酶聯(lián)免疫法和發(fā)光免疫法測定乙肝病毒標(biāo)志物比較

[摘要] 目的 比較發(fā)光免疫、酶聯(lián)免疫這兩種免疫學(xué)方法檢測乙肝病毒標(biāo)志物的特點(diǎn)和各自的應(yīng)用價(jià)值。方法 用這兩種不同的免疫學(xué)方法分別對(duì)182例乙肝患者的血清標(biāo)本進(jìn)行檢測，然后計(jì)算結(jié)果、分析結(jié)果。結(jié)果 兩種方法對(duì)乙肝病毒標(biāo)志物前四項(xiàng)(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb)均敏感，靈敏度達(dá)到ng/mL，結(jié)果的相互符合率也達(dá)到96%以上。而對(duì)HbcAb而言，結(jié)果的相互符合率僅為89%，因?yàn)榘l(fā)光免疫法檢測HbcAb時(shí)未稀釋標(biāo)本，所以發(fā)光免疫法的靈敏度要高于酶免法。結(jié)論 兩種實(shí)驗(yàn)方法各有特點(diǎn)，操作時(shí)應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況來選擇。

[關(guān)鍵詞] 酶聯(lián)免疫法; 發(fā)光免疫法; 乙肝病毒標(biāo)志物

[中圖分類號(hào)] R512.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2010)09-65-02

現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)分析用的最廣的方法是酶聯(lián)免疫法和發(fā)光免疫法。這兩種方法哪種的靈敏度高、它們又有什么樣的不足之處，現(xiàn)就這兩種方法對(duì)乙肝病毒表面標(biāo)志物的檢測作比較，結(jié)論如下。

1 材料與方法

1.1 材料

收集182例臨床確診乙肝的病人靜脈血樣離心，分離出的血清用未加抗凝劑的密閉試管中保存，放置于-20℃環(huán)境中備用。酶免法表面抗原質(zhì)控品由北京市臨檢中心提供，濃度為2ng/mL。

1.2 試劑和儀器

酶聯(lián)免疫法試劑采用上海科華生物工程有限公司生產(chǎn)的乙肝兩對(duì)半診斷試劑盒(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);試劑為同批號(hào)試劑，批號(hào):20081106，校期:20091105。儀器有洗板機(jī)(BIORAD MODEL 1575)，酶標(biāo)比色儀(Rayto RT-6000)。化學(xué)發(fā)光法采用北京源德生物醫(yī)學(xué)工程公司JETLIA-962化學(xué)發(fā)光免疫測定系統(tǒng)及配套使用的專用試劑盒，試劑批號(hào):200902012290318A，校期:20090917。

1.3 方法

酶聯(lián)免疫法的操作嚴(yán)格按照使用說明書進(jìn)行，以表面抗原定值血清作為質(zhì)控，設(shè)空白一空，陰陽對(duì)照各兩孔。主要步驟是加樣，加酶，孵育，洗板，加顯色劑，顯色，比色。其中核心抗體檢測時(shí)用生理鹽水作1∶30稀釋。發(fā)光免疫測定與酶免法基本相同，但注意事項(xiàng)較多。變異系數(shù)(CV)用2ng/mL表面抗原質(zhì)控品隨樣本做10個(gè)檢測孔，以測得值(酶免為OD值，發(fā)光免疫為相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度)計(jì)算批內(nèi)差異，統(tǒng)計(jì)兩個(gè)批次測定的結(jié)果計(jì)算批間差異。

1.4 結(jié)果判斷

酶免法:表面抗原、表面抗體和e抗原以陰性對(duì)照平均OD與2.1相乘的結(jié)果作為臨界值，即COV值，大于COV結(jié)果為陽性;e抗體與核心抗體以陰性對(duì)照平均OD值與0.5相乘的結(jié)果作為COV值，小于COV結(jié)果為陽性[1]。發(fā)光免疫法:表面抗原、表面抗體和e抗原血清樣本的熒光強(qiáng)度與陰性對(duì)照熒光強(qiáng)度的平均值的比值≥2.1為陽性，<2.1為陰性;e抗體血清樣本的熒光強(qiáng)度與陰性對(duì)照熒光強(qiáng)度的平均值的比值≤0.3為陽性，>0.3為陰性;核心抗體血清樣本的熒光強(qiáng)度與陰性對(duì)照熒光強(qiáng)度的平均值的比值≤0.1為陽性，>0.1為陰性。以上數(shù)值為我室建立的Cut off值。

2 結(jié)果

2.1 兩種方法檢測乙肝表面抗原的靈敏度

見表1，兩種方法均能檢測到濃度為0.1ng/mL的表面抗原。但對(duì)核心抗體的檢測發(fā)光免疫法的靈敏度要明顯高于酶免法。

2.2 兩種方法的變異系數(shù)

見表2。其中酶免法的批內(nèi)、批間差異均比發(fā)光免疫法要大。

2.3 對(duì)182例標(biāo)本乙肝五項(xiàng)檢測的結(jié)果一致性

見表3。其中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HbeAb的符合率在96%以上，而HbcAb的符合率僅為89%。

3 討論

就靈敏度來說兩種方法差別不大，對(duì)乙肝五項(xiàng)檢測來說，除了核心抗體的差別較大外，前四項(xiàng)差別較小。但要注意空白對(duì)照與陰性對(duì)照吸光度過高時(shí)的問題。

由于試劑的原因，方法學(xué)的差異以及其他影響因素均會(huì)導(dǎo)致非特異性反應(yīng)的發(fā)生。相對(duì)來說，對(duì)發(fā)光免疫法的影響較小。從兩種試驗(yàn)結(jié)果的批內(nèi)、批間的符合率來看，差異越小，結(jié)果的重復(fù)性越好。所以說酶免法不適合作定量檢測。

發(fā)光免疫法可以通過不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品來建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，從而得到定量結(jié)果。酶免法時(shí)，cut-off值2～4倍以內(nèi)的陽性結(jié)果均以弱陽性來報(bào)告。

酶免法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡單方便，適合大量標(biāo)本，成本低;但因靈敏度過高，反應(yīng)孔間隔距離近，易相互污染，所以說對(duì)部分陽性標(biāo)本應(yīng)予復(fù)查，以減少錯(cuò)報(bào)。發(fā)光免疫法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，重復(fù)性好，可定量處理樣本;但成本相對(duì)較高[2]。

從以上兩種試驗(yàn)方法的比較可以看出，它們各有優(yōu)缺點(diǎn)。從免疫學(xué)檢驗(yàn)今后的發(fā)展來看，雖然酶免法一直處于主導(dǎo)地位，但將來是否有操作更方便，、試劑更廉價(jià)地方法取代它，這也需要我們檢驗(yàn)界的共同努力，以使方法不斷更新，更好地用于臨床檢驗(yàn)中去。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陳慧英，張錦鋒，岑小鵬，等. ELISA檢測乙型肝炎HBsAg室內(nèi)質(zhì)控血清的試劑與使用[J]. 上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志，2000，15(4):203-205.

[2] 肖銀龍，殷改芳. 化學(xué)發(fā)光免疫分析實(shí)驗(yàn)及其臨床評(píng)價(jià)[J]. 蘇州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，20(6):536.

(收稿日期:2010-01-06)