苗藥石葦多糖及總糖的含量測定△

楊武德 崔 敏 王 翔

(貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002)

石葦為水龍骨科植物石葦 Pyrrosia lingua(Thunb.)Farwell的葉，性微寒，味苦甘，具有利尿通淋，清肺止咳，涼血止血的功效［1］，臨床上主要用于治療熱淋、血淋、石淋，小便不通，淋瀝澀痛，肺熱喘咳，吐血，血崩等癥狀。

中藥多糖，有增強機體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，而幾乎沒有毒性，越來越引起國內外科學家的重視［2、3］。本實驗以雷山縣的石葦為原料，初步研究其多糖提取分離技術和植物中多糖及總糖的含量，對石葦的質量評價提供試驗依據。本文采用硫酸－苯酚法分析石葦多糖及總糖，靈敏度高、簡便、快捷，測定結果準確。

1 儀器與材料

UV2501PC型紫外可見分光光度計(日本島津公司);植物樣品粉碎機，DK－98－1型電熱恒溫水浴鍋(天津市泰斯特儀器有限公司)，GZX－GF101－1－S－Ⅱ型電熱恒溫鼓風干燥箱(上海賀德實驗設備有限公司)，JT1003型精密電子天平(余姚市金諾天平儀器有限公司)，TDL－5型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。蒸餾水，95%乙醇、無水乙醇、石油醚、葡萄糖、98%濃硫酸，5%重蒸苯酚(所有試劑均為分析純)。

石葦藥材采于貴州省雷山縣。經貴陽中醫學院鑒定教研室孫慶文老師鑒定為正品石葦(Pyrrosia lingua(Thunb)Farwell)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備：精密稱取經105℃干燥至恒重的無水葡萄糖611.2mg，置于1000ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得611.2mg·L－1的葡萄糖溶液。再精密吸取此溶液 15ml定容至 25ml，即得 366.72 mg·L－1的對照品溶液。

2.2 標準曲線的制作：精密吸取葡萄糖對照品溶液0.0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5，1.8ml，分別置于 25ml比色管中，體積不足2 ml的用蒸餾水補足至2 ml，分別精密加入5%的苯酚溶液1 ml，濃硫酸3 ml，搖勻，置于沸水中加熱15min，取出，放置于冷水冷卻5min，取出，于491.0nm波長處測定吸收度。以吸收度A為縱坐標，以葡萄糖的濃度C為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為 A=0.0047C－0.1025，r=0.9993。結果表明葡萄糖在 55.008 ～330.048 mg·L－1之間線性關系好。

2.3 多糖的測定

2.3.1 石葦多糖的提取與精制：取產地為雷山的石葦樣品，經60℃烘干，粉碎后，過3號篩，再于60℃烘干至恒重，精密稱取石葦粉末20g紙包好置于索氏提取器中，經石油醚回流提取脫脂、色素2次(3h，3h)，棄去提取液，藥渣揮去溶媒后，經80%的乙醇回流提取2次(4h，4h)。藥渣揮去溶媒后，加蒸餾水經100℃水浴提取3次(250ml，200ml，200ml)，每次2h，合并藥液，抽濾濃縮后，用Sevage法離心脫蛋白(3000 r·min－1)，得多糖液，裝入半透膜，滴水透析24h，加入無水乙醇使乙醇質量分數達到80%，放置24h(4℃冰箱中)，取出離心(3000r·min－1)得多糖沉淀，再用丙酮、氯仿及無水乙醇洗滌2次，60℃烘干恒重即得續斷精制多糖，置于干燥器中備用。

2.3.2 換算因素的測定：精密稱取經60℃干燥至恒重的續斷多糖4.0mg(6份)，溶解，稀釋，定容至50 ml，精密量取2 ml，按“2.2”項下方法操作，并測定吸收度，結果：平均換算因素 f=1.032，RSD 為1.3%(n=6)。

公式：換算因素 f=w/(C×D)

