MMP-9和COX-2在子宮內膜癌中的表達及血管生成關系的研究

[摘要] 目的 檢測MMP-9和COX-2在子宮內膜癌組織中的表達，探討二者在子宮內膜癌中的作用及與血管生成的關系。方法 以180例子宮內膜癌標本作為觀察組，80例正常子宮內膜組織作為對照組，采用免疫組織化學方法檢測MMP-9、COX-2和CD105的表達，探討MMP-9和COX-2在不同臨床病理特征的子宮內膜癌中的表達及與CD105標記的血管密度(MVD)之間的關系。結果 MMP-9、COX-2和MVD在觀察組中的表達明顯高于對照組;觀察組中MMP-9、COX-2和MVD均與子宮內膜癌的肌層浸潤深度及淋巴結轉移密切相關;子宮內膜癌中MMP-9、COX-2和MVD之間的表達呈正相關。結論 子宮內膜癌中MMP-9和COX-2高表達，與子宮內膜癌的發生發展關系密切，MMP-9和COX-2可以促進CD105標記的血管生成，聯合檢測MMP-9和COX-2可能對判斷預后有重要意義。

[關鍵詞] 子宮內膜癌;MMP-9;COX-2;CD105;免疫組織化學技術

[中圖分類號] R711.32 [文獻標識碼] A[文章編號] 1673-9701(2010)12-01-03

Expressions of MMP-9 and COX-2 in Endometrial Carcinoma and Its Correlation with Angiogenesis

MENG Qian

Jining Medical College，Jining 272013，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of MMP-9 and COX-2 in endometrial carcinoma and their relationship with angiogenesis. Methods The study included 180 cases of endometrial carcinoma as observation group and 80 cases of endometrium tissue as control group. The expression of MMP-9，COX-2 and CD105 was analyzed in endometrial carcinoma by IHC. Results There was high expression of MMP-9，COX-2 and MVD in the observation group. The expression of MMP-9，COX-2 and MVD was associated with infiltration degree and lymph node metastasis. There was a positive correlation between MMP-9 and COX-2，MMP-9 and MVD，COX-2 and MVD in endometrial carcinoma. Conclusion The high expression of MMP-9 and COX-2 in endometrial carcinoma is closely related to its occurrence and development，MMP-9 and COX-2 can promote angiogenesis labeled with CD105，and the joint detection of MMP-9 and COX-2 may be important for the prognosis.

[Key words] Endometrial carcinoma;MMP-9;COX-2;CD105;IHC

腫瘤的生長是腫瘤的重要生物學行為之一，其過程常依賴血管的生成。基質金屬蛋白酶家族(MMPs)是一大類鋅依賴性內肽酶家族，在腫瘤的浸潤性生長和轉移中起重要作用。環氧化酶(COX)是花生四烯酸合成前列腺素過程中重要的限速酶，其中的COX-2是一種誘導酶，可參與機體的多種功能[1]。本實驗應用免疫組織化學技術檢測子宮內膜癌中MMP-9和COX-2蛋白的表達情況，探討其與CD105標記的血管密度的關系，以期為探討腫瘤的生物學行為提供理論依據。

1材料與方法

1.1臨床資料

收集山東大學第二醫院、濟南市中心醫院2002年1月～2005年12月子宮內膜癌術后存檔的蠟塊作為觀察組。納入標準:①經兩位病理主治醫師再次明確診斷。②均為子宮內膜癌根治術后的標本。③術前均未進行任何治療。④臨床資料完整。共收集180例，患者年齡40～78歲，平均56.1歲。選取因子宮肌瘤而進行全子宮切除的正常子宮內膜組織80例作為對照組，其中增生期子宮內膜41例，分泌期子宮內膜39例。

1.2MMP-9、COX-2和CD105蛋白檢測

MMP-9、COX-2和CD105均購自武漢博士德生物技術有限公司，應用免疫組織化學技術檢測蛋白的表達。主要步驟:脫蠟，水化組織切片，3%H2O2去離子水孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶;抗原修復后分別滴加一抗，室溫37℃孵育1～2h或過夜，PBS沖洗，5min×3次;滴加生物素標記的二抗，室溫37℃孵育20min，PBS沖洗，5min×3次;滴加辣根酶標記鏈霉卵白素，室溫37℃孵育20～30min，PBS沖洗，5min×3次;應用DAB顯色劑顯色;自來水充分沖洗、復染、脫水、透明、封片。

1.3結果判定標準

MMP-9免疫組化染色結果的判定是以細胞質染色呈棕黃色顆粒者為陽性反應細胞，COX-2結果的判定是以細胞質或細胞核呈棕黃色顆粒者為陽性反應細胞，計算高倍鏡下(×400)隨機選擇的5個視野中陽性細胞占全部計數腫瘤細胞的百分率，平均每個視野細胞質(核)呈陽性反應的細胞數≥10%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應的細胞數<10%為陰性。CD105免疫組化結果的判定:以微血管內皮細胞胞漿染色呈棕黃色顆粒者為陽性反應細胞，確定棕色染色的內皮細胞或細胞叢為一個血管，先在低倍鏡下全面觀察切片，以確定腫瘤內血管密度最高處，也即熱點處。再在高倍鏡下以與周圍腫瘤細胞和結締組織成分明顯區別的任何一個棕色染色的內皮細胞或細胞叢為一個血管，只要結構不相連，其分支結構也作為一個血管計數。記錄3 個視野內的微血管數，取其平均數作為該患者的MVD 值。微血管密度的計數和評價計數癌巢周邊標記陽性的新生血管，癌組織、癌旁組織和非癌組織血管不宜計數[2]。

