苗藥土三七栽培品中總酚酸的含量測定

殷 海 秦翠玲 杜 江

(貴陽中醫學院，貴州 貴陽 550002)

苗藥三七為景天科植物土三七(費菜)Sedumaizoon L.的根及全草，多鮮用，又稱為血山草、打不死、曬不干等、苞菜還陽等，是苗族民間常用于治傷止血的藥物，故被譽為骨傷圣藥。近年來，土三七的食用和觀賞價值逐漸被認識，其防治心腦血管疾病的活性也受到重視，對其研究也在不斷深入。目前在貴州已具有一定的人工種植規模，具有產業化前景。總酚酸是土三七中抗氧［1－5］化、止血方面的重要物質，因而其含量與藥材的品質息息相關。國內僅付煜榮［5－8］等人利用高效液相色譜法和分光光度法分別對土三七中沒食子酸和總酚酸含量進行了相關研究。但由于地區不同，藥材成分及其含量可能會有明顯的差異，目前對于黔產土三七的研究仍處于空白狀態，故對黔產品種的品質研究是相當必要的。

1 儀器與試劑

UV－1800島津紫外分光光度計(SHMADZU CORPORATION)，梅特勒－托利多New classic型電子天平(梅特勒－托利多儀器(上海)有限公司)，KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

沒食子酸對照品購自中國藥品生物制品檢定所。土三七采自貴州省貴陽市烏當區，經本校中藥學專業趙俊華教授鑒定為費菜(Sedumaizoon L.)全草。甲醇(上海振興化工一廠)、無水乙醇(重慶川東化工有限公司)及其它試劑均為分析純，純凈水(貴陽市娃哈哈食品有限公司)。

2 方法與結果

2.1 紫外分光度法的方法學考察

2.1.1 對照品溶液的制備：精密稱取一定量沒食子酸的對照品，用無水乙醇溶解，定容配成沒食子酸(50.50 μg/m L)貯備液液。

2.1.2 供試品溶液的制備：精密稱取土三七藥材粉末約1g，加8倍量70%的乙醇回流提取3次，每次60min。過濾、合并慮液，定容至50.00 m L，精密吸取提取液0.40 m L，水浴揮干，加無水乙醇定容至25 m L，即得。

2.1.3 檢測波長的測定：取一定量的對照品溶液與供試品溶液，同時以相應的溶劑為空白對照，分別用紫外分光光度儀掃描200nm－400nm波長范圍內，測定結果表明對照品溶液，供試品溶液均在273nm處有最大吸收，因此選擇273nm為測定波長(見圖1)。因此確定328 nm為最示波長。

圖1 對照品與供試品溶液吸收波長的選擇

2.1.4 標準曲線繪制：精密移取對照品貯備液3.00、3.50、4.00、4.50、5.00 和 5.50mL 置于 25 m L 量瓶，加無水乙醇至刻度，在273nm處測定，記錄吸光度A，以A為縱坐標，以含量C為橫坐標，求得回歸方程為：A=0.04841C+0.05652，r=0.99984(C：μg·ml－1)。結果表明沒食子酸含量在 6.060 ～ 11.110 μg·ml－1范圍內，線性關系良好(見圖2)。

2.1.5 精密度試驗：精密吸取3.0 m L對照品溶液6份，分別置于25 m L量瓶加無水乙醇定容，在273nm處測定吸光度，結果RSD為1.41%(n=6)，精密度良好。

圖2 沒食子酸的標準曲線

2.2.6 重現性試驗：精密稱取1.0 g同一批藥材6份，按“2.2.2供試品溶液的制備”項下進行操作，在273nm處測定吸光度，結果RSD為1.00%(n=6)。表明本方法重現性良好。

2.2.7 穩定性試驗：按“2.2.2供試品溶液的制備”項下的方法制備供試液一份，于室溫下放置 15、20、25、30、35、40、45、50、55、60 min 后，取適量分別在 273nm 處測定吸光度，結果RSD為0.15%，結果表明樣品在15～60 min內穩定。

2.2.8 回收率試驗：精密稱取已知總酚酸含量的樣品6份，分別加入一定量沒食子酸對照品，按“2.2.2供試品溶液的制備”項下的方法制備供試液，在273nm處測定吸光度，結果測得沒食子酸的回收率為99.87%(見表1)。

表1 總酚酸測定的回收率(n=6)

2.2 樣品測定：精密稱取土三七樣品3份制備供試品溶液，測定吸光度，按回歸方程計算總酚酸的含量，結果見表2。

表6 樣品測定試驗結果

3 討論

3.1 國內外的各種研究表明，總酚酸是苗藥土三七的活性部位，而苗藥土三七的總酚酸中沒食子酸的含量相對較高，所以選擇沒食子酸作為對照品。運用分光光度法測定了土三七中總酚酸的含量，方法簡單，重現性好，可作為土三七質量控制的方法之一。

3.2 試驗過程中曾考察了不同溶劑(甲醇、乙醇、水)，用于土三七中總酚酸的提取，結果表明乙醇的提取率最高;提取方法考察了超聲提取法和回流提取法，由于不同地區的土三七存在差異性，本試驗采用的藥材通過方差分析圖和趨勢圖試驗結果表明，采用8倍量的70%乙醇回流提取3次提取率最好。從分析結果計算，土三七乙醇提液中沒食子酸含量占總酚酸的3.25%。其余酚酸成分有待進一步研究。

3.3 目前，2010年版藥典尚未收錄有關土三七質量控制標準，本文建立了測定土三七中總酚酸含量的方法，該方法簡單、快捷，重現性好，可用于該藥的質量控制及定量分析。同時對含總酚酸和沒食子酸的其它藥材分析具有重要參考價值。

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