黃精中蒽醌類化合物的含量分析△

彭小冰 王和生 楊 濤

(貴陽中醫學院藥學系，貴州 貴陽 550002)

黃精的百合科Liliaceae黃精屬Polygonatum Mill多種植物的根莖，中國藥典(2000版)收載了滇黃精Polygonatum kingianum Coll.et Hemsl、多花黃精 Polygonatum cyrtonema Hua、黃精Polygonatum sibiricum Red3種，在民間同屬其它一些植物根莖也被當作黃精使用。黃精在我國的藥用歷史已逾2000年，祖國醫學認為，黃精性平、葉甘、入脾、腎、肺經，具有補腎益精、滋陰潤燥的功效，長期用于治療腎虛虧損，脾胃虛弱，肺虛燥咳，體倦乏力等癥，同時也是數十種復方滋補藥劑的重要組分。20世紀七、八十年代開始，現代醫學對黃精的研究逐漸增多，藥理研究不斷深入，現已證明黃精具有降低血糖、血脂，保護心血管系統，調節和增強免疫功能，延緩衰老，抗炎，抗病毒等重要藥理作用。同時對黃精的化學成分研究結果也表明，黃精除含有多糖外，還含有蒽醌等活性成分，但其含量的高低未曾見報道，本文對黔產多花黃精Polygonatum cyrtonema Hua中蒽醌類化合物進行了提取和含量測定。

1 儀器和試藥

1.1 儀器：DU－70紫外－可見分光光度計(美國BECKMAN)，索氏提取器，回流提取裝置。

1.2 試劑：氯仿，硫酸，石油醚，醋酸鎂，甲醇均為分析純。

1.3 對照品：1.8－二羥基蒽醌(供含量測定用)中國藥品生物制品鑒定所制。

1.4 藥材：黃精采自貴陽市郊，經貴陽中醫學院藥學系生藥教研室劉芃教授鑒定。

2 方法與結果

2.1 樣品的制備：將黃精藥材粉碎后過80目，用乙醇回流提取至基本無色得醇浸膏。醇浸膏加氯仿提取至無色，過濾，氯仿提取液減壓濃縮至干黃精的乙醇－氯仿提取物;殘渣用水提取，水提液減壓濃縮至干得黃精的乙醇－水提取物。把黃精的乙醇－氯仿提取物和黃精的乙醇－水提取物置于烘箱中，讓溫度保持在60℃左右，烘8小時后放置于干燥器重備用。

2.2 標準曲線的制作：精密稱取1.8－二羥基蒽醌5.50mg，用石油醚定容至 50ml，分別精密吸取 0.40，0.80，1.60，2.00，2.50，3.00，3.50ml置于 25ml容量瓶中，在水浴上揮去石油醚(水浴溫度不超過80℃)，殘渣用0.5%的醋酸鎂－甲醇溶液定容顯色，搖勻使之溶解，用0.5%的醋酸鎂－甲醇溶液做空白，在510nm處測定吸光度，求得回歸方程如下：A= －0.0021+0.0459C r=0.9994。

2.3 乙醇－氯仿提取物中蒽醌的含量測定：精密稱取已烘干的黃精的乙醇－氯仿粗品0.0430g，置于索氏提取器中，用30ml氯仿提取4個小時至提取溶劑氯仿無色，把氯仿溶液轉移至50ml具塞瓶中，用氯仿洗滌圓底燒瓶數次均與氯仿提取物合并，用氯仿定容至刻度搖勻，精密吸取5ml氯仿提取液到250ml的具塞瓶中，把氯仿揮干，用胖肚吸管精密吸取25ml醋酸鎂甲醇溶液至具塞瓶中搖勻使之溶解，30min后測定吸光度值。結果見表1