1.4統計學處理

數據采用SAS 6.12統計軟件進行統計分析，應用卡方、t檢驗及相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1MMP-9、COX-2蛋白和MVD在觀察組與對照組中表達的比較

由表1可見，MMP-9、COX-2蛋白和MVD在觀察組與對照組中的表達差別有統計學意義(P<0.05)，即MMP-9、COX-2蛋白和MVD在子宮內膜癌中呈高表達。

2.2MMP-9、COX-2和MVD的表達與子宮內膜癌臨床病理特征的關系

由表2可見，子宮內膜癌的不同肌層浸潤及有、無淋巴結轉移的MMP-9、COX-2蛋白和MVD表達的比較中，差別有統計學意義(P<0.05)。

2.3子宮內膜癌中MMP-9、COX-2和MVD表達的關系

經相關分析，在子宮內膜癌中MMP-9和COX-2的表達呈正相關(r=0.41，P<0.05);MMP-9和MVD的表達呈正相關(r=0.34，P<0.05);COX-2和MVD的表達呈正相關(r=0.32，P<0.05)。

3討論

血管新生在子宮內膜癌的發生發展中有重要意義，血管生成使腫瘤能夠獲得足夠的營養物質。而血管新生的標記物是研究腫瘤血管新生的基礎。CD105是一種與增生有關的內皮細胞的細胞膜抗原，在血管內皮細胞中有豐富的表達。CD105是現今被人們認為標記血管新生最好的標記物，明顯優于CD34、VIII因子等血管標記物。Duff等[3]報道CD105是一種新生血管的細胞黏附分子，能調節細胞對轉化生長因子的反應，在增殖的腫瘤血管內皮細胞中表達較高，而在正常血管中表達較少。MMP-9也稱為明膠酶B，以酶原形式分泌[4]，可產生于正常組織細胞，當組織愈合或炎癥時可被激活形成IV型膠原酶，在細胞外基質的降解和再塑造中發揮作用[5]。COX是前列腺素合成過程中重要的限速酶，目前發現哺乳動物的COX有2個同工酶，即COX-1和COX-2。COX-2在體內分布廣泛，主要存在于哺乳動物細胞的微粒體中，在一些炎癥及腫瘤組織中表達明顯升高，被認為與腫瘤生成有關[6]。

本實驗應用免疫組織化學技術檢測子宮內膜癌中MMP-9、COX-2和CD105的表達，結果顯示，子宮內膜癌中MMP-9和COX-2表達的陽性率明顯高于正常子宮內膜組織，CD105標記的血管密度明顯高于正常子宮內膜，提示MMP-9和COX-2參與了子宮內膜癌的發生發展，也提示腫瘤中存在著CD105陽性的血管新生。MMP-9和COX-2均與腫瘤的肌層浸潤及淋巴結轉移有關，由于兩個指標均與患者預后相關，因此提示聯合檢測MMP-9和COX-2可能對判斷子宮內膜癌患者的預后有重要價值。實驗結果顯示腫瘤中MMP-9和COX-2的表達呈正相關，提示兩者可能在子宮內膜癌發生發展中起重要的協同作用。COX-2促進腫瘤進展時可以通過促進腫瘤細胞細胞外基質的降解而發揮生物學作用。MMP-9和COX-2均與CD105標記的血管密度呈正相關，提示MMP-9與COX-2在起協同促腫瘤發生發展時可能促進腫瘤的血管生成，其機制可能與MMP-9和COX-2調節VEGF的表達有關[7]。

總之，MMP-9、COX-2在子宮內膜癌中呈高表達，二者可能具有協同作用，MMP-9和COX-2能促進CD105陽性的血管新生，聯合檢測MMP-9和COX-2的表達可能對判斷預后有重要意義。

[參考文獻]

[1] 產松苗，歐希龍，孫為豪，等. COX-2和MMP-9在食管鱗癌組織中的表達及血管生成的關系[J]. 世界華人消化雜志，2009，17(22):2259- 2265.

[2] 趙妉勃，姜慧峰，劉愛東. 結、直腸癌組織中Survivin和CD105的表達及意義[J]. 山東醫藥，2008，48(32):101-102.

[3] Duff SE，Garland JM，Kumar S. CD105 is important for angiogenesis:evidence and potential applications[J]. FASEB J，2003，17(9):984-992.

[4] 劉士生，李巍，劉愛東，等. 基質金屬蛋白酶-9和上皮型黏附素在胃癌中的表達[J]. 北京醫學，2008，30(9):554-557.

[5] 劉愛東，龐久玲，劉士生. 胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究[J]. 中國老年學雜志，2009，29(7):886-887.

[6] 馮天達，劉云會，劉碩. 星形細胞腫瘤組織中Survivin與COX-2基因表達及其相關性研究[J]. 廣東醫學，2007，28(2):225-228.

[7] 胡向榮，刁路明，趙碧芬，等. COX-2、E-cadherin、VEGF在大腸癌中的表達及意義[J]. 腫瘤學雜志，2007，13(5):403-405.

(收稿日期:2010-02-02)