苗藥芪膠升白膠囊對環磷酰胺所致小鼠毒性反應的實驗研究△

王雷鳴 劉 莉 梁 冰 李淑芳 郝小燕 肖海濤

(1.貴陽醫學院藥理學教研室，貴州 貴陽 550004; 2.貴陽醫學院分析化學教研室，貴州 貴陽 550004;3.貴陽德昌祥藥業有限公司，貴州 貴陽 550004)

根據全國第三次死因回顧性抽樣調查結果，惡性腫瘤已是當前我國居民非自然死亡的主要原因之一，其死亡率僅次于心腦血管疾病［1］。惡性腫瘤臨床治療方法以化療為主。化療能有效殺死腫瘤細胞，改善患者預后，但帶來骨髓抑制、免疫力低下及肝、腎功能損害等副作用，尤以骨髓抑制后果嚴重，重者需中止治療［2］。目前，減輕腫瘤治療毒性的藥物以西藥為主，但西藥存在著價格昂貴、效果不穩定、毒副反應多等問題，極大制約了其臨床應用。故尋找安全有效、價格低廉的藥物對于防治腫瘤治療的毒性反應具有十分重要的意義。芪膠升白膠囊是貴州民間傳統苗藥驗方，具有理氣生血等功效，但相關藥理研究報道甚少。本文對芪膠升白膠囊對環磷酰胺引起的小鼠毒性反應的作用進行初探，旨在為其臨床應用提供更多理論依據。

1 材料

1.1 藥品與試劑：芪膠升白膠囊由貴陽德昌祥藥業有限公司提供(批號：20111245);注射用環磷酰胺(Cyclophosvnamide，CTX，江蘇省恒瑞醫藥股份有限公司，批號：10051921)。

谷丙氨酸氨基轉移酶(ALT/GPT測定試劑盒，20101130)、谷草氨酸氨基轉移酶(AST/GOT測定試劑盒，2010070037)、尿素氮(BUN測定試劑盒，20101129)和肌酐(Cr測定試劑盒，20101201)，均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 動物：昆明種小白鼠，雌雄各半，體質量18g～22g，貴陽醫學院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK黔2002－0001。

2 方法

2.1 動物分組與造模：將小鼠隨機分成5組：空白對照組(蒸餾水20mL·kg－1)、模型(CTX)組(蒸餾水 20mL·kg－1)及芪膠升白膠囊低劑量組(0.5g·kg－1)、中劑量組(1.0 g·kg－1)、高劑量組(2.0 g·kg－1)，每組 10 只，雌雄各半。各組每天ig 1次，連續11d。第10d和11d，ig后，模型組和藥物組ip CTX 100 mg·kg－1，復制毒性反應模型;空白對照組ip生理鹽水。第12d摘眼球取血，將小鼠頸椎脫臼處死，分別取胸腺、脾臟及右側股骨骨髓。

2.2 指標檢測

2.2.1 外周血白細胞計數(WBC)和紅細胞計數(RBC)：取新鮮血20μL，與0.38mL白細胞稀釋液混勻，從中取少量充池，光學顯微鏡低倍鏡(10×10)下，計數四角4個大方格內白細胞數，其總數乘以50000，即得1 mL血液內白細胞數。

取新鮮血10μL，與2mL紅細胞稀釋液混勻，從中取少量充池，光學顯微鏡高倍鏡(10×40)下，計數中央大方格內四角和正中共5個中方格內細胞，其總數乘以10000，即得1 μL血液內紅細胞數。

2.2.2 骨髓涂片有核細胞計數：將小鼠左側股骨中的骨髓用小鼠血清沖出，過4號針頭，制骨髓涂片，瑞士－吉姆薩染液染色。光學顯微鏡觀察骨髓增生情況，高倍鏡下觀察骨髓涂片，計數單個視野下的有核細胞數。

2.2.3 血片中性粒細胞與淋巴細胞比值(中性/淋巴)：取新鮮血液約20μL，制作血涂片，瑞士－吉姆薩染液染色。光學顯微鏡低倍鏡(10×10)下，計數單個視野下，中性粒細胞數和淋巴細胞數，計算中性/淋巴值。

2.2.4 臟器指數：稱量動物體重及胸腺和脾臟，按下式計算胸腺指數和脾臟指數：

2.2.5 肝、腎功能測定：檢測血清中 ALT、AST、BUN 和Cr，按試劑盒說明書操作。

2.3 統計學方法：應用SPSS 13.0統計軟件，作組間 t檢驗分析，以α=0.05為檢驗水準。

3 結果

3.1 外周血WBC和RBC：見表1。與空白對照組比較，CTX模型組WBC、RBC均明顯降低，WBC差異有顯著性統計學意義(P＜0.01)。與CTX模型組比較，芪膠升白膠囊高、中、低劑量組WBC明顯升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，RBC有輕微的增高但差異未見統計學意義(P＞0.05)。

3.2 骨髓涂片有核細胞數和中性/淋巴值：見表1。與空白對照組比較，CTX模型組骨髓涂片有核細胞數和中性/淋巴明顯較低，差異具有顯著性統計學意義(P＜0.01)。與CTX組比較，芪膠升白膠囊高、中、低劑量組的骨髓涂片有核細胞數明顯增高，有顯著性差異 (P＜0.01);血涂片中性/淋巴比值明顯增高，差異有統計學意義(P＜0.05)。

3.3 臟器指數：見表1。CTX模型組胸腺指數及脾臟指數明顯低于空白對照組，差異具有統計學意義(P＜0.01)。與CTX組比較，芪膠升白膠囊高、中、低劑量組的胸腺指數及脾臟指數高于CTX模型組，差異有統計學意義(P＜0.05)。