表1 乙醇－氯仿提取物中蒽醌的含量

2.4 乙醇－水提取物中蒽醌含量的測定：精密稱取黃精的乙醇－水提取物2.40g左右于圓底燒瓶中，加入2.5mol.L－1硫酸30ml在超聲波清洗器中振蕩5min使之完全溶解，加入氯仿30min，回流提取2個小時，把底層的氯仿液吸取置于250ml的具塞瓶中，然后再加入30ml氯仿再回流提取1個小時，重復以上操作四次，合并氯仿液，然后用蒸餾水洗滌數次至水層為中性為止，吸取蒸餾水后，用冷凝回流裝置回收氯仿液至揮干為止，用胖肚吸管精密吸取25ml0.5%的醋酸鎂－甲醇溶液溶解殘留物并顯色，30分鐘后測定吸光度值。測定結果見表2。

表2 乙醇－水提取物中蒽醌的含量(n=5)

2.5 乙醇－水提取物中蒽醌的含量(n=5)：用黃精的乙醇－氯仿提取物作回收率實驗：稱取黃精的乙醇－氯仿提取物約0.02g左右，根據樣品本底值平均含量1：1比例精密加入1.8－二羥基蒽醌標準品，然后按照乙醇－氯仿提取物中蒽醌含量測定步驟進行。測得回收率為98.61%、RSD=3.1%(n=5)。

用黃精的乙醇－水提取物作回收率實驗：稱取黃精的乙醇－水提取物約1.3g左右，根據樣品本底值平均含量按1：1比例精密加入1.8－二羥基蒽醌標準品，然后按照乙醇－水提取物中蒽醌含量測定步驟進行。測得回收率為 101.51%、RSD=0.53%(n=5)。

2.6 穩定性試驗：用乙醇－氯仿提取物按含量測定方法操作，將顯色后的溶液分成兩份，同在室溫下，一份不避光，一份避光置于暗處，分別在0、1、2、3、6小時后測其吸光度。結果見表3。

表3 時間及光照對吸光度的影響

光照對吸光度沒有明顯差異;時間的延長吸光度卻逐漸降低，因此測定最好在顯色后1個小時內完成。

3 討論

用乙醇－氯仿提取的蒽醌衍生物主要是游離蒽醌，而乙醇－水提取的則是結合蒽醌。通過實驗我們發現，在結合蒽醌的含量測定之前的前處理過程中，如果不將樣品中的水和酸除盡，將會使樣品溶液的吸光度值降低，尤其是酸的存在最為明顯，從而使測定結果誤差較大，這是因為酸和水對蒽醌與鎂離子生成的絡合物的穩定性降低所致，下面的實驗結果可以說明：

在15支10ml比色管中分別加入顯色后的蒽醌溶液至刻度，然后分成3組：

第一組：分別加入 0.5%醋酸鎂甲醇溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml搖勻。

第二組：分別加入蒸餾水 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml搖勻。

第三組：分別加入 0.025mol.L －1 的硫酸 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml搖勻。

分別測定以上三組的吸光度值，結果見表4。

表4 0.5%的醋酸鎂－甲醇溶液(a)，水(b)，0.025mol.L －1的硫酸(c)對吸光度的影響

通過以上實驗結果看出：有酸和誰存在的情況下，實驗結果誤差會增大，因為酸可以影響到蒽醌與鎂離子生成的絡合物的穩定性，從而使測量值下降，而水除了有稀釋作用以外，還可以和酸一樣降低蒽醌與鎂離子生成絡合物的穩定性，但相對酸的影響要小很多，所以在實驗過程中一定不能有酸和水的介入，在結合蒽醌的前處理過程中，用水洗滌至中性是很關鍵的，由于酸的影響遠大于水，所以在此過程中一定要水洗至中性為止，在最后蒸干氯仿的同時也必須將水蒸干。

測定結果可以看出，黃精中的蒽醌含量并不高，且大多數蒽醌于游離態形式存在于原藥材中。

［1］姚桂根，孫小萍，等.用醋酸－甲醇比色法測定何首烏及其制劑中蒽醌類成分的含量［J］.中草藥，1983.14(6)：15－18.