異丙酚抑制長效酰胺類局麻藥致大鼠中毒驚厥作用的比較*

韓 倩 張 山 喬玉敏 王春平 張志強

局麻藥所致的中樞神經系統（CNS）毒性驚厥為臨床上常見的并發癥，嚴重威脅著患者生命。大腦海馬是與驚厥的發生和發展關系最為密切的區域之一，也是多種神經毒性和損傷最為敏感的區域之一[1]。全身靜脈麻醉藥異丙酚起效迅速，用藥安全，并能迅速控制驚厥，縮短驚厥發作的持續時間[2]。本研究應用左旋布比卡因、羅哌卡因及布比卡因致大鼠中毒驚厥模型，觀察不同局麻藥引起驚厥及異丙酚處理后海馬CA1區c-fos陽性細胞數、NO含量以及一氧化氮合酶（NOS）活性表達的差異，旨在比較異丙酚抑制這3種局麻藥所致驚厥的作用。

1 材料與方法

1.1 研究對象 清 潔級成年Wistar大鼠64只，雄性，平均體質量（250±20）g，購自河北醫科大學實驗動物中心。隨機均分為4組：對照組（C組）、左旋布比卡因組（L組）、羅哌卡因組（R組）及布比卡因組（B組），再按同源配對設計將每組再均分為實驗(EG)組即C（EG）組、L（EG）組、R（EG）組以及B（EG）組;異丙酚處理（PG）組即C（PG）組、L（PG）組、R（PG）組以及B（PG）組，每組8只。

1.2 主要藥品與試劑 丙 泊酚注射液（進口藥品注冊證號：H20070378，費森尤斯卡比醫藥有限公司，瑞典），0.75%鹽酸左旋布比卡因注射液（批號：H20020570，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司），0.75%鹽酸羅哌卡因注射液（進口藥品注冊證號：H20020253,阿斯利康醫藥有限公司，瑞典）；一抗KIT-9901、酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物（福州邁新生物科技有限公司），NO測定試劑盒和NOS測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

1.3 實驗方法 實 驗開始前1 d所有鼠尾靜脈放置24號套管針。L組、R組及B組的實驗組分別經尾靜脈泵入0.75%左旋布比卡因、0.75%羅哌卡因以及0.75%布比卡因，速度均為2 mg·kg-1·min-1，PG組在出現驚厥反應后靜脈注射2 mg/kg異丙酚。EG組以3 mL/h的速度泵入生理鹽水。驚厥發生2 h后所有大鼠處死、取腦，一側的海馬CA1區組織采用即用型非生物素免疫組化法（eliVision plus）觀察c-fos每400倍視野的細胞數即為陽性細胞數（cells/HP）。計算出各組的EG亞組和PG亞組的差值D與EG組的比值K（K=D/EG），K值增大表明處理組作用顯著。另一側的海馬CA1區組織放在冷凍管中，于液氮中凍存。按照試劑盒說明測定NO含量和NOS活性。Racine分級法判斷大鼠驚厥的程度：以大鼠出現Ⅳ級或Ⅴ級（全身不自主或不協調的抽搐）時為判定終止驚厥的標準，觀察大鼠的行為并記錄驚厥發作的潛伏期和發作程度。

1.4 觀察指標 觀 察并比較各組驚厥發生的時間及局麻藥致驚厥的劑量，海馬CA1區c-fos陽性細胞數的表達、NO水平及NOS活性表達，比較各組上述3項指標的K值。

1.5 統計學處理 采 用SPSS 13.0統計軟件進行分析，計量數據以均數±標準差（±s）表示，多組間均數比較采用方差分析、進一步組間兩兩比較用LSD-t法，各組內亞組間比較采用t檢驗，P<0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組驚厥情況 除C組外各組均有驚厥發生。各實驗組從泵入局麻藥到出現驚厥的時間分別為：L組平均（10.63±4.81）min；R組平均（12.63±7.84）min；B組平均（7.75±3.92）min，各組局麻藥致驚厥劑量分別為（21.26±9.62）、（25.26±15.68）及（15.50±7.838）mg/kg。驚厥持續時間約為30~60 s，能自行停止。各異丙酚處理組在給予異丙酚后很快抑制驚厥。

2.2 各組c-fos陽性細胞數的表達、NO含量和NOS活性表達比較 L（EG）、R（EG）和B（EG）組海馬CA1區c-fos陽性細胞數、NO含量以及NOS活性表達較C（EG）組均顯著增加，差異有統計學意義（P<0.001）。L（PG）、R（PG）和B（PG）組海馬CA1區c-fos陽性細胞數、NO含量以及NOS活性較各組內相對應的L（EG）、R（EG）和B（EG）組的表達均明顯減少，差異有統計學意義（P<0.001），見表1。

表1 各組海馬CA1區c-fos陽性細胞數的表達、NO含量和NOS活性的表達 （±s）

表1 各組海馬CA1區c-fos陽性細胞數的表達、NO含量和NOS活性的表達 （±s）

*P<0.05，**P<0.01

L（EG）（1）L（PG）（2）R（EG）（3）R（PG）（4）B（EG）（5）B（PG）（6）C（EG）（7）C（PG）（8）F P（1）∶（7）（3）∶（7）（5）∶（7）（1）∶（2）（3）∶（4）（5）∶（6）88888888 c-fos計數（cells/HP）105.31±13.570 73.970±8.331 115.750±11.450 79.838±7.882 198.625±22.791 99.038±11.828 14.575±4.4701 12.800±1.813 200.303**<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001 NO含量（μmol/g）9.620±1.126 7.586±1.057 9.620±1.417 7.667±1.235 14.420±1.960 9.386±1.109 3.116±0.318 2.910±0.238 80.550**<0.001<0.001<0.001<0.001 0.002<0.001 NOS活性（×103U/g）0.332±0.045 0.248±0.034 0.326±0.068 0.250±0.047 0.822±0.092 0.477±0.062 0.104±0.045 0.104±0.026 115.224**<0.001<0.001<0.001<0.007<0.004<0.001組別 n

