中國被毛孢菌粉對小鼠抗疲勞、免疫功能的作用

【摘要】 目的 探討中國被毛孢菌粉（HSFM）對小鼠抗疲勞、免疫功能的作用。方法 采用負重游泳試驗法測定負重游泳時間、運動后血乳酸、尿素氮的含量，觀察中國被毛孢菌粉對小鼠抗疲勞作用；采用碳粒廓清法、二硝基氟苯誘導小鼠遲發型變態反應試驗法測定小鼠耳腫脹度、胸腺指數及脾指數，觀察中國被毛孢菌粉對免疫低下小鼠的影響。結果 給予不同劑量HSFM（0.12 g/kg、0.24 g/kg、0.48 g/kg）20 d后，能顯著延長小鼠負重游泳時間，降低運動后小鼠血乳酸、血清尿素氮含量（P＜0.05或P＜0.01）；HSFM（0.48 g/kg）能顯著增加小鼠碳廓清指數K及吞噬指數α（P＜0.01）；在遲發型變態反應實驗中，HSFM（0.24 g/kg、0.48 g/kg）能顯著增加小鼠耳腫脹度、胸腺指數和脾指數（P＜0.05或P＜0.01）。結論 中國被毛孢菌粉對小鼠抗疲勞和環磷酰胺引起的免疫功能低下小鼠具有一定的增強作用。

【關鍵詞】 中國被毛孢菌粉； 抗疲勞； 免疫功能

Effects of Hirsutella sinensis fermented mycelia physical fatigue and immunologic function of mice HAN Cheng-fang，HONG Mei，TU Feng.Qing hai Tibetan Medicine Institute，Xining 810003，China

【Abstract】 Objective To investigate the effect of Hirsutella sinensis fermented mycelia (HSFM) on physical fatigue and immune function of mice.Methods Loaded-swimming test were measured the loaded-swimming time、blood lactic and urea nitrogen after exercise，observe the effect of MHCS onphysical fatigue of mice;Carbon clearance test，dinitrofluorobenzene-induced delayed type hypersensitivity(DTH) test， they were measured the ear swelling、spleen index and thymus.To evaluate the effect of HSFM on immunosuppressed of mice.Results Administered different did of the test substance after 20 days，（0.12 g/kg、0.24 g/kg、0.48 g/kg）HSFM could significantly extend the loaded-swimming time，reducing blood lactic acid and urea nitrogen concentration after exercise in mice（P＜0.05 or P＜0.01）.(0.48 g/kg)HSFM increased the K and a indices in carbon clearance test（P＜0.01），It was also found that （0.24 g/kg、0.48 g/kg)HSFM enhanced murine ear swelling，spleen index and thymus in immunosuppressed mice(P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion HSFM significantly improved physical fatigue and immunologic function of immunosuppressed mice.

【Key words】 Hirsutella sinensis fermented mycelia (HSFM)； Physical fatigue； Immune function

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地球“四大超凈區”之一的世界屋脊青藏高原，高寒缺氧，日照時間長，紫外線輻射強，晝夜溫差大，地理地貌成因復雜。天然純凈的環境煉造，億萬年時空滄桑的精華遺傳，成就了青藏高原可食動植物資源有效成份積累高，生物活性成份強的非凡品質。蟲草屬迄今已記載有497種，但其中具有藥用價值的品種只有冬蟲夏草［cordyeps sinensis （Berks.)Sace.］，僅分布于我國青藏高原及其邊緣地區海拔3000~6000 m的高寒草甸陰濕地區，具有良好的治療和保健作用［1］，廣泛地應用于藥品和食品之中。由于資源有限，價格昂貴，中國許多科研單位和企業對冬蟲夏草進行分離和培養。經大量研究證明，人工培養冬蟲夏草與天然冬蟲夏草比較在生物活性物質、藥理作用、產品開發及臨床應用十分相似［2］。中國被毛孢（蝙蝠蛾被毛孢）是從天然蟲草中分離得到的蟲草菌之一，是以生物工程發酵工藝生產而取得的冬蟲夏草替代品。為了驗證其療效，本實驗觀察了中國被毛孢菌粉對小鼠抗疲勞及免疫功能的作用。

