含血栓曲張靜脈管壁肥大細胞浸潤分布與定量研究

褚海波，嚴 菲，徐永波，王 濤，郭文君

下肢大隱靜脈曲張是周圍血管外科最常見的疾病之一。已共識深或淺瓣膜功能不全是靜脈曲張形成的重要因素，繼發性或原發性靜脈高壓是導致管壁不規則性擴張的主要原因，由此產生薄壁理論和重塑理論[1，2]。此外，遺傳、激素、靜脈壁新陳代謝能力下降等因素亦會影響靜脈管壁的擴張[3-5]。近年來，許多學者從不同角度對曲張靜脈管壁中內皮細胞、平滑肌細胞及炎癥介質的變化做了深入細致的研究[2,6]。本研究旨含血栓的曲張大隱靜脈管壁肥大細胞的浸潤程度，尋找靜脈血栓形成與靜脈管壁炎癥反應的關聯性，為其臨床治療提供新的理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取筆者所在醫院2008-10～2010-05行高位結扎剝脫加旋切治療的大隱靜脈曲張患者22例，術中取膝關節下方（不含靜脈瓣）大隱靜脈主干3～4 mm。經彩色多譜勒超聲判斷分為靜脈曲張并血栓形成組（血栓組）和單純靜脈曲張組（曲張組）。血栓組11例，男7例，女4例；年齡45歲，平均32～54歲。曲張組11例，男6例，女5例；年齡46歲，平均33～55歲。另設對照組為本院骨科行截肢術而大隱靜脈正常無損傷患者共8例，男5例，女3例；年齡41歲，平均20～49歲。排除標準：下肢嚴重水腫（有深靜脈瓣功能不全表現）；靜脈曲張伴皮膚改變；血栓性靜脈炎（非急性期）；動脈疾病及糖尿病者。

1.2 方法 將收集到的曲張和正常大隱靜脈主干管壁標本共30份，常規石蠟切片（每個蠟塊切5張片）脫蠟入水，加入1%甲苯胺藍溶液20 min，蒸餾水洗，95%乙醇分化，使切片清晰即可，自來水清洗，常規脫水、透明、樹膠封固。

1.3 結果判定 肥大細胞胞質內充滿具有異染性的粗大圓形嗜堿性顆粒，與甲苯胺藍結合在光學顯微鏡下呈深紫紅色，易于辨認。在400倍光學顯微鏡下計數整個管壁肥大細胞數目，再計數標本所有的視野數，然后計算兩者比值作為每個高倍鏡視野下細胞數，5張切片求得的平均值作為該標本的肥大細胞數目。

1.4 統計學處理 采用SPSS16.0統計軟件，數據用±s表示，顯著性分析，計量資料3組間采用單因素方差分析,兩兩比較采用SNK法。

2 結 果

2.1 血管壁肥大細胞的分布 肥大細胞體積大，呈圓形、卵圓形、短梭形或星形，細胞核小，呈圓形或橢圓形，染色淺，位于細胞中央，胞質豐富，充滿細小的藍紫色顆粒。血栓組外膜肥大細胞明顯增多呈“聚集征”，有些胞質顆粒減少，呈脫顆粒現象，中膜、內膜肥大細胞均呈散在增多，在部分血栓的機化周圍肥大細胞呈“灶狀”分布（圖1、2）；曲張組外膜、中膜、內膜均見少量肥大細胞（圖3、4）；對照組在血管外膜層滋養血管的周圍肥大細胞呈零散分布，中膜和內膜未見。

圖1 血栓組外膜肥大細胞（甲苯胺藍染色×400，箭頭所示）

圖2 血栓組外膜部分滋養血管周圍肥大細胞呈“集聚征”（甲苯胺藍染色×100，箭頭所示）

圖3 曲張組管壁外膜肥大細胞（甲苯胺藍染色×400，箭頭所示）

圖4 曲張組管壁內膜肥大細胞（甲苯胺藍染色×400，箭頭所示）

2.2 血管壁肥大細胞的計數 血栓組血管壁外膜、中膜、內膜肥大細胞計數與曲張組、正常組之間比較均有統計學差異（P<0.05）；曲張組與正常組之間比較無統計學差異 （P>0.05）；各組內外膜與中膜、內膜之間比較均有統計學差異（P<0.01）；內膜與中膜之間比較差異均無統計學差異 （P>0.05），見表 1。

