疏肝健脾飲對糖尿病性胃輕癱大鼠的干預作用

張 媛，蔡 侃，朱容容

糖尿病性胃輕癱（DGP）即糖尿病胃動力障礙，又稱糖尿病胃麻痹，是一組以胃排空延緩為特征的臨床癥狀群。以往由于診斷技術的落后，該病發病率較低，有報道此合并癥發病率為22%，另有報道為0.08%[1]，故未引起臨床醫師的重視。自從開展核素胃排空測定后，近10年來研究發現患病率多在50%左右[2]。由此可見，糖尿病性胃輕癱是糖尿病的常見合并癥，應引起臨床醫師的注意。現代醫學對糖尿病性胃輕癱，主要是對癥治療，在控制血糖的基礎上，加用胃動力藥物，有一定效果，但療效不理想。因此，尋求中醫藥治療該病的有效方法是擺在中醫藥工作者面前的艱巨任務。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級雄性Wistar大鼠40只，200～220 g/只，山東中醫藥大學動物中心提供。

1.1.2 藥物 疏肝健脾飲（柴胡 9 g，白芍 15 g，枳實 9 g，黨參 12 g，黃芪 30 g，白術 9 g，清半夏 9 g，黃連 9 g，干姜 6 g，厚樸 9 g，木香 9 g，當歸 12 g）由山東省中醫院中藥房提供，上藥煎煮30 min，2次過濾，濃縮為 2 g/ml。

1.1.3 試劑 鏈脲佐菌素及一氧化氮合酶免疫組化試劑盒：Sigma公司產品，北京博愛科貿有限責任公司；β2-腎上腺素能受體（β2-AR）試劑盒：北京北方偉業發展有限公司；5-羥色胺受體（5-HT4R）試劑盒 ：上海市史瑞可生物科技有限公司；胰島素、C肽放射免疫分析藥盒：北京東亞放免技術研究所。

1.1.4 儀器 羅氏血糖儀、試紙；AEL-160型電子天平：日本島津；EG1160石臘包埋機、RM2135石臘切片機、HI1220烤片機：德國LEICA公司；BX40生物顯微鏡、BHB生物攝影顯微鏡：日本奧林巴斯；Image-pro plus 5.1多媒體圖像分析儀：美國MediaCybemetics公司。

1.2 方法

1.2.1 造模及分組 大鼠購回后穩定飼養3 d。檢測尿糖陰性，無陽性動物。稱重后隨機選出10只作為正常組，剩余30只禁食18 h后，2%鏈脲佐菌素（STZ）以50 mg/kg的劑量腹腔注射，正常組注射等體積生理鹽水，注射后24、72 h各測定大鼠非空腹尾靜脈血糖，將血糖持續>16.7 mmoL/L的大鼠隨機分為模型組15只、中藥組15只。各組大鼠給予標準鼠飼料喂養，均隨意飲水。

1.2.2 給藥方法 模型組和中藥組在造模后開始給予不規則飲食，僅單日給食雙日不給食，均自由飲水。4周后中藥組給予中藥灌胃，模型組給予等劑量生理鹽水灌胃，1次/d，給藥4周。給藥劑量相當于成人臨床常用劑量的2倍[3]。稱重1次/周，按新體重重新計算給藥量。

1.2.3 標本采集及檢測 ①一般項目：大鼠的皮毛、飲食、活動、大小便情況；②每周測大鼠非空腹尾靜脈血糖及體重；③給藥8周后禁食24 h，測空腹血糖后，給予10%炭粉混懸液（其中活性炭和阿拉伯膠各占10%），按l ml/100 g灌胃，麻醉大鼠，30 min后打開大鼠腹腔，用鑷子提取上端至幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，將小腸拉成直線，測量炭粉前端至幽門括約肌距離及幽門括約肌至小腸末端距離，計算胃腸推進指標 [胃腸推進指標=炭粉前端至幽門括約肌距離 （cm）/幽門括約肌至小腸末端距離（cm）×100%]；心臟取血 6 ml，4 ℃自然凝固，離心，取血清2 ml，-20℃冰箱保存；④取胃竇組織，4%多聚甲醛固定，測定nNOS、5-HTR、β2-AR等指標；方法：脫水、石蠟包埋、切片，按免疫組化試劑盒說明書的步驟染色，檢測胃竇肌間神經叢中免疫反應陽性神經元及胃黏膜平均灰度值和積分光密度：用Image-pro plus多媒體圖像分析儀， 以像素點 0.389 μm 長，4.306 μm×104 μm 測量窗下每張隨機選取400倍鏡下5個視野作圖像分析，以5個視野的均值作為該樣本的測量值；神經免疫組化染色以細胞質及細胞核內出現棕黃色著色者為陽性。

2 結 果

2.1 一般情況 正常組大鼠毛發光滑、好動機警、二便正常；模型組和中藥組在造模2 d后出現多飲、多食、多尿、糞質變稀，1周后皮毛凌亂無光、精神萎靡、活動遲緩、大便量少，體重比正常組明顯減輕，并逐漸出現死亡。給藥終止時正常組10只、中藥組12只、模型組10只。

2.2 血糖動態變化 造模前各組大鼠血糖無顯著性差異（P＞0.05），造模8周后，正常組大鼠血糖與模型組、中藥組大鼠相比有非常顯著性差異（P<0.01），造模8周后血糖與造模7 d后比較無統計學差異（P＞0.05，表 1）。

