子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的測(cè)定及相關(guān)性研究

[摘要] 目的 檢測(cè)子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）患者和對(duì)照組腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的水平變化及相關(guān)性，探討其在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的作用。方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)39例內(nèi)異癥患者（EMs組）及25例非內(nèi)異癥患者（對(duì)照組）腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A水平。結(jié)果 ①EMs組中，IGF-Ⅰ和PAPP-A水平分別為（117.1±36.6）ng/L、（2.85±0.56）ng/mL，均高于對(duì)照組的（79.5±18.7）ng/L、（1.93±0.56）ng/mL（P＜0.05）；②Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IGF-Ⅰ水平為（126.5±39.1）ng/L高于Ⅰ～Ⅱ期患者的（107.3±32.0）ng/L（P＞0.05），而Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中PAPP-A水平為（3.15±0.50）ng/mL高于Ⅰ～Ⅱ期患者的（2.55±0.45）ng/mL（P＜0.05），且PAPP-A水平與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)；③EMs患者腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ水平無(wú)顯著相關(guān)性（P＞0.05）。結(jié)論 腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的增高可能與內(nèi)異癥的發(fā)病有關(guān)；PAPP-A與疾病的嚴(yán)重程度有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 子宮內(nèi)膜異位癥；腹腔液；PAPP-A；IGF-Ⅰ

[中圖分類號(hào)] R711.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2011）23-110-03

IGF-Ⅰ and PAPP-A Changes in the Peritoneal Fluid and the Relationship in the Patients of Endometriosis

JIN Haihong1 LIU Huining2 ZENG Baojin1

1.Department of Obstetrics and Gynecology，Zhejiang Province Taizhou Hospital， Taizhou 317000，China；2. Department of Obstetrics and Gynecology，Hunan Province Changsha Xiangya Hospital，Changsha 410008，China

[Abstract] Objective To detect the concentration of IGF-Ⅰand PAPP-A in the peritoneal fluid of women with the endometriosis，so as to investigate the role of PAPP-A and IGF-I in the pathogenesis of endometriosis. Methods The study group included 39 samples of peritoneal fluid from patients with endometriosis，and control group included 25 samples of peritoneal fluid from patients without endometriosis. The peritoneal fluids were collected at the time of laparoscopic operation. Concentration of IGF-Ⅰand PAPP-A were determined by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）. Results ①The peritoneal fluid concentrations of IGF-Ⅰ and PAPP-A in study group were significantly higher than that of control group（117.1±36.6）ng/L vs （79.5±18.7）ng/L， （2.85±0.56）ng/mL vs （1.93±0.56） ng/mL（P＜0.05）；②PAPP-A levels of severe endometriosis were significantly higher than that of mild endometriosis（3.15±0.50）ng/mL vs （2.55±0.45）ng/mL（P＜0.05）. Significant correlation was found between the stages of endometriosis and the levels of PAPP-A. ③There was no significant correlation bewteen the PF levels of PAPP-A and IGF-Ⅰ. Conclusion The increased peritoneal levels of IGF-Ⅰand PAPP-A may play an important role in the pathogenesis of endometriosis； There is significant correlation between the levels of PAPP-A and the stages of endometriosis.

[Key words] Endometriosis；Peritoneal fluid；PAPP-A；IGF-Ⅰ

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）雖然是良性病變，但具有浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的惡性生物學(xué)行為。近年來(lái)認(rèn)為腹腔微環(huán)境在EMs的發(fā)病中起重要作用。胰島素樣生長(zhǎng)因子（IGF）系統(tǒng)是由IGF-Ⅰ、Ⅱ及相應(yīng)的受體、結(jié)合蛋白（IGFBP1-6）和蛋白水解酶構(gòu)成。IGF-Ⅰ及其受體已被證實(shí)在異位內(nèi)膜組織中有免疫化學(xué)特性。妊娠相關(guān)血漿蛋白-A（PAPP-A）屬于IGF的蛋白水解酶，在多種組織中起著調(diào)節(jié)IGF生物利用度的重要作用[1]。目前對(duì)EMs患者和正常人群腹腔液中IGF系統(tǒng)進(jìn)行比較的研究較少，且有所爭(zhēng)論。本研究采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)EMs患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的水平，探討其在EMs發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2007年7～9月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院婦科收治的EMs患者39例，均根據(jù)手術(shù)所見及術(shù)后病理檢查確診，平均年齡（30.6±6.4）歲。按照美國(guó)生育協(xié)會(huì)修正標(biāo)準(zhǔn)分期（r-AFS）進(jìn)行分期，其中Ⅰ期14例，Ⅱ期5例，Ⅲ期11例，Ⅳ期9例，并將Ⅰ～Ⅱ期合并為輕度組，Ⅲ～Ⅳ期合并為重度組。對(duì)照組來(lái)自同期因不孕癥、卵巢單純囊腫行腹腔鏡手術(shù)治療的非EMs患者25例，平均年齡（29.8±6.2）歲。所有病例均無(wú)自身免疫性疾病，無(wú)內(nèi)分泌疾病、惡性腫瘤及急性感染等，術(shù)前6個(gè)月未經(jīng)任何激素類藥物治療。月經(jīng)周期規(guī)則，均為28～32d。