表1 各組靜脈管壁內、中、外膜肥大細胞計數（個/HP，±s）

表1 各組靜脈管壁內、中、外膜肥大細胞計數（個/HP，±s）

與中膜、內膜比較，*P<0.05；與內膜比較，#P>0.05；與曲張組、對照組比較，▲P<0.01

血栓組（n=11）曲張組（n=11）對照組（n=8）外膜 2.944±1.720* 0.485±0.291* 0.310±0.110*中膜 0.354±0.343# 0.066±0.068# 0.063±0.116#內膜 0.375±0.401 0.100±0.138 0.042±0.118全層 1.925±1.203▲ 0.265±0.099 0.260±0.090

3 討 論

肥大細胞是具有強嗜堿性顆粒的組織細胞，常分布于結締組織和黏膜上。它與血管有密切的關系，尤其在皮膚或皮下的血管內，肥大細胞分布廣泛，并且參與Ⅰ型超敏反應、炎癥反應、免疫反應[7]。肥大細胞可以產生、儲存和釋放各種血管活性物質，包括組胺、花生四烯酸、肝素、白三烯、前列腺素、類胰蛋白酶及多種細胞因子。這些被釋放的血管活性物質，能激活中性粒細胞、單核細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞，吸引更多的淋巴細胞和單核吞噬細胞，促進T細胞及其它白細胞分泌細胞因子，影響炎性細胞的增生、分化、遷移、趨化、活化，啟動炎癥反應，參與曲張靜脈壁的病理變化和結構重塑[8,9]。肥大細胞還能被各種T細胞介導的炎癥過程激活，如T細胞來源的介質β-趨化因子能直接誘導肥大細胞脫顆粒[10]。正常情況下，肥大細胞主要分布在血管壁外膜，參與外膜成分的構成，并與滋養血管的功能密切相關。即內皮細胞可介導肥大細胞增殖，肥大細胞可通過分泌胰蛋白酶產生新生滋養血管，增加對血管壁的氧供[11]。

血管炎癥反應是機體的一種保護性反應，它可以產生組織因子、粘附分子前炎癥細胞因子、血栓形成前的血栓驅動微粒，發生級聯效應加速纖維蛋白沉積，形成血栓[12]。當下肢靜脈曲張時，抑制血小板粘附和抗凝血作用的內皮細胞被損傷或激活，啟動局部的炎癥反應，形成血栓前狀態[13]。靜脈高壓、血流減慢、靜脈擴張及靜脈瓣變形，均可滿足血栓形成的條件[14]。有研究發現，形成血栓的曲張靜脈炎細胞浸潤大隱靜脈比小隱靜脈更易發生，曲張靜脈的血栓可以影響靜脈壁細胞成分的重塑，炎性細胞可以參與血栓的機化和再通[15-17]。

有關肥大細胞浸潤與曲張靜脈管壁重塑之間關系的研究，國內外已有多家報道，但其結果頗有爭議。有研究發現，曲張靜脈組管壁中肥大細胞的浸潤明顯高于正常靜脈組（P<0.05），認為肥大細胞可能參與靜脈曲張的形成和重塑過程，并通過釋放介質在血管病理生理的改變中發揮其作用[8,18]。有些研究結果卻恰恰相反，即曲張靜脈和正常靜脈血管壁的肥大細胞含量相同，認為肥大細胞浸潤與靜脈高壓無相關性[11,19,20]。

本文結果顯示，血栓組血管壁外膜肥大細胞明顯增多，在滋養血管周圍呈現“聚集征”，中膜、內膜呈散在增多；曲張組血管壁外膜、中膜、內膜肥大細胞均呈零散分布，且無規律；對照組血管壁僅在外膜有肥大細胞散在分布。從血管壁肥大細胞浸潤的定量分析看，有如下特點：①血栓組肥大細胞在外膜、中膜、內膜計數均多于曲張組和正常組（P<0.05）；②曲張組與正常組之間無顯著性差異（P>0.05）；③各組內外膜多于中膜和內膜（P<0.01）；④中膜與內膜之間變化無顯著性差異（P>0.05）。結果表明，血栓組血管壁肥大細胞浸潤--外膜呈“聚集征”，這一血管壁細胞重塑現象與靜脈血栓形成可能有密切的關系。提示靜脈血栓的形成，可能會加重血管壁的缺氧，誘發肥大細胞在血管壁各層的重新分布，可謂一種血管壁自身的保護性反應。筆者可以推斷，在下肢靜脈曲張的發生、發展過程中，炎癥和血栓形成相互作用，伴隨血栓形成，大量的肥大細胞可通過外膜、中膜、內膜的滋養血管遷移并浸潤到靜脈壁，它符合炎癥與血栓形成相互作用的規律性。由此可見，靜脈血栓形成和慢性炎癥可能是導致血管壁肥大細胞大量浸潤的重要因素。

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