小半夏加茯苓湯及其拆方中多糖的含量比較△

李 力 彭小冰 何前松 馮 泳 林 杉

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550002)

小半夏加茯苓湯(Xiaobanxia－Fuling Decoction，XBFD)由半夏、生姜、茯苓三味藥組成，主治停飲嘔吐，心下痞悶，頭眩心悸。現(xiàn)代研究［1］表明小半夏加茯苓湯含有許多化學(xué)成分［2］，如揮發(fā)油、生物堿、多糖等;同時(shí)研究［3、5］還表明原方中茯苓含有的主要成分多糖具有許多生物活性(如提高免疫功能、抗腫瘤、抗病毒作用等)。本文研究復(fù)方及其拆方中多糖含量的變化，采用苯酚－硫酸法測(cè)定多糖的含量，結(jié)果表明復(fù)方中的多糖含量是最高的，為研究小半夏加茯苓湯止嘔物質(zhì)基礎(chǔ)提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1 儀器及試劑

1.1 試劑：葡萄糖對(duì)照品(天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心)，苯酚、濃硫酸均為分析純。

1.2 儀器：紫外分光光度計(jì);AB2655電子天平(十萬(wàn)分之一);DK－98－1型水浴鍋;100g手搖式高速中藥粉碎機(jī)(DTT－100);HS10260D型超聲清洗機(jī)。

2 方法及結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制：精密稱取105℃干燥恒重的葡萄糖10mg加水溶解并定容至100ml量瓶中，即得0.1mg.mL－1的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備：取半夏0.6g生姜0.5g茯苓0.3g于具塞錐形瓶中，加入1mol.L－1NaoH 溶液30ml，超聲提取30min，過(guò)濾，取續(xù)濾液2.0ml于50ml容量瓶，加水定容至刻度，從中取出0.2mL分別加入5%苯酚溶液1.0ml、加入濃硫酸 5.0ml，搖勻，備用。

2.3 確定最大吸收波長(zhǎng)：取對(duì)照品溶液0.2mL，按2.2供試品溶液的制備的方法操作，以相應(yīng)的試劑同法制作空白;另取制備好的供試品溶液0.2mL，用紫外－可見(jiàn)分光光度儀對(duì)對(duì)照品溶液和供試品溶液在270－700nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果在488nm波長(zhǎng)處具有最大的吸收(見(jiàn)圖1)。

圖1 各溶液紫外波長(zhǎng)掃描圖譜

2.4 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的繪制：精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 和 0.8ml置于 10ml試管中，分別加水至0.8ml再分別加入5%苯酚溶液1.0ml，等充分混合后，加入濃硫酸5.0ml，再充分混合，放置50min，另取1ml水，以上述同樣的方法操作，作空白對(duì)照液。在488nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度。以葡萄糖的濃度C為橫坐標(biāo)、吸收度A為縱坐標(biāo)，求得標(biāo)準(zhǔn)曲線為：y=0.9561x+0.005(R=0.9997)。結(jié)果表明葡萄糖在 2.8571 ～11.4286?g.mL－1呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)：取標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液0.2mL，照2.2測(cè)定方法制備標(biāo)準(zhǔn)品供試液和空白對(duì)照液，在488nm波長(zhǎng)處重復(fù)測(cè)定5次。其結(jié)果RSD為0.379%，表明儀器的精密度較好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密量取對(duì)照品溶液0.2mL，在波長(zhǎng)488nm處進(jìn)行測(cè)定，并在室溫下每隔10min測(cè)1次，連續(xù)測(cè)6次。結(jié)果表明溶液在1h內(nèi)穩(wěn)定，其RSD為0.064%。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)：稱取樣品6份，按照2.2供試品溶液的制備方法制備供試液并進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果多糖平均含量為12.2154g·g－1，RSD=2.151% ，表明樣品的重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn)：分別取樣品9份，每份約0.7 g，精密稱定，分別加入一定量的對(duì)照品，按照2.2供試品溶液測(cè)定方法樣品處理方法處理并測(cè)定，結(jié)果平均回收率分別為99.89%、97.01%、102.46%;RSD 值依次為 1.280%、1.424%、1.170%。

表1 樣品含量測(cè)定結(jié)果

2.9 樣品測(cè)定：稱取復(fù)方、半夏+生姜、茯苓+生姜、茯苓+半夏、半夏、茯苓各3份，精密稱定，按2.2供試品制備的方法分別制備樣品供試液及空白對(duì)照液，在488nm處測(cè)定吸光度，按照回歸方程計(jì)算多糖含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)［6］多糖類(lèi)成分主要的藥理作用為增強(qiáng)免疫，本文研究小半夏加茯苓湯復(fù)方及其拆方中多糖含量的變化，結(jié)果表明復(fù)方的多糖含量最高，之后依次為茯苓+半夏、茯苓、茯苓+生姜、半夏、半夏+生姜。從結(jié)果上看復(fù)方的多糖含量位居之首，而文獻(xiàn)報(bào)道中［7］得知復(fù)方止嘔作用最好，那多糖是否為止嘔作用的有效成分之一或輔助成分、多糖是否只能輔助機(jī)體提高自身抵抗力還是既增強(qiáng)了免疫又對(duì)嘔吐有直接或間接抑制作用還有待藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究考察，同時(shí)也為藥效止嘔作用的物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了參考。

在含量測(cè)定中沒(méi)有做生姜的含量測(cè)定，是因?yàn)樵诖_定最大吸收波長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)中已證明生姜中幾乎不含糖，不影響復(fù)方總糖量。多糖的含量測(cè)定還有用多糖水解為還原糖的碘量法測(cè)定，但由于碘量法的操作麻煩，且結(jié)果一般不夠理想，所以用比色法測(cè)定小半夏加茯苓湯的多糖含量，反應(yīng)穩(wěn)定，測(cè)定結(jié)果較好。苯酚－硫酸比色法是測(cè)定多糖含量較為經(jīng)典有效的方法之一，如果時(shí)間允許，只要重復(fù)操作，減少操作誤差，在穩(wěn)定性，回收率等方面都具有明顯的優(yōu)越性。

［1］馮泳，何前松，時(shí)京珍，等.小半夏加茯苓湯的研究概況［J］.江蘇中醫(yī)藥，2008，40(2)：84 －85.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：110.

［3］李 俊，韓向暉，李仲洪，等.茯苓多糖的提取及含量測(cè)定［J］.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2000，2(1)：49 －50.

［4］翟偉宇.茯苓多糖的藥效學(xué)研究［J］.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院報(bào)，2005，8(26)：935.

［5］黃才歡，李炎，王秀芬.茯苓多糖的提取及其結(jié)構(gòu)表征［J］.廣州食品工業(yè)科技，2007，5(17)：13 －15.

［6］張璐，劉強(qiáng).茯苓多糖制備工藝及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2006.4(12)：62 －63.

［7］馮 泳，劉文，李江.小半夏加茯苓湯及其拆方止吐藥效的對(duì)比性研究［J］.貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，3(1)：54.