表1 各組大鼠血糖水平（mmol/L）

2.3 胃腸推進指標比較 中藥組、模型組大鼠的胃腸推進指標均低于正常組（P<0.01）。中藥組大鼠的胃腸推進指標明顯高于模型組（P<0.05）。見表2。

表2 各組大鼠的胃腸推進指標

2.4 免疫組化結果 nNOS：正常組與模型組比較P<0.01，正常組與中藥組比較P＞0.05，中藥組與模型組比P<0.01；5-HT4R：正常組與模型組比P<0.01，正常組與中藥組比P＞0.05。中藥組與模型組比P<0.05。 β2-AR：各組之間無顯著性差異（P＞0.05）。見表3。

表3 各組大鼠的免疫組化結果（μmol/L）

2.5 各組大鼠血清胰島素和C肽水平 中藥組和模型組的血清胰島素明顯低于正常組 （P<0.05），C肽明顯高于正常組（P<0.05）；中藥組大鼠的血清胰島素高于模型組 （P<0.05），C肽水平明顯低于模型組（P<0.05）。 見表 4。

3 討 論

造模3 d后，正常組大鼠血糖與造模后大鼠相比，均有非常顯著性差異（P<0.01）；7 d后造模大鼠血糖稍有下降但與8 d后血糖值無顯著性差異，說明造模1周后糖尿病大鼠的高血糖狀態已經造成并趨于穩定。

表4 各組大鼠血清胰島素和C肽水平

腸肌間神經叢nNOS陽性神經的顯著改變是糖尿病性胃輕癱較易出現的病理變化，通常作為糖尿病胃神經病變的標志。本實驗模型組nNOS顯著低于正常組（P<0.01）；并且模型組大鼠胃排空率顯著低于正常組（P<0.01）。表明本實驗觀察的糖尿病大鼠存在神經病變，可作為糖尿病性胃輕癱模型進行研究。NO可引起胃腸道平滑肌松弛并調節食管下括約肌活動，在胃排空的腸壁機械感受器和化學感受器的反饋調節中發揮重要作用[4]，nNOS為神經元型一氧化氮合酶，參與正常生理活動。本實驗結果顯示模型組nNOS與正常組相比有顯著性差異。模型組nNOS表達明顯增高，證明nNOS參與了糖尿病性胃輕癱的致病過程。

研究顯示：8周后大鼠的胃腸推進指標，正常組明顯高于模型組，中藥組明顯高于模型組 （P<0.01）；說明實驗大鼠存在胃腸動力障礙，同時說明健脾疏肝飲可改善糖尿病性胃輕癱大鼠的胃腸功能，加速糖尿病性胃輕癱大鼠的胃排空。

胃腸道至少存在四種5-羥色胺受體，其中5-HT3R和5-HT4R與胃腸運動和分泌功能最為密切。5-HT4R是一種G蛋白偶聯受體，影響胃腸道動力及內臟感覺[5]。胃腸功能紊亂時，存在一定程度的5-HT4R的代謝紊亂。本實驗結果顯示5-HT4R在正常組和中藥組中強表達，與模型組有非常顯著性差異（P<0.01），表明5-HT4R的減少可能與糖尿病性胃輕癱的發病機制有關，表明健脾疏肝飲在干預糖尿病性胃輕癱大鼠模型的試驗中有顯著作用。

有研究顯示糖尿病大鼠胃腸功能紊亂時β2-腎上腺素能受體減少[6]。本實驗結果未證實其相關性意義。

糖尿病性胃輕癱病機為脾氣虛弱、運化無力，中焦氣機不行逆于上，此其一。其二，肝主疏泄，氣機不暢責之于肝；且土氣不足，肝木逆乘脾土，脾氣受傷，則食難停化，胃失和降，氣逆于上而發生該病。筆者認為，糖尿病性胃輕癱，病位在胃，病變臟腑除脾胃外，尚與肝脾有關。健脾疏肝飲取逍遙散、柴胡疏肝散、枳實消痞丸、枳術丸、半夏瀉心湯、四君子湯之意，組合加減而成。全方補瀉兼施、辛開苦降、寒溫并用。實驗結果亦證明健脾疏肝飲具有降糖和促進胃排空的功效，且干預糖尿病性胃輕癱大鼠療效顯著。

[1]Clark D，Nowak T.Diabetic gastroparesis[J].Postgrad Med,1994,95(2):195.

[2]Marzio Glscobbe A.Evaluation of ultrasonography in the study of liquid gastric emptying[J].Am J Gastroenterol,1989,84(5):496.

[3]孫瑞元.定量藥理學[M].北京：人民衛生出版社，1987.243.

[4]Oribata.Nitric oxide mediates mechno-and chemo-receptor activated intestinal feedback control of gastric emptying[J].Dig Dis Sci，1996，41(12)：1303.

[5]李天津，余保平.5-羥色胺3、4受體與胃腸運動及臨床意義[J].國外醫學消化系疾病分冊，2004，24（6）：354-357.

[6]張亞萍，石德紅，張寬學，等.糖尿病大鼠胃腸功能紊亂時β2-腎上腺素能受體與5-羥色胺受體表達的變化[J].中華糖尿病雜志，2004，12（4）：297-299.