式中：w為多糖的質量(mg);C為樣品中葡萄糖質量濃度(mg·L－1);D為稀釋因素。

2.4 供試溶液制備：石葦供試品經60℃烘干，粉碎，過3號篩，再于60℃烘干至恒重，稱取供試品約1.0g，精密稱定，按“2.3.1”項下操作脫脂、色素，除去單糖、低聚糖及醇溶性雜質;至100℃水浴提取3次，合并濾液，濃縮并定容至100ml，精密吸取10ml加水稀釋定容至50ml即得。

2.5 方法學考察

2.5.1 精密度試驗：精密吸取石葦供試品溶液2.0ml，快速連續測定6次吸光度，按照標準曲線制作項下的條件進行測定，結果：平均吸光度為0.4112，RSD為1.1%(n=6)，表明該儀器的精密度良好。

2.5.2 穩定性試驗：精密吸取石葦供試品溶液2.0ml，按照標準曲線項下操作，每隔0.5h測定1次吸光度，總共測6 次，結果：平均吸光度為 0.4100，RSD=0.38%(n=6)，表明該儀器的穩定性良好。

2.5.3 重復性試驗：精密稱取雷山縣的石葦樣品粉末1.0g(6份)，精密稱定，按照供試品的制備方法制備供試液，按照標準曲線制作項下的相同條件進行測定，結果：平均含量為5.472%，RSD為2.2%，有較好的重復性。

2.5.4 回收率試驗：稱取石葦樣品粉末0.5g(9份)，精密稱定，經石油醚、乙醇分別提取后，分別加入一定量的葡萄糖對照品溶液(加入葡萄糖量分別按樣品量含量的80%，100%，120%各3份)，按照石葦供試品的制備方法制備供試液，并測定，結果見表1。

2.5.5 樣品中多糖的測定：稱取石葦供試品1.0g(6份)，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備供試液，并測定，結果：石葦多糖平均百分含量為5.49%，RSD為0.77%(n=6).

多糖含量%=(C×D×f/w)×100%

式中：C 為葡萄糖濃度(mg·L［－1］)，D 為稀釋因素，f為換算因素，w為石葦的質量(mg)。

表1 加樣回收率試驗結果(n=9)

2.6 總糖的測定

2.6.1 石葦總糖供試品溶液的制備：取產地為雷山的石葦樣品，經60℃烘干，粉碎后，過3號篩，再于60℃烘干至恒重，精密稱取石葦粉末1.0g紙包好置于索氏提取器中，經石油醚回流提取脫脂、色素2次(3h，3h)，棄去提取液。藥渣揮去溶媒后，加水50ml經100℃水浴提取3次(3h，2h，2h)，合并慮液，濃縮定容至100ml，精密吸取2ml母溶液定容至25ml即得。

2.6.2 重復性試驗：精密稱取石葦樣品粉末1.0g(6份)，精密稱定，按照總糖供試品的制備方法制備供試液，按照標準曲線制作項下的相同條件進行測定.結果：平均含量為17.27%，RSD為1.56%(n=6)，有較好的重復性。

2.6.3 回收率試驗：稱取石葦樣品粉末0.5g(9份)，精密稱定，經石油醚分別提取后，分別加入一定量的葡萄糖對照品溶液(加入葡萄糖量分別按樣品量含量的80%，100%，120%各3份)，按照總糖石葦供試品的制備方法制備供試液，并測定，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果(n=9)

2.6.4 樣品總糖的測定：稱取石葦供試品1.0g(6份)，精密稱定，按照總糖供試品溶液的制備方法制備供試液，并測定，結果：石葦總糖平均百分含量為17.66%RSD為1.36/%(n=6).

3 結論

本實驗采用苯酚－硫酸法測定石葦中總糖和多糖的含量。該法靈敏度高，簡便，快捷，測定結果準確。

實驗表明，石葦中多糖含量約為5.49% ，總糖含量約為17.66% 。本實驗為石葦用藥提供參考。

［1］國家藥典委員會.中國藥典一部［M］.2010版.中國醫藥科技出版社，2010，(83).

［2］梁光義.中藥化學［M］.北京：中國古籍出版社，2005.8：283.

［3］伍 蕓，丁 莉.五鶴續斷多糖的提取及動態分布規律的研究［J］.時珍國醫國藥，2009，20(6)：1325－1326.