＳ微量元素＋Ｂ５有機元素；４種基本培養基均添加５００ ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋３００ ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白＋３ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ 蔗糖＋７ ｇ／Ｌ瓊脂，ｐＨ ５．８。在（２２±１）℃、光照度１ ５００～２ ０００ ｌｘ、光照時間１３ ｈ／ｄ條件下誘導愈傷組織形成，４周后統計誘導率并密切觀察愈傷組織生長情況。愈傷組織誘導率=（愈傷組織塊數/接種的外植體數）×100%。每個試驗重復３次。

２）不同濃度植物生長調節物質的篩選。在已篩選出的最適愈傷組織誘導基本培養基中，添加濃度范圍為１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、５．０ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ和濃度范圍為０．１、０．２、０．５ ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ，配制成２１種培養基組合。在（２２±１）℃、光照度為１ ５００～２ ０００ ｌｘ、光照時間為１３ ｈ／ｄ的條件下誘導愈傷組織形成，４周后統計誘導率并密切觀察愈傷組織生長情況。每個試驗重復３次。

２結果與分析

２．１不同外植體與不同培養基對陜西衛矛愈傷組織誘導的影響

將陜西衛矛的莖段和葉片分別接種于不同的愈傷組織誘導培養基上，表１結果顯示：①莖段誘導率最高，在愈傷組織誘導過程中的反應最早，接種第３天開始膨大，莖段上端切口處變白，７ ｄ左右就能在莖的上端長出愈傷組織，且愈傷組織化程度最高。而葉片整體卷曲膨大，愈傷組織發生較遲，接種２周左右在葉片主葉脈處產生愈傷組織，且愈傷組織化程度低；②不同外植體產生的愈傷組織狀態不同，莖段產生致密、淡綠色的胚性愈傷組織；葉片產生黃綠色偏白的顆粒狀愈傷組織；③幾種基本培養基以ＭＳ的誘導率最高，莖段達８８．２％，葉片達６６．５％；ＮＭＢ和１／２ＭＳ次之；Ｎ６誘導率最低，莖段為６６．４％，而葉片只有５１．２％。莖段和葉片對不同基本培養基的反應較一致。

２．２不同濃度６－ＢＡ和ＮＡＡ對陜西衛矛愈傷組織誘導的影響

激素是影響植物組織培養的關鍵因素，細胞分裂素和生長素的種類和相對濃度不但決定器官脫分化和再分化的方向，而且影響產生的愈傷組織狀態和再分化能力。試驗結果（表２）顯示，６－ＢＡ與ＮＡＡ配合使用誘導產生的愈傷組織致密、為胚性愈傷組織； ３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的植物生長調節劑組合愈傷組織誘導率較高。說明６－ＢＡ和ＮＡＡ在陜西衛矛莖段和葉片愈傷組織誘導中都起促進作用。

３討論

關于衛矛科植物的組織培養研究較多［４，５］，而陜西衛矛愈傷組織再分化研究報道不多。胡麗娟等［３］研究了陜西衛矛的組織培養，發現腋芽容易獲得更多芽苗。本研究發現陜西衛矛不同外植體在愈傷組織誘導過程中生長情況不同，同一外植體不同的濃度激素處理其生長情況也存在不同程度的差異。在不同外植體誘導愈傷組織時，作外植體時莖段與葉片相比縮短了愈傷組織誘導期，誘導率較高，表明莖段為最佳外植體，其次是葉片。外植體在愈傷組織誘導的過程中，對激素種類和濃度的反應差別較大。６－ＢＡ和NAA能促進陜西衛矛莖段和葉片愈傷組織誘導率。最適合外植體愈傷組織誘導的基本培養基為ＭＳ培養基，ＭＳ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖培養條件下形成的愈傷組織多，愈傷組織質量高，正在進一步研究陜西衛矛愈傷組織增殖及再分化，以期獲得大量愈傷組織再生苗。

參考文獻：

［１］ 王軍濤，郭建喜，查振道． 陜西衛矛夏季嫁接試驗［Ｊ］． 陜西林業科技，２００８（３）：３５－３６．

［２］ 劉亞芬，郭甲科．“蝴蝶樹”陜西衛矛［Ｊ］．中國花卉園藝，２０１０（４）：３７．

［３］ 胡麗娟，郭軍戰，王文君，等． 陜西衛矛的組織培養及植株再生［Ｊ］． 植物生理學通訊，２０１０，４６（２）：１５３－１５４．

［４］ 張麗杰，賈斌英，崔建國，等． 桃葉衛矛的組織培養及植株再生［Ｊ］． 植物生理學通訊，２００７，４３（６）：１１２６．

［５］ 尚愛芹，孫振元，趙梁軍． 爬行衛矛下胚軸高頻離體再生體系的建立［Ｊ］． 林業科學，２００９，４５（２）：１３６－１４１．