HPLC法測定了哥王藥材不同藥用部位西瑞香素的含量△

沈沫凡 李 瑋 王建科 林 昶 郭建民 楊長福 楊 艷

(貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002)

了哥王為瑞香科蕘花屬植物南嶺蕘花 Wikstromia indica(L.)C.A.Mey，其根、莖葉分別入藥，性苦、辛、寒，有毒。了哥王莖葉具有清熱解毒，化痰散結，消腫止痛的功效;主治癰腫瘡毒，瘰疬，風濕病，跌打損傷，蛇蟲咬傷。了哥王根具有清熱解毒，散結逐瘀，利水殺蟲的功效;主治肺炎，支氣管炎，腮腺炎，咽喉炎，淋巴結炎，乳腺炎，風濕性關節炎，水腫膨脹，麻風，跌打損傷［1］。現代藥理及臨床研究表明，了哥王具有消炎、解毒、鎮痛等作用［2］。西瑞香素是了哥王主要藥效成分之一，不僅具有明顯改善小鼠心肌營養血流量的作用［3］，也可顯著降低大鼠腎上腺內維生素C的含量，可促進單核巨噬細胞的吞噬作用，有利于炎癥的恢復;同時又具有較好的抗炎、抗腫瘤作用［4－5］。為了評價藥材質量，也為臨床用藥提供依據，本實驗通過HLPC法測定了了哥王不同藥用部位西瑞香素的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：LC－20AT高效液相色譜儀(LC－20AT二元梯度泵、SPD－20A檢測器，日本島津);遠紅外干燥箱(YHG－600－S－Ⅱ，上海賀德實驗設備有限公司);十萬分之一電子天平(AUW220D，日本島津)，超聲清洗機(HS10260D，天津恒奧科技公司);粉碎機(浙江省溫嶺市大鵬機械有限公司)。

1.2 試藥：西瑞香素對照品(自制，經HPLC峰面積歸一化計算，含量大于98%)，甲醇為色譜醇，水為娃哈哈純凈水;其余試劑均為分析純。了哥王藥材采自廣東羅定，經貴陽中醫學院生藥教研室周漢華教授鑒定為瑞香科植物南嶺蕘花 Wikstroemia indica(L.)C.A.Mey.。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適應性試驗：色譜條件：色譜柱為Alltima C18 柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流動相：甲醇 －0.1%磷酸水溶液(52∶48);檢測波長：345 nm;流速：1.0 mLμmin－1;柱溫：30 ℃;進樣量：10μL。在此條件下，對照品、供試品在15 min相同時間有同一色譜峰，見圖1、圖2。

圖1 對照品液相色譜圖

圖2 供試品液相色譜圖

2.2 樣品溶液的制備：稱取了哥王樣品0.2 g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，稱定重量，85℃的水浴回流30 min，放冷至室溫，補足減失的重量，濾過，取續濾液以0.45 μm微孔濾膜濾過，作為樣品溶液。

2.3 對照品溶液的制備：精密稱取在五氧化二磷(P2O5)中干燥至恒重的西瑞香素對照品適量，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成0.156 mgμmL－1的西瑞香素對照品溶液，經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 線性關系的考察：精密吸取濃度為0.156 mg/mL的西瑞香素對照品溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mL，分別置于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取10μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定對照品峰面積，以西瑞香素的質量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，將進樣量與峰面積進行線性回歸，得回歸方程：y=3×106x+7177.2，r=0.99995，西瑞香素對照品進樣量在 0.078 ～0.624 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系，見圖3。

圖3 西瑞香素的標準曲線圖

2.5 精密度試驗：精密吸取同一份對照品溶液10 μL，按2.1項下色譜條件，重復進樣7次進行測定。實驗結果表明，RSD值為2.44%，儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗：精密稱取同一樣品粉末6份，每份0.2 g，按供試品溶液制備項下方法制備并測定，結果表明RSD值為1.25%，試驗方法可靠。

2.7 穩定性試驗：精密稱取樣品粉末0.2 g，按供試品溶液制備項下方法制備。精密吸取供試品溶液10 μL，按上述色譜條件，每隔0.5 h，測定供試品溶液中西瑞香素的含量，結果表明，RSD值為2.85%，3小時內含量穩定。

2.8 加樣回收率試驗：精密稱取已知含量的樣品粉末6份，每份約0.1 g，分別加入西瑞香素對照品0.34 mg，按供試品溶液的制備方法制備并測定，計算回收率，實驗結果表明，平均回收率為98.04%，RSD值為2.72%，說明采用上述實驗條件進行含量測定，重現性好，準確可靠。見表1。

表1 加樣回收率試驗結果

3 了哥王藥材不同部位西瑞香素含量測定

廣東羅定市了哥王根、莖、細枝、葉西瑞香素含量測定結果，見表2。

表2 了哥王藥材不同部位西瑞香素的含量測量結果

4 結果與討論

4.1 實驗表明，了哥王藥材不同部位西瑞香素平均百分含量葉部最高，根部最低，分別為0.414%、0.093%，了哥王藥材不同部位的西瑞香素含量有較大差異。

4.2 了哥王不同部位的作用不盡相同，研究表明了哥王根的提取物、水煎劑有引產作用和抗腫瘤作用，根皮能治療肺部炎癥、慢性支氣管炎且具有有瀉下作用;莖的甲醇提取物具有鎮靜、抗炎和抗腫瘤的作用［6］;葉能治痰火疬、瘡瘍乳癰、無名腫毒、婦科風結腹痛、梅毒、下疳等［7］。了哥王不同藥用部位的功效是否與西瑞香素含量的差異有關，有待我們進一步研究。

［1］南京中醫藥大學.中藥大辭典(第二版)［M］.上海：上海科學技術出版社，2006：255－256.

［2］楊振宇，杜智敏.了哥王水煎液的抑菌作用研究［J］.哈爾濱醫科大學學報，2006，40(5)：362－364.

［3］謝培山，楊景鵬.了哥王化學成分的研究－西瑞香素(Daphnoretin)的分離、鑒定［J］.中草藥通訊，1978，3：1－2.

［4］Wang Li Yan，Noriko U，Susumu K.Lignans from the Roots of Wikstroemia indica and Their DPPH Radical Scavenging and Ni2tric Oxide Inhibitory Activity［J］.Chem Pharm Bull，2005，53(10)：1348 －1351.

［5］倪剛，王艷.三越了哥王片治療急性化膿性扁桃體炎30例［J］.浙江中醫雜志，2002：37(7)：319.

［6］胡熙明，宋立人，胡烈等.中華本草［M］.上海：上海科學技術出版社，1996，1178.

［7］田代華.實用中藥辭典［M］.北京：人民衛生出版社，2002：43－45.