旱黑口服液對D-半乳糖至衰老模型大鼠空間學習記憶的影響

李永格

旱黑口服液為旱蓮草與黑豆兩種中藥以一定比例配制而成。旱蓮草取全草人藥，具有養肝益腎，涼血止血的作用［1］。黑豆通腎經，久服可填精髓，加氣力，明目，長肌膚益顏色，變白不老［2］。我室曾報道旱黑口服液能夠防止衰老小鼠運動能力下降，學習記憶障礙等衰老體征［3］，其作用機制可能是通過提高衰老小鼠心、腦細胞膜上Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性，延緩衰老［4］，但從行為學上驗證旱黑口服液抗衰老的實驗不多。本實驗通過Morris水迷宮，觀察旱黑口服液對D-半乳糖致衰老大鼠行為學的影響。

1 材料和方法

1.1 動物 雄性，SD大鼠(150～250 g)，由本校動物房提供。自由攝食和飲水，在實驗環境中適應3天后進行實驗。大鼠隨機分為3組:正常對照組、模型組和旱黑口服液干預組。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 D-半乳糖為上海國藥集團化學試劑有限公司產品(批號:F20090711)。Morris水迷宮為一組電腦自動攝像裝備系統(成都泰盟)

1.2.2 造模 每天上午給予模型組和干預組100 mg/kgD-半乳糖皮下注射，共42 d。正常對照組每天注射等量0.9%氯化鈉注射液。

1.2.3 治療 采用旱黑口服液灌胃治療。造模第20天開始給予干預組大鼠20 g//(L·kg·d)旱黑口服液灌胃。

1.2.4 檢測指標

1.2.4.1 Morris水迷宮檢測 參照文獻［5］

1.3 統計學處理 各組數據用均數±標準差(x±s)表示，并用SPSS 13.0統計學軟件進行處理，組間差異用t檢驗判定，P＜0.05有統計學意義。

2 結果

2.1 定位航行試驗結果 在定位航行實驗中，3組大鼠尋找平臺的潛伏期均隨著訓練進程而顯著下降;模型組逃避潛伏期均長于空白組(P＜0.01)，而旱黑口服液干預組逃避潛伏期均低于模型組(P＜0.05);旱黑口服液干預組逃避潛伏期均長于空白組，兩者比較差異(P＞0.05)如圖1示。表明旱黑口服液能明顯縮短模型組逃避潛伏期，但不能恢復到空白組的水平。

圖1 3組大鼠在不同的訓練時間逃避潛伏期比較

2.2 空間探索試驗結果 結果顯示，模型組大鼠穿越平臺所在原象限的距離占總游泳距離的百分比為(23.56±3.54)%，明顯小于空白組大鼠(50.81±6.75)%和旱黑口服液干預組(40.86±6.75)%(P＜0.01)，有顯著差異。模型組大鼠穿越平臺所在原象限的時間占總游泳時間的百分比為(20.51±4.64)%，小于空白組大鼠的(26.31±4.56)%和旱黑口服液干預組的(23.16±5.65)%(P＞0.05)，無明顯差異。表明模型組大鼠記憶保持能力下降，通過旱黑口服液治療后，受損的記憶保持力得以恢復。

3 討論

衰老指機體生長發育成熟后，機體的生理功能逐漸下降，組織器官逐步發生退行性改變。其中，神經系統和大腦的變化尤為明顯，表現為學習和記憶能力下降。隨著學習記憶腦機制研究的不斷深入以及尋找有效防治認知障礙類疾病方法的需要，客觀準確地評價實驗動物的學習記憶水平已經成為非常重要的研究內容。Morris水迷宮被認為是研究空間學習記憶的一種非常好的方法［6，7］，得到世界各國從事認知領域科學家的推廣和應用。經典的Morris水迷宮所檢測的是大鼠在多次的訓練中，學會尋找固定位置的隱蔽平臺，形成穩定的空間位置認知，這種空間認知是加工空間信息(外部線索)形成的。平臺的位置與大鼠自身所處的位置和狀態無關，是一種以我為參照點的參考認知，所形成的記憶是一種空間參考記憶。從信息的加工和提取方式來看，這種空間參考記憶進入意識系統，其儲存的機制主要涉及邊緣系統(如海馬)以及大腦皮層有關腦區屬于陳述性記憶。而臨床衰老和癡呆的患者，正是陳述性記憶首先受損而且比較突出［8］。所以從檢測的記憶屬性來說，運用Morris水迷宮來進行防治此類疾病有效藥物的篩選研究是比較恰當的。

本研究采用皮下注射D-半乳糖誘導大鼠衰老模型，Morris水迷宮觀察旱黑口服液對其空間學習記憶的影響。實驗結果表明所有大鼠在定位航行實驗中逃逸潛伏期均隨訓練次數增加而下降，但旱黑口服液組大鼠的平均逃逸潛伏期明顯短于模型組，提示其學習和記憶的獲得與鞏固過程提高;在空間探索實驗中，旱黑口服液組大鼠在平臺象限探索時間百分比和距離百分比均明顯長于對照組，提示旱黑口服液組大鼠對已存儲記憶的讀出或提取能力顯著上升。總之，通過Morris水迷宮檢測可以發現旱黑口服液具有明顯改善衰老大鼠空間學習和記憶的功能，且此檢測方法是完全適合于這種衰老模型的研究。

［1］丁安偉.現代中藥臨床手冊.南京:江蘇科學技術出版社，2000:365.

［2］明李時珍.本草綱目下冊.人民衛生出版社，1982，11:1500-1501.

［3］朱立志，丁玉琴，周玲生.旱黑口服液對D-半乳糖致衰老小鼠運動能力的影響.鄭州大學學報，2006，41(2):369-371.

［4］丁玉琴，楊坦 旱黑口服液對衰老小鼠心、腦細胞膜Na+-K+ATPase、Ca2+-Mg2+ATPase活性的影響.醫學信息.2005，18(10):1343-1345.

［5］徐穎，張志雄，等.電針對衰老模型大鼠學習記憶及海馬CA1區LTP的影響.中國老年學雜志.2008，8(28):1568-1570.

［6］Florian C，Roullet P.Hippocampal CA3 region is crucial for acquisition and memory consolidation in Morris water maze task in mice.Behav Brain Res，2004，154(2):365-374.

［7］Sargolini F，Florian C，Oliverio A，et al.Differential involvement of NMDA and AMPA receptorswithin the nucleusaccumbens in consolidation of information necessary for place navigation and guidance strategy in mice.Learn Mem 2003，10:285-292.

［8］Squire L R，Zola-Morgan S.Memory，brain system and behavior.Trends in Neuroscience，1988，11:170.