甘露醇聯(lián)合燈盞花素應(yīng)用對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用研究

【摘要 】 目的 ： 探討甘露醇聯(lián)合燈盞花素應(yīng)用對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的保護作用。 方法 ：實驗分為3組，即對照組、模型組及甘露醇聯(lián)合燈盞花素組（聯(lián)合組），分別測定SOD、白細胞介素-1（IL-1）、內(nèi)皮素（ET）水平和細胞凋亡數(shù)。結(jié)果 ： 神經(jīng)損傷后24h聯(lián)合組的視網(wǎng)膜神經(jīng)IL-1、ET含量和細胞凋亡數(shù)高于對照組，低于模型組，差異有顯著性（P＜0.05） ；血清SOD含量低于對照組，高于模型組，差異有顯著性（P＜0.05）。結(jié)論： 甘露醇聯(lián)合燈盞花素可通過抑制炎性因子、清楚氧自由基和穩(wěn)定血管內(nèi)皮細胞等機制發(fā)揮保護視神經(jīng)細胞的作用。

【關(guān)鍵詞】 甘露醇聯(lián)合燈盞花素；視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞；保護作用

Protective effect of combined mannitol and Breviscapine on retinal ganglion neuronotrophic in rats

【Abstract 】 Objective To study the Protective effect of combined mannitol and Breviscapine on retinal ganglion neuronotrophic in rats. Methods The experimental rats were randomized to 3 group， control group、model group and combined mannitol and Breviscapine group. After 24 hour injury of optic nerve the SOD、IL-1、ET and apoptosis of nerve cells were measured. Results mannitol group IL-1 and ET and apoptosis were higher than control group and lower than those of the model group The difference was significantly（P＜0.05）; SOD was lower than control group and higher than those of model group. The difference was significantly（P＜0.05）. Conclusion combined mannitol and Breviscapine l can protecting retinal ganglion neuronotrophic..

【Key words】 combined mannitol and Breviscapine ; retinal ganglion neuronotrophic; protective effect

【中圖分類號】R774

【文獻標識碼】B

【文章編號】1007-8231（2011）10-1661-02房水的生產(chǎn)速度、房水的排放速度過快及顱內(nèi)壓增高等疾病可導(dǎo)致視神經(jīng)損傷，如果患上述疾病時不保護視神經(jīng)，神經(jīng)細胞可不可逆損傷而失明。因此，視神經(jīng)受損時如何保護神經(jīng)細胞，避免患者失明是眼科醫(yī)生的研究課題。近年研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)損傷后白細胞介素-1（IL-1）、內(nèi)皮素（ET ）、SOD 的改變細胞凋亡有關(guān)。甘露醇為單糖（大分子物質(zhì)），在體內(nèi)不能發(fā)生分解代謝，利用其高滲脫水作用，促進神經(jīng)組織內(nèi)水分回流入血管，使神經(jīng)組織脫水并有抗氧化作用；燈盞花素有清楚自由基和抗炎作用。筆者視神經(jīng)動物模型應(yīng)用甘露醇聯(lián)合燈盞花素治療，效果滿意報告如下：

1材料

1.1 儀器 ： RECOR V6型多導(dǎo)生理記錄儀（西門子公司），低溫高速離心機（德國SIGMA公司），紫外分光光度儀（寧波歐億檢測儀器有限公司），CK-720電熱恒溫箱（東莞市宏展儀器有限公司），F(xiàn)SCS流式細胞儀（美國BD公司）。

1.2 試藥 ： IL-1試劑盒（美國Biosourrence公司），ET放射試劑盒（上海研晶生化試劑有限公司），SOD試劑盒（武漢博士德生物工程公司），碘化丙啶（IP，美國Sigma公司），甘露醇注射液（廣東永康藥業(yè)有限公司），燈盞花素云南省玉溪制藥有限公司產(chǎn)品，批號：253020708）。

1.3 動物 ： 10周齡SD大鼠60只，雌雄不限，體重（200±20）g，廣東醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。

實驗動物分為3組，即對照組、模型組及甘露醇聯(lián)合燈盞花素組（聯(lián)合組）

2方法

2.1模型制作及給藥 ： 動物麻醉，用微型注射器在前方內(nèi)持續(xù)注射生理鹽水，制造眼內(nèi)壓升高的模型。眼內(nèi)壓開始增高后立即給藥，給藥方法：靜脈注射25%甘露醇2g/kg體重和燈盞花素50mg/kg體重。每6h 重復(fù)注射一次。

2.2 IL-1、ED、SOD ： 給藥24 h 后將各組大鼠斷頭處死，迅速玻璃視網(wǎng)膜神經(jīng)，均漿、離心取上清，采用ELISA法測定IL-1，放射免疫法測定ED，黃嘌呤氧化法測定SOD。

2.3 細胞凋亡數(shù)的檢測 ： 取視網(wǎng)膜神經(jīng)組織，加生理鹽水研磨制成單細胞懸液，每組懸液滴入70%冷乙醇固定，BPS離心洗滌2次（1000r/min，5min），去上清液，300目尼龍濾膜過濾，取1×106個細胞，加PI染色液混合均勻，4℃避光30min，流式細胞儀檢測，每個樣本獲取10000個細胞，用Modfit2.0軟件分析細胞凋亡數(shù)。

