HPLC法測定導赤丸中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量

陳興田 黃金華

（1 徐州醫學院附屬醫院藥劑科，江蘇 徐州 221002；2 *南通大學醫學院，江蘇 南通 226001）

導赤丸收載于1995年版《中國藥典》，是由大黃為主藥，配以連翹、黃連、梔子等中藥制成的大蜜丸，具有利尿通便，清熱瀉火的功效。文獻報道有關導赤丸的質量控制研究多為熒光掃描法[1,2]，常只測定單一成分。在導赤丸標準中制訂了顯微鑒別與薄層色譜鑒別，但無其中大黃的含量測定；本實驗我們采用高效液相色譜法，測定了其中大黃的5種成分含量，達到進一步完善質量標準，更好地控制其質量，起到良好效果。

1 儀器與試藥

KQ-250VDB型雙頻數控超聲波清洗器由昆山市超聲儀器有限公司出品；高效液相色譜儀采用島津LC-20AD型，配以Shimadzu VPODS色譜柱（規格4.6mm×250mm，5μm）紫外檢測器采用日本Shimadzu公司出產的SPD-20A型；電子天平采用日本Shimadzu公司的AUW120D型； LC-20AD泵；標準品蘆薈大黃素、大黃酸、大黃酚、大黃素甲醚和大黃素為中國藥品生物制品檢定所出，純度均≥98%；試驗樣品導赤丸由北京中藥五廠，批號（100817、100922、101008）。水為自制的多重蒸水，甲醇、乙腈為色譜純；其他均為分析純試劑。

2 方法與結果

2.1 實驗品溶液的制備

將導赤丸用粉碎機粉碎，然后取細粉精密稱取1.0g，加80 mL甲醇溶解，再分2次超聲提取，每次20min，合并后濾過，回收濾液中的甲醇并濃縮至干，酸化時加40mL10%鹽酸，搖勻后分3次萃取，每次用氯仿100mL，3次萃取液合并后回收氯仿，余下殘渣再用甲醇稀釋至30 mL，用0.50μm微孔濾膜過濾，即為實驗品溶液[3,4]。

2.2 標準對照品的制備

精密稱取純度很高的對照品大黃素15mg，大黃酸5mg，蘆薈大黃素15mg，大黃酚5mg，大黃素甲醚5mg分別放置棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋到50mL，充分搖勻，得各對照品母液。然后再分別吸取母液1、2、5、10、15mL置同棕色容量瓶中，用甲醇溶解稀釋到50mL，搖勻，就成為對照品混合液。見圖1。

圖1 對照品（A）和供試品（B）色譜圖

2.3 線性關系

準備好液相色譜儀，流動相采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脫；設定波長262nm；控制流速1.0mL/min；柱溫30℃；每次進樣量10μL；取對照品混合溶液1、4、8、12、20μL，依次吸注入，測定其峰面積。橫坐標是測得的濃度，縱坐標是相應峰面積積分值，進行線性回歸處理。計算測得的蘆薈大黃素的回歸方程是Y = 26312468.4012 X-368728.1998，r= 0.9994，線性范圍為0.042～0.841μg；大黃素的回歸方程為Y=1529651.5149 X-21996.5749，r= 0.9996，線性范圍為0.085～1.688μg；大黃酸的回歸方程為Y=1235866.2489 X-96883.3987，r=0.9997，線性范圍為0.167～3.371μg；大黃酚的回歸方程為Y=2120163.7978 X-23997.4768，r=0.9998，線性范圍0.091～1.1804μg；大黃素甲醚的回歸方程為Y=804967.1203X-5978.1309，r= 0.9993，線性范圍為0.170～3.61μg。

2.4 精密度實驗

參照上述2.3方法，取同一供試品液連續加樣5次，測定5種活性成分的峰面積并計算出各成分的RSD。測得的蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別是2.19%、1.63%、2.91%、2.51%和1.72%，表明該儀器的精密度良好。

2.5 重復性實驗

參照上述2.3方法制備供試品溶液，同一批5份依次測定。實驗顯示蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.10%、2.09%、2.18%、2.13%和1.88%，表明此法試驗重復性良好。

2.6 穩定性試驗

按照上述色譜條件，取同一供試品溶液，在0、2、4、6、8h 5個節段分別進行測定。結果測得蘆薈大黃素、大黃素、大黃酸、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.8%、2.18%、1.63%、1.49%和1.38%，顯示供試品溶液在5分段時間內比較穩定。

2.7 加樣回收率實驗

取已知含量的導赤丸供試品，精密稱取1 g共5份，再各分別加入1.0mL對照品混合液，混合后使各成份含量分別約為0.056、0.19、0.12、0.23、0.19mg。按照上述“2.3”項的方法，進行各成分的含量測定，實驗結果計算回收率分別是：99.6%、99.1%、99.6%、98.8%、99.2%；RSD分別為1.30%、1.70%、0.89%、0.90%和99.6%（n= 5）。

2.8 樣品的測定

分別吸取供試品和對照品溶液各10μL，以上述同等條件測定，測得結果用外標一點法計算樣品中各大黃成分的含量，其中3批樣品測定結果見表1（批號分別為100817、100922、101008）。見表1。

表1 樣品含量測定結果(mg/g)

3 討 論

本試驗確立了導赤丸中五種大黃成分的含量測定方法；在實驗過程中我們采用超聲提取法，此方法相對其它如加熱回流法操作簡便，結果也準確，穩定重復好，是一個較好的提取法，可以作為該產品質量控制使用[5,6]。

[1]夏青.薄層掃描法測定導赤丸中鹽酸小檗堿的含量[J].長春中醫藥大學學報,2008,24(6):659-660.

[2]鄔國慶,周富榮.薄層掃描法測定導赤丸中鹽酸小檗堿的含量[J].中國中藥雜志,1999,24(7):412-413.

[3]江蘇省藥品標準.江蘇省衛生局編[S].南京: 江蘇科學技術出版社,1977:260.

[4]國家藥典委員會編.中華人民共和國藥典 (一部) [M].北京:化學工業出版社,2005:214.

[5]陳廣通,李玉琴,黃金華,等. HPLC法測定十滴水中五種活性成分的含量[J].中國醫藥導報,2010,7(29):40-42.

[6]陳廣通,汪冬庚,李玉琴,等.赤丸中大黃5種成分的HPLC測定[J].長春中醫藥大學學報,2010,20(5):621-622.