1 材料和方法

1.1 藥品與試劑 中國被毛孢菌粉（青海久實蟲草生物科技有限公司提供）；印度墨汁（北京西中化工廠提供）；二硝基氟苯（天津興隆化工廠提供，使用前溶于4∶1丙酮一橄欖油中配制成1%的溶液，空白組以單獨涂布丙酮／橄欖油溶劑作為對照）；注射用環磷酰胺（江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號10050821）。

1.2 實驗儀器 全自動生化分析儀Olympas-au640（日本）；SBA-40B雙電極生物傳感分析儀（乳酸儀）；離心機；752分光光度計；溫度計。

1.3 實驗動物 KM種小鼠（青海省實驗動物中心提供，合格證號：青醫動字第001號）。

1.4 實驗方法

1.4.1 負重游泳實驗時間測定［3］ 取40只KM種小鼠，雄性，18~22 g，隨機分4組，分別為空白對照組、中國被毛孢菌粉0.12 g/kg、0.24 g/kg、0.48 g/kg組，用蒸餾水配制一定濃度的混懸液，除空白對照組外各組小鼠每天灌胃，給藥連續20 d，空白對照組每天灌胃同體積的生理鹽水，末次灌胃前，稱小鼠體重，將體重5%重的薄鉛皮固定在小鼠尾根部。末次灌胃30 min后，將小鼠放入小動物游泳箱中（水深30 cm，水溫25 ℃，每個玻璃缸房一只小鼠），以小鼠頭部沉入水中10 s不能浮出水面為準（即認定為體力衰竭）。記錄每只小鼠的游泳時間。

1.4.2 血乳酸含量的測定［4］ 分組灌藥同1.4.1，末次給藥30 min后，尾部負重2%體重放入30 ℃的水中游泳10 min，出水靜止10 min后，小鼠眼球靜脈叢取血，用乳酸儀測定其含量。

1.4.3 血清尿素氮含量的測定［4］ 分組灌藥同1.4.1，末次給藥30 min后放入30 ℃的水中游泳90 min，出水后立刻取尾血測定血清尿素氮含量。

1.5 免疫調節作用研究

1.5.1 對小鼠碳廓清的實驗［4］ KM種小鼠40只，雌雄各半，體重18~22 g，分組及灌藥同1.4.1，末次給藥30 min后尾靜脈注射印度墨汁（使用前用生理鹽水稀釋3倍，超聲處理后離心，棄去沉淀物）0.05~0.1 ml/10 g體重，與注射后1、11 min用吸管（預先用肝素溶液濕潤）分別從眼眶后靜脈叢取血20 μl，溶于2 ml 0.1% Na3CO3溶液中搖勻，置752分光光度計680 nm下比色，測定t1和t11的吸光值（A1，A11）計算廓清指數K后，將小鼠脫頸椎處死，取肝臟和脾臟稱重，計算吞噬指數α。K=(logA1-logA11)/(T11-T1)=log（A1/A11）/4。吞噬指數α=體質量/肝脾重×K1/3。

1.5.2 對免疫功能低下小鼠的遲發型超敏反應影響［5］ 取KM種小鼠50只，雌雄各半，體重18~22 g，隨機分為5組，每組10只，分別為空白組、模型組、中國被毛孢菌粉0.12 g/kg、0.24 g/kg和0.48 g/kg組，模型組和對照組給予等體積的生理鹽水，給藥15 d后，將每鼠腹部去毛，范圍3 cm×3 cm，將1% DNFB均勻涂抹于上，涂布當日除正常對照組外腹腔注射環磷酰胺50 mg/kg［6］，隔日加強一次，首次致敏后給藥5 d，末次給藥后0.5 h，將1% DNFB均勻涂抹與小鼠右耳進行攻擊，誘發遲發型變態反應，攻擊后24 h，左耳涂布生理鹽水作為對照，脫頸椎處死小鼠，剪下雙耳，用打孔器分別取下直徑8 mm的耳片，稱重；同時取下小鼠胸腺和脾臟，稱重。以左右耳片重量之差作為腫脹度，以每10 g小鼠脾臟和胸腺的重量分別計算脾指數和胸腺指數。

