脾細(xì)胞移植誘導(dǎo)大鼠小腸移植微嵌合體形成的實(shí)驗(yàn)研究＊

姜濤 姜峰奇 朱躍坤 朱安龍 樸大勛

（哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬一院結(jié)直腸外科 黑龍江哈爾濱 150001）

器官移植是針對(duì)于終末期器官功能衰竭的一種有效治療手段，許多新型免疫抑制劑的出現(xiàn)，大大減弱了移植排斥反應(yīng)，延長了移植物的存活時(shí)間及存活率。但存在長期服用抗排斥藥物帶來的副作用及排斥反應(yīng)的反復(fù)發(fā)作，最佳的處理方法是誘導(dǎo)一種持久穩(wěn)定、無需服用藥物的免疫耐受來解決這一難題。通過建立嵌合體誘導(dǎo)免疫耐受是目前解決器官移植的一種有效的嘗試。本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠同種異體節(jié)段性小腸移植模型的基礎(chǔ)上，采用脾細(xì)胞輸注移植觀察移植大鼠的微嵌合體形成，探討微嵌合體形成與移植免疫耐受的關(guān)系。

1 資料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 供體為雄性SD大鼠；受體為雌性Wistar大鼠，均為SPF級(jí)，體重220～260g，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 脾細(xì)胞懸液的制備和移植 供體雄性SD大鼠采用1%戊巴比妥鈉溶液腹腔內(nèi)注射麻醉，無菌條件切取脾臟置于10%肝素鈉鹽水溶液中，將脾臟組織反復(fù)剪切后經(jīng)200目鋼網(wǎng)濾過，濾過液加入5m L淋巴細(xì)胞分離液，離心15min，吸取中層液體加入1640培養(yǎng)液5m L漂洗1次，再次加入1640培養(yǎng)液5m L，即為脾細(xì)胞懸液。

移植前4周將供體SD大鼠的脾細(xì)胞懸液1m L（細(xì)胞總數(shù)為1.5～2.0×107／m L；細(xì)胞活力≥95%）經(jīng)舌靜脈輸注到受體Wistar大鼠體內(nèi)。接受脾細(xì)胞移植的大鼠出現(xiàn)皮膚紅斑，脫毛，腹瀉，體重減輕時(shí)，判為移植物抗宿主反應(yīng)［1］。

1.3 實(shí)驗(yàn)分組 實(shí)驗(yàn)組：供體為雄性SD大鼠12只，受體為接受相應(yīng)供體SD大鼠脾細(xì)胞輸注的雌性Wistar大鼠12只。……