表1 芪膠升白膠囊對小鼠外周血WBC，RBC，骨髓片有核細胞數，血片中性/淋巴比值，胸腺、脾臟指數的影響(，n=10)

表1 芪膠升白膠囊對小鼠外周血WBC，RBC，骨髓片有核細胞數，血片中性/淋巴比值，胸腺、脾臟指數的影響(，n=10)

與空白對照組比較，△P ＜ 0.05，△△P ＜ 0.01;與模型組比較，* P ＜ 0.05，＊＊P ＜ 0.01。

組別 WBC計數( ×109·L－1)RBC計數( ×1012·L－1)有核細胞數目(單個視野下)胸腺指數(mg·g－1)脾臟指數(mg·g－1)72 ±0.38 5.07 ±0.11 CTX 模型組 2.96 ±0.54△△ 8.24 ±2.19 10.00 ±1.91△△ 0.43 ±0.03△△ 1.82 ±0.28△△ 3.67 ±0.55△△芪膠升白膠囊低劑量組 3.57 ±0.68* 8.28 ±2.09 26.63 ±4.84＊＊ 0.59 ±0.12* 2 .19 ±0.50* 4.03 ±0.69*芪膠升白膠囊中劑量組 3.79 ±1.48* 8.55 ±2.05 28.00 ±6.32＊＊ 0.61 ±0.22* 2 .59 ±0.38* 4.52 ±0.63*芪膠升白膠囊高劑量組 4.26 ±1.84* 8.67 ±1.95 28.83 ±5.88＊＊ 0.68 ±0.27* 3.06 ±0.59* 4.87 ±0.99*空白對照組 5.16 ±1.56 9.14 ±2.86 19.17 ±4.12 0.68 ±0.09 3.

3.4 肝、腎功能：見表2。與空白對照組比較，CTX模型組ALT，AST，BUN和Cr均明顯增高，ALT，AST和Cr的差異有統計學意義(P＜0.05)。與CTX模型組比較，芪膠升白膠囊高劑量組ALT水平有所升高，差異具有統計學意義(P＜0.05)，其余指標未見統計學差異(P＞0.05)。

表2 芪膠升白膠囊對小鼠ALT，AST，BUN和Cr的影響(，n=10)

表2 芪膠升白膠囊對小鼠ALT，AST，BUN和Cr的影響(，n=10)

與空白對照組比較，△P＜0.05;與模型組比較，*P＜0.05。

58.19 ±3.85 7.26 ±3.06 6.82 ±0.65 29.97 ±1.10 59.26 ±1.32 7.00 ±1.49 6.67 ±0.69 CTX 模型組 36.45±6.53△ 64.07±8.16△ 8.63±3.31 7.48±1.59△芪膠升白膠囊低劑量組 31.70 ±4.37 59.31 ±5.39 7.14 ±2.83 7.18 ±2.58芪膠升白膠囊中劑量組 31.73 ±2.88 60.25 ±4.75 7.07 ±2.36 6.83 ±1.40芪膠升白膠囊高劑量組 28.34 ±3.85*空白對照組

4 討論

環磷酰胺作為常用的烷化劑類化療藥，直接破壞DNA結構并影響其復制和轉錄功能，抑制細胞分裂。其抗瘤譜廣，臨床應用廣泛，但有嚴重副作用，主要是抑制造血系統和免疫系統，抑制造血相關生長因子，引起外周血白細胞減少［1］，降低患者免疫力。通過環磷酰胺造模，研究藥物對其所致化療毒性的作用，已得到廣泛應用［4，5］。

本研究中當小鼠用環磷酰胺處理后，CTX模型組外周血WBC減少，臟器指數、骨髓有核細胞計數和血片中性/淋巴比值顯著降低，說明環磷酰胺抑制細胞增殖及損傷免疫器官，造模成功。芪膠升白膠囊高、中、低劑量組外周血WBC高于CTX組，說明其可增加CTX作用后小鼠的白細胞數，促進白細胞的恢復，從而增強機體免疫力及抗感染能力;骨髓片有核細胞顯著增多，表明骨髓造血祖細胞增殖增強，能夠改善造血功能;血片中性/淋巴值顯著增加，說明外周血中的白細胞以粒系為主，骨髓釋放的細胞以粒系為主;臟器指數增加，說明藥物能夠減輕CTX對胸腺和脾臟的損害，改善CTX所致的免疫器官萎縮，利于免疫系統的重建;肝、腎功能檢測的結果，表明芪膠升白膠囊還能適當減輕環磷酰胺的肝臟毒性。

芪膠升白膠囊是貴州民間傳統藥方，以中醫藥理論為指導，以血人參為主，由大棗、阿膠、黃芪等組成。方中血人參是貴州民間傳統草藥，《貴陽民間藥草》記載其藥理功效為治療紅淋白濁，全身發黃及四肢無力等。而現代藥理研究已經證明，方中大棗具有補虛益氣、養血安神、健脾和胃等藥理活性［6］;阿膠具有補氣養血作用，有助于提高腫瘤患者放化療后的免疫力［7］;黃芪為益氣藥，有補益脾肺、補氣攝血、益氣補陽之功效［8］。故而，芪膠升白膠囊具有補氣，補血，提高人體免疫力的作用，并能使體內細胞迅速增殖，比較適用于人體氣血虧損引起的免疫功能低下。本研究表明，芪膠升白膠囊可升高環磷酰胺模型小鼠的外周WBC，這與其增強骨髓造血功能，促進骨髓粒系造血祖細胞的增殖及分化，預防和改善骨髓抑制，減輕免疫器官受損以及增加受損免疫器官胸腺及脾臟的重量，利于免疫系統重建有關。芪膠升白膠囊對于環磷酰胺所致毒性反應有一定療效，為其臨床應用提供了一定的基礎藥理學依據。

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