1.6 統計學處理 計量資料以均數±標準差（x±s）表示，采用t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 小鼠抗疲勞試驗結果 中國被毛孢菌粉0.12 g/kg和0.24 g/kg、0.48 g/kg組均能明顯延長小鼠負重游泳時間，降低血乳酸值和血清尿素氮含量，具有一定的抗疲勞作用（P<0.05或P<0.01)。見表1。

2.2 小鼠巨噬細胞吞噬功能結果 中國被毛孢0.48 g/kg組能明顯提高小鼠碳廓清能力，即可明顯增強巨噬細胞吞噬功能(P<0.01)。見表2。

2.3 小鼠遲發性超敏反應的調節作用結果 模型組與空白組比較小鼠脾指數、胸腺指數、耳腫脹度明顯降低（P<0.01）。中國被毛孢菌粉與模型組比較，0.24 g/kg、0.48 g/kg組能明顯增加免疫功能低下小鼠耳腫脹度、胸腺和脾臟指數的下降(P<0.05或P<0.01)。見表3。

與空白組比較，△P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

3 討論

冬蟲夏草性味甘，平或微溫，有效成分為蟲草多糖、蟲草素、蟲草酸富含18種氨基酸和微量元素。具有補虛損，益精氣，保肺腎，止血化疾等藥理作用。近年來發現它的功效越來越廣泛［7］，使供不應求的市場推動了人工培育蟲草菌粉的發展。具有和天然蟲草相似的化學成分和藥理作用［8］，充分再現了冬蟲夏草千年傳承，獨具魅力的神奇功效，進一步滿足藥源、廣泛的應用臨床，能最大限度地造福于人類。

本文研究表明，中國被毛孢菌絲體粉0.12 g/kg、0.24 g/kg、0.48 g/kg灌胃給藥20 d后能延長小鼠負重游泳時間及降低運動后血乳酸、血清尿素氮含量（P<0.05，P<0.01），提示其具有抗疲勞的作用。中國被毛孢菌粉0.48 g/kg組能明顯提高小鼠碳廓清能力，即可明顯增強巨噬細胞吞噬功能（P<0.01）。中國被毛孢菌粉0.24 g/kg、0.48 g/kg均能明顯增加環磷酰胺引起的免疫功能低下小鼠耳腫脹度、胸腺指數和脾臟指數（P<0.05或P<0.01），提示其具有抗疲勞和免疫增強作用。本研究證實了中國被毛孢菌粉與天然冬蟲夏草在增強免疫功能和抗疲勞功能方面具有相似的功效，為其臨床應用提供了實驗依據。

參 考 文 獻

［1］ 張書超，秦曉紅，于新.冬蟲夏草藥理作用的研究進展［J］.中國醫學導報，2008，2（5）：16-17.

［2］ 胡嶸.冬蟲夏草人工培養的研究［J］.長春中醫學院學報，1997，13（3）：57.

［3］ 陳奇.中藥藥理研究方法學［M］.北京：人民衛生出版社，2000：780，712-757.

［4］ 樊柏林，李宇紅，李新蘭，等.冬蟲夏草的抗疲勞作用［J］.湖北預防醫學雜志，2000，11（2）：25.

［5］ 徐叔云.藥理實驗方法學［M］.第3版.北京：人民衛生出版社，2006：1428.

［6］ 任建，張倩落，鄭莉，等.人工蟲草多糖對免疫低下小鼠免疫功能的影響［J］.第四軍醫大學學報，2007，25（21）：1967-1969.

［7］ 李鳳榮.冬蟲夏草的化學成分及藥理學研究概況［J］.內蒙古中醫藥，2010，29（17）：102-103.

［8］ 徐云方.冬蟲夏草及其發酵菌絲體的藥理藥效學研究［J］.藥品評價，2005，2（5）：334-339.

（收稿日期：2011-08-24）

（本文編輯：車艷）