2.4 統(tǒng)計方法 ： 采用SSPSS 13.0統(tǒng)計軟件處理結(jié)果以X±s表示，多組間計數(shù)資料采用方差分析；細胞凋亡率數(shù)據(jù)采用Kruskal-wallis H 檢驗。P＜0.05為差異有顯著意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織IL-1、ET含量和細胞凋亡數(shù)高于對照組，低于模型組，差異有顯著性（P＜0.05） ；血清SOD含量低于對照組，高于模型組，差異有顯著性（P＜0.05），見表1。

表1各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)組織IL-1、ET、SOD含量與細胞凋亡數(shù)

組別IL-1/pg.kg-1ET/pg.ml-1SOD/IU.mg-1細胞凋亡率/%對照組0.50±0.1760.00±11.81236.33±4.010.56±0.33模型組1.22±0.51151.45±30.87178.54±8.9417.87±1.76聯(lián)合組0.89±26.52 133.76±30.23290.65±7.871.44±3.654討論

視神經(jīng)在視神經(jīng)管內(nèi)，一般情況下很少直接損傷，大部分損傷是眼內(nèi)壓或顱內(nèi)壓增高所致。因此，眼內(nèi)壓或顱內(nèi)壓增高時如何保護視神經(jīng)成為研究熱點。IL-1是具有多向性生物功能的炎癥介質(zhì)，對炎癥和免疫反應(yīng)具有調(diào)節(jié)作用，可參與神經(jīng)損傷后的病理生理改變并造成神經(jīng)組織的繼發(fā)損傷。神經(jīng)損傷后IL-1的釋放可增加黏附分子的表達，促進白細胞黏附于毛細血管或小血管壁，逐漸滲透至神經(jīng)組織［1]。ET是體內(nèi)一種由21個氨基酸組成的最強縮血管活性肽，由膠質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞分泌，與神經(jīng)元胞膜上受體結(jié)合后刺激磷酸肌醇、磷脂酶A2和磷脂酶C循環(huán)，加速花生四烯酸代謝致鈣超載、氧自由基大量產(chǎn)生，引起神經(jīng)水腫、變性、壞死［2]。SOD是生物體產(chǎn)生的天然氧化酶，可通過歧氧化反應(yīng)清楚體內(nèi)的氧自由基，阻斷脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)［3]。自由基損傷在神經(jīng)缺血疾病中起著至關(guān)重要的作用。SOD保護細胞免受損傷，對機體氧化和抗氧化平衡起著關(guān)鍵的作用，但其易受自由基攻擊而失活。神經(jīng)損傷后SOD減少，使氧自由基對神經(jīng)組織的對神經(jīng)組織損傷的第一道防線受損。SOD失活后其清楚自由基的能力下降，蓄積過剩的自由基與神經(jīng)組織生物膜不飽和脂肪酸產(chǎn)生脂質(zhì)自由基或脂質(zhì)過氧化物，發(fā)生脂質(zhì)過氧化連鎖反應(yīng)，使神經(jīng)組織生物膜受到損傷，從而引起細胞水腫、損傷直至死亡。細胞凋亡是神經(jīng)損傷的形式之一，其發(fā)生于多種因素有關(guān)，也是一系列有害代謝導(dǎo)致神經(jīng)元死亡的最后共同通路。

甘露醇為單糖（大分子物質(zhì)），不能通過血腦屏障，在體內(nèi)不能發(fā)生分解代謝，利用其高滲脫水作用，促進神經(jīng)組織內(nèi)水分回流入血管，使神經(jīng)組織脫水［4]，1g甘露醇可產(chǎn)生滲透濃度5.5mosm，注射100g甘露醇可使2000ml細胞內(nèi)水分轉(zhuǎn)移至細胞外，尿鈉排泄50g。甘露醇也是一種較強的自由基清除劑，特別對羥自由基，兩者作用時可形成毒性低的甘露醇自由基，經(jīng)歧化而解毒；且對氧自由基的生成有抑制作用;能有效地清除神經(jīng)組織、心肌細胞及肢體肌肉組織內(nèi)缺氧時產(chǎn)生的自由基;并可降低血液粘度，減少紅細胞聚集和腦血管阻力，改善微循環(huán)，增加臟器組織的灌注。燈盞花素為菊科植物，性寒、甘、味辛，具有降低血管阻力，抗血小板聚集、降低血漿纖維蛋白原含量和促進纖溶活性等作用和抗炎作用［5]。因此，兩者聯(lián)合應(yīng)用其作用進一步提高和加強。

本研究甘露醇聯(lián)合燈盞花素應(yīng)用于眼內(nèi)壓高所致的視網(wǎng)膜神經(jīng)損傷中應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)組織內(nèi)的IL-1、ET含量和細胞凋亡數(shù)高于對照組，低于模型組，差異有顯著性（P＜0.05） ；血清SOD含量低于對照組，高于模型組，差異有顯著性（P＜0.05）。表明甘露醇聯(lián)合燈盞花素應(yīng)用可以保護視網(wǎng)膜神經(jīng)的損傷。其機理待進一步探討。

參考文獻

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