人參皂苷磷脂復合物的制備與質量評價初步研究

陳新梅,吳曉坤,孔得剛,陳 松

(山東中醫藥大學藥學院,山東濟南 250355)

人參皂苷 (ginsenosides)為人參的主要活性成分,具有抗衰老、改善記憶、抑制細胞凋亡和降糖降脂等藥理活性.但人參皂苷極性較大,對生物膜的滲透性差,生物利用度低.磷脂復合物[1～3]能改善藥物的溶解性能、增強藥物的藥理作用、延長作用時間、降低不良反應、提高生物利用度.本研究擬將人參皂苷制成磷脂復合物,以提高其生物利用度.

1 材料

1.1 儀器 UV3031紫外分光光度計 (日本日立);JJ79-1型磁力加熱攪拌器 (山東省鄄城光明儀器有限公司);80-2型離心沉淀機(康華生化器械廠);DMWBA200VC光學顯微鏡(廈門麥克奧迪實業集團有限公司).

1.2 試藥 人參莖葉總皂苷(80%UV,吉林省宏久生物科技股份有限公司,批號:HJ110203);精制蛋黃卵磷脂 lipoid E80 (德國 lipoid公司,批號:1031037);其余試劑為分析純.

2 實驗方法與結果

2.1 人參皂苷磷脂復合物的制備

2.1.1 復合率 利用人參皂苷不溶于三氯甲烷,而磷脂和磷脂復合物均易溶于三氯甲烷的特性,將一定量的人參皂苷和磷脂在一定條件下反應后,減壓除去反應溶劑,再加入適量的三氯甲烷,充分溶解其中的磷脂及復合物,去除上清液,再用少量三氯甲烷洗滌,收集沉淀,干燥并稱重,人參皂苷的初始投藥量(W1)與沉淀量(W2)的差值即為與磷脂復合的人參皂苷的量,從而計算出人參皂苷與磷脂的復合率.

計算公式如下:

2.1.2 正交實驗 選擇人參皂苷與磷脂的投料比、反應時間、藥物濃度及反應溫度為考察因素,各取 3個水平,選用L9(34)正交表進行試驗,因素水平表見表 1,按表 2進行試驗.結果見表 2.

表1 正交因素水平表

表2 正交實驗結果

以復合率為考察指標,由極差分析可知,各因素作用主次為A＞B＞C＞D.確定了人參皂苷磷脂復合物的最佳制備條件A1B1C1D1,為:30℃、以四氫呋喃為反應溶劑,反應時間為 1 h,藥脂比為 1∶1,人參皂苷的濃度為 20 mg·mL-1.

2.1.3 制備工藝的重現 以四氫呋喃為反應溶劑,人參皂苷與磷脂的投料比為 1∶1,藥物濃度為 20 mg·mL-1,于 30℃下反應 1 h.反應完畢,揮干反應溶劑,殘余物用三氯甲烷溶解,離心后取上清液干燥得人參皂苷磷脂復合物.按此工藝制備三批磷脂復合物,平均復合率為 94.5%,RSD為2.16%.

2.2 人參皂苷磷脂復合質量評價初步研究

2.2.1 外觀 蛋黃卵磷脂和人參皂苷磷脂復合物在外觀上有顯著的差別,蛋黃卵磷脂呈粘稠狀,而人參皂苷磷脂復合物呈結晶狀態.

2.2.2 顯微特征 分別取少量蛋黃卵磷脂和人參皂苷磷脂復合物,滴加適量蒸餾水,制成臨時裝片,在光學顯微鏡下觀察.蛋黃卵磷脂及人參皂苷磷脂復合物在顯微鏡下形態如圖1所示.

圖 1 蛋黃卵磷脂及人參皂苷磷脂復合物在光學顯微鏡下觀察結果(×400)A.蛋黃卵磷脂 B.人參皂苷磷脂復合物

2.2.3 最大吸收波長 精密稱取人參皂苷、人參皂苷磷脂復合物適量,分別配成濃度為 0.066、0.072 mg·mL-1的甲醇溶液,以甲醇做空白對照,在 200～400 nm范圍內進行紫外掃描.結果表明人參皂苷在 205 nm處有最大吸收,人參皂苷磷脂復合物在 205 nm處也有最大吸收.結果表明,人參皂苷磷脂復合物中人參皂苷發色基團的結構未發生改變.

3 討論

3.1 本實驗采用溶劑法制備人參皂苷磷脂復合物,選用介電常數較小的有機溶劑四氫呋喃為反應溶劑,通過正交試驗篩選出最佳制備工藝:人參皂苷與磷脂的投料比為 1∶1,藥物濃度為 20 mg·mL-1,于 30℃下反應 1 h.獲得的人參皂苷磷脂復合物平均復合率為 94.5%.

3.2 人參皂苷和磷脂復合物的最大吸收波長在 205 nm處,表明人參皂苷磷脂復合物中人參皂苷發色基團的結構未發生改變.人參皂苷磷脂復合物與磷脂的外觀差別較大,表明形成了磷脂復合物.

[1] 王偉,陳新梅,孫衛東.天然活性成份 -磷脂復合物的研究進展[J].新疆中醫藥,2005,23(2):69-71.

[2] 賀小玲,蘇冰,王東凱,等.羥基喜樹堿磷脂復合物的溶解性考察與表征[J].中國新藥雜志,2010,19(6):541-543.

[3] 許潤春,林彥君,吳品江,等.黃芩苷磷脂復合物制備工藝的研究[J].中華中醫藥雜志,2011,26(1):132-134.