1.2 方法

1.2.1 腹腔液的采集和處理 腹腔鏡手術(shù)者在建立氣腹，置入腹腔鏡后首先觀察、記錄盆腔情況，然后用無(wú)菌吸管及無(wú)菌注射器將腹腔液吸出2mL。如為開腹手術(shù)則在小心剪開腹膜后立即以無(wú)菌吸管及無(wú)菌注射器于子宮直腸窩處抽取腹腔液2mL，然后記錄盆腔內(nèi)情況。收集到的腹腔液置于無(wú)菌EP管內(nèi)以3000r/min離心10min，取上清液加入無(wú)菌EP管中，于-70℃凍存待測(cè)。有血液污染者則棄置不用。

1.2.2 檢測(cè)方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），IGF-Ⅰ和PAPP-A檢測(cè)試劑盒分別購(gòu)自深圳晶美公司和上海麥莎生物公司，均嚴(yán)格按照說(shuō)明操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用（χ±s）表示，組間比較采用方差分析和t檢驗(yàn)，采用Spearman進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 EMs組與對(duì)照組腹腔液中PAPP-A和IGF-I的濃度比較

EMs組腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ濃度均高于對(duì)照組，差異有顯著性（P＜0.05）；EMs組腹腔液中PAPP-A濃度重度組高于輕度組，差異有顯著性（P＜0.05）；EMs組腹腔液中IGF-Ⅰ濃度重度組高于輕度組，差異無(wú)顯著性（P＞0.05）。見表1。

注：a與對(duì)照組相比，P＜0.05；b與重度組相比，P＜0.05；c與重度組相比，P＞0.05

2.2 EMs組腹腔液中PAPP-A、IGF-Ⅰ濃度與r-AFS評(píng)分的關(guān)系

EMs組腹腔液中PAPP-A濃度與r-AFS評(píng)分之間的相關(guān)系數(shù)為r＝0.523，P＜0.05。而IGF-Ⅰ濃度與r-AFS分期之間的相關(guān)系數(shù)為r＝0.174，P＞0.05。見圖1、圖2。

2.3 EMs組及對(duì)照組腹腔液中PAPP-A、IGF-Ⅰ含量的相關(guān)性

EMs組及對(duì)照組腹腔液中PAPP-A與IGF-Ⅰ的濃度無(wú)顯著相關(guān)性（相關(guān)系數(shù)分別為r=0.118，P＞0.05；r=-0.072，P＞0.05）。見圖3、圖4。

3 討論

3.1 IGF-Ⅰ與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系

IGF-Ⅰ與胰島素有45%的同源性。IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR結(jié)合后可激活酪氨酸激酶，引起細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，誘導(dǎo)DNA的合成，抑制細(xì)胞凋亡。目前，關(guān)于IGF與惡性腫瘤的關(guān)系已經(jīng)明確。而子宮內(nèi)膜異位癥中異位內(nèi)膜細(xì)胞的種植、增生、血管新生等類似惡性腫瘤的生物行為是其發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。

本研究結(jié)果顯示，EMs患者腹腔液中IGF-Ⅰ水平在Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期均較對(duì)照組顯著升高，但Ⅰ～Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中IGF-I濃度無(wú)明顯差異。與Jung等[2]的研究結(jié)果一致，而與Gurgan等[3]的研究結(jié)果存在差異。可能與以下因素有關(guān)：①病灶的個(gè)體差異。目前EMs的分期根據(jù)r-AFS評(píng)分，而r-AFS評(píng)分有一定的主觀性，且不代表病灶的活動(dòng)性，有的異位灶r-AFS評(píng)分高但活性低。②不同廠家生產(chǎn)的試劑盒敏感性、特異性存在差異。③測(cè)量方法的差異。Gurgan等使用放射免疫法，而放射性元素具有一定的半衰期。腹腔液中高濃度的IGF-Ⅰ可能來(lái)源于漿液性滲出、脫落的子宮內(nèi)膜、異位內(nèi)膜組織及腹腔內(nèi)的炎性細(xì)胞如巨噬細(xì)胞等。IGF-Ⅰ可通過(guò)整合素介導(dǎo)異位內(nèi)膜細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的黏附，促進(jìn)內(nèi)膜細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。而整合素與ECM的黏附對(duì)于細(xì)胞獲得運(yùn)動(dòng)、轉(zhuǎn)移能力是十分重要的，尤其當(dāng)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)[4]。體外細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，IGF-Ⅰ以劑量依賴方式刺激子宮內(nèi)膜KLE細(xì)胞株的生長(zhǎng)并保護(hù)KLE細(xì)胞抵抗阿霉素誘導(dǎo)的凋亡[5]。另外IGF-Ⅰ可通過(guò)增強(qiáng)FSH對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞的作用，促進(jìn)雌激素的生成和釋放，而雌激素有促進(jìn)子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長(zhǎng)的作用，同時(shí)雌激素能增強(qiáng)IGF-Ⅰ的促細(xì)胞有絲分裂作用[6]。兩者的正相關(guān)協(xié)同作用使這兩條信號(hào)路徑在內(nèi)異癥中的作用均增強(qiáng)。同時(shí)IGF-Ⅰ可以上調(diào)VEGF的表達(dá)，從而促進(jìn)異位內(nèi)膜種植部位新生血管的形成。

