黔產景天三七中總黃酮的醇提工藝優選

何晶晶 杜 江

(貴陽中醫學院藥學院，貴州 貴陽 550002)

景天三七來源于景天科植物費菜(Sedum aizoon L.)和橫根費菜(Sedum kamtschaticum Fisch.)的根及全草，前者在我國廣為分布，后者主要分布于我國北方的河北、山西、內蒙古等地［1］。苗族民間常用其治療一切出血癥、跌打損傷及燙火傷，苗藥名為 deb reib sand qil［2］。味甘、微酸、性平。歸心、肝經。據報道，該藥還可用于防治心臟病、降血壓，治療神經衰弱、失眠、煩躁不安等臨床常見病癥［3，4］。近年來，景天三七作為一種新興的保健蔬菜在民間廣泛應用，在貴陽及其周邊地區也進行了具有規模的人工栽培。景天三七對心腦血管疾病具有防治的主要活性成分為總黃酮［5］，因而本文主要通過對景天三七總黃酮提取工藝進行了研究。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：UV－1800紫外可見分光光度計(日本島津公司)，丹瑞HH－4顯數電子恒溫水浴鍋(金壇市雙捷實驗儀器廠)，AR1140電子分析天平(奧豪斯國際有限公司)，KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥：蒸餾水，甲醇(上海振興化工一廠)、乙醇(重慶川東化工有限公司)、無水乙醇(重慶川東化工有限公司)均為分析純，槲皮素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100081 －200406)。景天三七(Sedum aizoon L.)藥材采自貴州省貴陽市烏當區栽培基地(E106°41.306 ＇、N26°46.176＇)，經貴陽中醫學院趙俊華老師鑒定為費菜(Sedum aizoon L.)的地上部分。

2 方法與結果

2.1 總黃酮的測定方法

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取120℃干燥恒重后的槲皮素標準品0.0075g，用甲醇溶解并定容至25mL，搖勻，得濃度為0.3000mg·ml－1的槲皮素標準溶液。

2.1.2 吸收波長的選擇：取上述槲皮素標準溶液0.5mL，80%乙醇提取的供試液1mL，分別于25mL容量瓶中，用甲醇定容刻度，取各溶液適量至比色皿中，以甲醇溶液作空白對照，在200～400nm波長范圍內分別測定標準溶液及供試溶液的吸光度。兩者在265nm處均有穩定的最大吸收，故選擇此波長作為測定波長(見圖1)。

圖1 樣品和對照品的吸收曲線

2.1.3 標準曲線的制作：分別精密吸取上述槲皮素標準溶液 0.30mL，0.50mL，0.70mL ，0.90mL，1.10ml于 25mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取各溶液適量至比色皿中，以甲醇作空白對照，在256nm處測定各溶液的吸光度A值，以濃度 C對吸光度 A作圖，得回歸方程 A=0.04633C+0.04678(C：μg·mL－1) ，r2=0.99991(n=5)。表明在 3.6 ～13.2μg·mL－1的范圍內，濃度與吸光度呈良好的線形關系。

2.1.4 樣品含量測定：精密吸取提取液0.5mL于蒸發皿中揮干，用甲醇溶解并定容到25mL，取適量至比色皿中，以甲醇為空白試劑，在最大吸收波長處測定各供試液的吸光度，并計算總黃酮含量。

2.1.5 精密度實驗：精密吸取對照品溶液0.5mL于25mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，按“2.1.4樣品含量測定”項下進行操作，平行測定6次，計算吸光度的RSD值為0.28%。表明精密度良好。

2.1.6 穩定性實驗：取同一供試液，按“2.1.4樣品含量測定”項下進行操作，每隔5min測定1次。計算60min內吸光度的RSD值為0.25%，表明吸光度在60min中內穩定。

2.1.7 重復性試驗：取同一批藥材 6份，每份 1.0g，按正交試驗優選的提取工藝進行提取，再按“2.1.4樣品含量測定”項下進行分析，計算樣品中總黃酮含量的RSD值為1.94%(n=6)，表明重復性良好。

2.1.8 回收率實驗：精密稱取已知總黃酮含量的景天三七樣品6份，每份1.0g，加入適量槲皮素對照品，按正交試驗優選的提取工藝進行提取，再按“2.1.4樣品含量測定”項下進行分析，經計算得平均回收率為99.11%，RSD值為2.24%，表明回收率良好。

2.2 提取工藝的優選

2.2.1 乙醇濃度的篩選：取景天三七藥材干燥粉末12份，每份1g，精密稱定，隨機分為4組，各組分別加入90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇和60%乙醇各10mL，于80℃水浴中回流提取2次，每次1h，合并兩次濾液，定容至50.00mL，搖勻。按“2.1.4樣品含量測定”項下操作，計算各樣品中總黃酮含量(見表1)。

表1 乙醇不同濃度對景天三七中總黃酮提取的影響

由以上實驗數據可知，以70%乙醇為提取溶劑的總黃酮含量最高。

2.2.2 正交試驗設計及結果分析：稱取原藥材9份，每份各1g，以總黃酮的含量為指標，考察溶劑用量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)3個主要因素對景天三七醇提工藝的影響。采用L9(34)正交表，同一號平行實驗3次，各提取液過濾后定容至50mL，按“2.1.4樣品含量測定”項下操作，計算其總黃酮含量。

表2 因素水平表

表3 實驗方案及結果表

由以上結果可知，3個因素均無顯著差異，由極差分析結果可知，因素主次順序為C＞A＞B。根據上表結合實際條件可以得出最佳工藝為A1B1C3。即用8倍量的70%乙醇提取3次，每次1h。

2.3 醇提工藝的驗證試驗：取同一批藥材6份，每份1.0g，精密稱定。按上述正交試驗優選的提取工藝進行提取，再按“2.1.4樣品含量測定”項下進行分析，計算總黃酮含量得 28.32 mg·g［－1］，RSD=2.40%。(見表 5)

表5 醇提工藝驗證實驗

3 討論

3.1 實驗前期對藥材提取液采用鹽酸－鎂粉反應及醋酸鉛反應進行了預試，驗證了該藥材中含有黃酮類物質。

3.2 實驗前期采用超聲提取法分別考察了乙醇、甲醇、水對總黃酮提取率的影響，結果顯示采用乙醇為提取溶劑的總黃酮含量最高，故本實驗對乙醇提取工藝進行優選。

3.3 對正交試驗的結果進行方差分析，可知提取次數對藥材中總黃酮含量的影響最大，增加提取次數可使結果明顯增加，故選擇提取3次。趨勢圖中雖顯示溶劑倍量及提取時間均與收得率成正比關系，但因其斜率較小，繼續增加溶劑用量和提取時間對結果的影響也不甚明顯，故本實驗均選用最低值進行提取。工業化生產中可根據實際情況選定合適的提取條件。

［1］國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草(第3冊)［M］.上海：上海科學技術出版社，1999.765－766.

［2］歐志安.湘西苗藥匯編［M］.湖南：岳麓書社，1990.101－102.

［3］王二麗，郭素華.養心草的藥用價值及開發前景［J］.海峽藥學，2010，22(9)：79 －81.

［4］郭素華，黃華花，許飛，等.養心草水提液和醇提液寧心安神藥效比較的實驗研究［J］.福建中醫學院學報，2009，19(4) ：28－ 291.

［5］吳符火，劉雪梅，郭素華.養心草調血脂機制的實驗研究［J］.中國中西醫結合雜志，2006，26(2)：131－134.