乳腺癌組織中MCL1的表達及臨床意義

朱華云， 錢志英， 徐 霞

MCL1(myeloid cell leukemia-1)屬于Bcl-2家族成員之一，大量的文獻研究表明MCL1參與多種細胞的存活［1-2］。近年來發現，MCL1在多種腫瘤中表達升高，并與惡性腫瘤的發生、發展及預后密切相關。其主要通過干擾信號通路的早期分子事件促使線粒體釋放細胞色素C，從而維持細胞的增殖，是控制細胞凋亡的一個重要分子［3］，因此MCL1已成為針對腫瘤治療的有效靶點之一。本研究通過檢測78例乳腺癌組織中MCL1的表達水平，初步探討MCL1與乳腺癌發生、發展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本院乳腺外科2009年1月至2009年12月行乳腺癌手術的組織標本78例，另選取其中的40例乳腺癌組織旁的正常乳腺組織作為對照組。78例均為女性，年齡25～79歲，平均年齡50歲。其中絕經前56例，絕經后22例。所有患者術前經病理診斷證實，術后病理診斷為浸潤性導管癌74例，浸潤性小葉癌3例，黏液腺癌1例。臨床分期(AJCC 2002年)Ⅰ期17例，Ⅱ期53例，Ⅲ期8例。所有患者手術前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療。

1.2 試劑和方法 MCL1多克隆抗體購于ABCAM公司，二抗購于北京中衫生物技術有限公司。收集的全部標本均經10%中性甲醛液固定，梯度脫水、浸蠟和包埋。所取蠟塊行5 μm連續切片、烘烤、脫蠟、HE染色、透明和封片。所有標本均經本院病理科兩位副主任醫師以上職稱的病理醫師診斷證實，并有完整的臨床和病理資料。

應用兔抗人MCL1多克隆抗體對乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中MCL1蛋白進行免疫組化DAB法檢測。實驗步驟如下:(1)石蠟片常規脫蠟。二甲苯洗滌后，分別用100%、95% 、85%乙醇、自來水及蒸餾水按梯度脫水。(2)阻斷內源性過氧化物酶。3%雙氧水孵育10 min。(3)抗原修復。利用微波修復抗原10 min。(4)封閉。滴加非免疫血清，室溫孵育1.5 h。(5)加一抗工作液。加入1∶100兔抗人MCL1多克隆抗體4℃過夜。(6)加二抗工作液。加入生物素標記的二抗工作液，37℃孵育30 min。(7)DAB染色。(8)蘇木素復染。(9)封片。(10)鏡下觀察。

1.3 結果判斷 細胞質或細胞核上存在棕黃色顆粒判為陽性細胞，選背景清晰、陽性表達效果好的切片作統計學分析。每張切片隨機選擇5～10個高倍視野，計數1 000個細胞中的陽性細胞，取其平均數計算陽性細胞表達率。

1.4 統計學方法 所有數據應用SPSS 11.0統計軟件進行統計分析，兩樣本均數比較用t檢驗，方差不齊時采用t'檢驗，多個樣本均數的資料采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MCL1蛋白在乳腺癌及癌旁正常乳腺組織中的表達 MCL1在乳腺癌旁正常乳腺組織中幾乎不表達(圖A)，但是在乳腺癌腺上皮細胞中呈高表達(圖B)，MCL1平均陽性細胞表達率為49.11%，同時表達存在異質性。兩組MCL1陽性細胞表達率存在明顯區別，差異有統計學意義(P＜0.001)，提示乳腺癌組織存在MCL1異常高表達現象。此外，MCL1在腫瘤組織中的表達也存在異質性，在分化差的腫瘤組織中MCL1表達水平更高。

圖B MCL1在乳腺癌組織中的表達 ×200

2.2 MCL1蛋白表達與乳腺癌臨床病理因素的關系 由表1可見，臨床病理Ⅲ期組織中MCL1表達明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)，伴有淋巴結轉移的腫瘤組織中MCL1表達明顯高于未轉移者(P＜0.05)，而MCL1蛋白的表達與患者年齡、腫瘤大小、是否絕經均無關。

3 討論

乳腺癌是最常見的女性惡性腫瘤之一，近年來其發病率呈上升趨勢。研究乳腺癌的病理機制不僅可為其預后判定提供獨立的新指標，也為臨床治療提供新的手段。

已知細胞凋亡過程中的調控環節異常可使DNA受損，干擾其程序性凋亡，致使細胞無限制生長，導致腫瘤的發生、發展［4］。以往的研究表明Bcl-2基因是細胞凋亡過程中線粒體途徑的主要調控因子，其表達與乳腺癌臨床生物學行為密切相關，可以作為判斷乳腺癌預后的指標［5］。MCL1屬于Bcl-2家族蛋白，但是和Bcl-2不同的是，MCL1在細胞內更容易被誘導［6］，且半衰期更短［7］。此外，MCL1 在細胞內的表達更為廣泛，除了在線粒體膜上有表達，在細胞核和細胞漿中均有表達［8］。近年來人們逐漸關注MCL1蛋白在腫瘤發生發展中的作用，研究結果提示MCL1在多種實體瘤中均發揮著重要的作用。MCL1表達上調提示腫瘤的發生，超過85%的轉MCL1基因小鼠在2年內發生了B細胞淋巴瘤［9］;MCL1高表達還與胃癌發生有關，可作為胃癌早期預警的重要指標［10-11］。而且，MCL1表達下調能夠促進腫瘤細胞凋亡，表明其可能成為一些惡性腫瘤的潛在治療靶標。

表1 MCL1蛋白與乳腺癌臨床病理因素的關系

盡管目前已有較多研究顯示MCL1在很多腫瘤中呈高表達，但是在乳腺癌中的作用尚未見報道。本研究采用免疫組化技術檢測78例乳腺癌及40例癌旁正常乳腺組織中MCL1蛋白的表達水平，探討MCL1蛋白與乳腺癌的臨床病理關系，發現MCL1蛋白在有淋巴結轉移者中的表達高于無淋巴結轉移者，且與乳腺癌的分化程度有關，提示MCL1基因可作為乳腺癌治療的有效靶點。

綜上所述，MCL1蛋白的高表達與乳腺癌的發生、發展密切相關，為研究乳腺癌的發病機制及治療手段提供了一個新思路。

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［6］Akgul C，Turner PC，White MR，et al.Functional analysis of the human MCL-1 Gene［J］.Cell Mol Life Sci，2000，57(4):684-491.

［7］Schubert KM，Duronio V.Distinct roles for extracellular-signalregulated protein kinase(ERK)mitogen-activated protein kinases and phosphatidylinositol 3-kinase in the regulation of Mcl-1 synthesis［J］.Biochem J，2001，356(Pt2):473-480.

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