3.2 PAPP-A與子宮內(nèi)膜異位癥的關(guān)系

PAPP-A是1974年在孕婦血清中發(fā)現(xiàn)的高分子量的黏多糖蛋白。已有的研究表明，PAPP-A在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起一定的作用[7]。本研究發(fā)現(xiàn)，EMs患者腹腔液中PAPP-A水平較對(duì)照組顯著升高，Ⅲ～Ⅳ期患者腹腔液中PAPP-A水平高于Ⅰ～Ⅱ期患者，這與Arici等[8]的研究結(jié)果一致。腹腔液中PAPP-A的來(lái)源目前不明確。體外細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜細(xì)胞能產(chǎn)生PAPP-A[9]。另外EMs患者腹腔內(nèi)存在無(wú)菌性炎癥反應(yīng)，各種炎癥因子分泌增多，且腹腔液中巨噬細(xì)胞的量及活性均增高。而TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-6、TGF-β、PGE2等均能促進(jìn)巨噬細(xì)胞PAPP-A mRNA和蛋白的表達(dá)，并呈時(shí)間劑量依賴性[2]。因此腹腔液中異常升高的PAPP-A可能影響異位內(nèi)膜種植、侵襲、轉(zhuǎn)移的多個(gè)環(huán)節(jié)，從而參與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展。本研究還發(fā)現(xiàn)，EMs患者腹腔液中PAPP-A水平與r-AFS評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05）。由于r-AFS評(píng)分系統(tǒng)是根據(jù)盆腔異位病灶的數(shù)目、大小、深度及盆腔粘連范圍、致密程度來(lái)進(jìn)行評(píng)分的。這就提示PAPP-A與腹腔炎癥反應(yīng)的程度有關(guān)，隨著腹腔液中PAPP-A水平的升高，子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔無(wú)菌性炎癥反應(yīng)及盆腔粘連的情況也加重。故PAPP-A有望用于判斷子宮內(nèi)膜異位癥的嚴(yán)重程度，監(jiān)測(cè)病情變化和治療效果，成為繼IL-8、RANTES之后的較好的腹水標(biāo)記物[10]。

3.3 子宮內(nèi)膜異位癥患者腹腔液中IGF-Ⅰ和PAPP-A的相關(guān)性

研究表明，PAPP-A能特異性裂解IGFBP-4釋放IGF，而IGF反過(guò)來(lái)可加速PAPP-A對(duì)IGFBP-4的降解，從而增強(qiáng)游離IGF的生物活性[11]。而本研究顯示，EMs組腹腔液中PAPP-A和IGF-Ⅰ表達(dá)的列聯(lián)系數(shù)：r＝0.118（P＞0.05），表明兩者之間無(wú)明顯相關(guān)性。這與Bayes-Genis A等[10]在研究冠心病患者體循環(huán)中PAPP-A與IGF-Ⅰ水平的變化時(shí)得出的結(jié)論一致。推測(cè)與以下因素有關(guān)，PAPP-A是IGFBP-4的特異性水解酶，不能水解IGFBP-3。而IGFBP-3結(jié)合75％的IGF-Ⅰ[12]，故游離IGF-Ⅰ含量取決于總IGF-Ⅰ和IGFBP-3的濃度和產(chǎn)生速率之間的相互作用。另外水解釋放的是游離型IGF-Ⅰ，血中IGF只有1%左右是游離的[12]。而本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)的是腹腔液中總IGF-Ⅰ。故關(guān)于PAPP-A和IGF-Ⅰ在子宮內(nèi)膜異位癥中是否有協(xié)同作用有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2011-05-05）