2.3 各組K值比較 L組與R組c-fos陽性細胞數K值、NO含量K值及NOS活性K值較B組均明顯減小，差異有統計學意義（P<0.001）。L組與R組c-fos陽性細胞數K值、NO含量K值以及NOS活性K值比較，差異均無統計學意義（P>0.05），見表2。

3 討論

異丙酚是臨床常用的靜脈麻醉藥，臨床及動物實驗表明其單獨及復合其他麻醉藥均可抑制傷害性刺激引起的運動反應[2-3]。目前異丙酚抗驚厥作用機制尚不明確，推測可能與丙泊酚減少興奮性氨基酸釋放、抑制鈣超載、降低NOS活性和抑制NO合成等有關[4]。本研究顯示，各異丙酚處理組在給予異丙酚后很快抑制驚厥，且多在15 s內，頭面部及四肢抽搐甚至角弓反張消失，呼吸急促轉為平穩而無呼吸抑制，整體處于安靜狀態，甚至有些大鼠在15 s靜脈注射異丙酚過程中即抑制驚厥，且異丙酚抑制各組驚厥發生的表現沒有明顯區別，表明2 mg·kg-1的異丙酚用量（誘導劑量）通常是安全的，對于局麻藥中毒驚厥的抑制作用完善、可靠。

c-fos基因在海馬CA1區組織受到輕微刺激時就能表達，在對海馬CA1區功能的分子水平的研究中起到至關重要的作用，驚厥發作時，在海馬CA1區見到較多的c-fos表達，2~4 h時達高峰期，8 h后降至正常[5]。在研究方法上，由于c-fos陽性細胞數對于不同刺激選擇性差，易受其他非實驗因素如光線、氣味和應激的反應等的干擾，因此，除嚴格控制合適的實驗條件外，對于如何排除無關因素的干擾以求得結果的正確性顯得至關重要。本研究結果顯示，L（EG）組、R（EG）組和B（EG）組的海馬CA1區c-fos陽性細胞數較C（EG）組均顯著增多，差異有統計學意義，表明實驗組驚厥模型成功。

有研究顯示異丙酚可抑制數個不同腦區NOS的活性，減少NO與環磷酸鳥苷（cGMP）的生成，提示NO在異丙酚的作用機制中可能發揮重要作用[6]。但這些實驗均以翻正反射的消失作為產生麻醉狀態的指標，只能表明NO與異丙酚的睡眠作用有關，未能進一步探討其與異丙酚抗傷害作用的關系。Dillane等[7]研究表明異丙酚具有抗N-甲基-D-天冬氨酸受體（NMDA）作用，提示異丙酚可能是通過阻礙NMDA受體的激活、減少鈣離子內流的方式進一步導致NOS活性降低和NO合成減少。

本研究結果顯示，L（PG）、R（PG）和B（PG）組海馬CA1區c-fos陽性細胞數、NO含量和NOS活性較各組內對應的L（EG）、R（EG）和B（EG）組均明顯降低，表明異丙酚均能抑制這3種局麻藥致驚厥引起的NO含量和NOS活性的增加，但L組與R組K值較B組NO含量和NOS活性K值明顯減小，考慮可能是異丙酚抑制的B組驚厥引起的NO含量和NOS活性變化強于L組和R組所致，但L組與R組K值相差不大，考慮可能是由于異丙酚抑制L組和R組驚厥引起的NO含量和NOS活性變化的作用相當。

表2 3組K值比較 （ ±s）

表2 3組K值比較 （ ±s）

*P<0.05，**P<0.01

組別L組R組B組F P L∶R L∶B R∶B n 16 16 16 c-fos計數K值0.295±0.027 0.311±0.023 0.502±0.023 171.939*0.239<0.001<0.001 NO含量K值0.212±0.230 0.204±0.016 0.347±0.017 99.558*0.196<0.001<0.001 NOS活性K值0.228±0.056 0.193±0.028 0.399±0.046 138.387*0.418<0.001<0.001

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[2]王強,徐禮鮮,陳紹洋,等.丙泊酚對布比卡因中樞及心臟毒性的治療作用[J].臨床麻醉學雜志,2009,25(10):881-883.

[3]Weinberg GL.Treatment of local anesthetic systemic toxicity(LAST)[J].Reg Anesth Pain Med，2010,35(2):188-193.

[4]Voss LJ,Sleigh JW,Barnard JP,et al.The howling cortex:seizures and general anesthetic drugs[J].Anesth Analg,2008，107(5):1689-1703.

[5]Morgan JI,Cohen DR,Hempstead JL,et al.Mapping patterns of c-fos expression in the central nervous system after seizure[J].Sci?ence,1987,237(4811):192-197.

[6]王鈞,胡興國,曾因明,等.異丙酚和氯胺酮對大鼠大腦皮層、小腦和腦干NOS活性和NO產量的影響[J].徐州醫學院學報,1997,17(5):441-444.

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