三葉因子1和環氧合酶-2在66例胃癌組織中的表達*

賴銘裕,廖曉霞,梁志海,石 磊,黃杰安,唐國都

(廣西醫科大學第一附屬醫院:1.老年消化內科;2.消化內科,南寧530021)

環氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)是前列腺素合成過程中一個重要的限速酶,其高表達與腫瘤發生、發展密切相關。近年來,關于胃癌發病機制的研究中,三葉因子(trefoil factors,TFFs)與胃癌的發生、發展逐漸引起研究者的關注。三葉因子1(trefoil factor 1,TFF1)是三葉因子家族成員之一,其分子中具有特定的三葉草結構域,這種結構的穩定性使其具有明顯的抗酸、抗蛋白酶和抗熱分解特性,對胃腸道黏膜有保護和修復作用。TFF1與胃癌之間的關系尚不十分明確,因此,用免疫組化方法研究TFF1和COX-2在正常胃黏膜組織、癌旁組織和胃癌組織中的表達情況,初步探討其在胃癌發生、發展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料 選取廣西醫科大學第一附屬醫院2005年1月至2007年9月接受胃大部切除術的胃癌標本66例,均經組織病理學檢查證實。所有標本術前均未接受非甾體抗炎藥治療及放、化療。其中男44例,女 22例,年齡 29～74歲,平均55.9歲。高、中分化腺癌18例,低、未分化腺癌48例;未侵及漿膜層者26例,侵及漿膜層及漿膜外者40例;發生局部淋巴結轉移者29例,無局部淋巴結轉移者37例。同時取距癌緣3～5 cm的癌旁組織66例、正常胃黏膜組織42例作為對照組。試劑采用鼠抗人TFF1單克隆抗體(即用型)、鏈霉菌抗生素蛋白-生物素-過氧化物酶(S-P)免疫組化試劑盒和二氨基聯苯(DAB)顯色劑,均購自福建邁新生物技術開發公司;兔抗人COX-2單克隆抗體(工作濃度1∶200)購自美國Santa Cruz公司。

1.2 檢測方法 所有標本均經10%甲醛固定,常規脫水、透明、滲蠟、包埋,4 μ m厚連續切片。常規脫蠟、水化,采用免疫組化染色超敏2步法(SP染色),DAB顯色,蘇木素復染,吹干,具體操作按S-P試劑盒說明書進行。陰性對照采用生理鹽水磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗,其余步驟相同。

1.3 評判標準 陽性信號為細胞胞漿和胞膜上出現黃色或棕黃色染色。每例取5個高倍視野(400倍),用病理圖像分析儀測定陽性信號平均灰度值,灰度值越高,TFF1和COX-2表達越弱。

1.4 統計學方法 使用SPSS11.5統計軟件進行分析,采用χ2檢驗,以 P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 TFF1在不同胃組織中的表達 TFF1在胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的陽性信號平均灰度值分別為(209.40±16.00)、(199.12±16.68)和(189.17±16.20),各組間兩兩比較,差異均有統計學意義(P＜0.01),見表 1、彩插Ⅱ圖1～3。

2.2 COX-2在不同胃組織中的表達 COX-2在胃癌組織、癌旁組織和正常胃黏膜組織中的陽性信號平均灰度值分別為(191.21±10.19)、(209.91±4.85)和(214.23±5.85),各組間兩兩比較,差異均有統計學意義(P＜0.01),見表 2、彩插Ⅱ圖4～ 6。

表1 TFF1在不同胃組織中的表達(±s)

表1 TFF1在不同胃組織中的表達(±s)

與胃癌組織比較,▲:P＜0.01;與癌旁組織比較,△:P＜0.01。

組織 n 平均灰度值胃癌組織 66 209.40±16.00癌旁組織 66 199.12±16.68▲正常胃黏膜組織 42 189.17±16.20△

表2 COX-2在不同胃組織中的表達(±s)

表2 COX-2在不同胃組織中的表達(±s)

與胃癌組織比較,▲:P＜0.01;與癌旁組織比較,△:P＜0.01。

組織 n 平均灰度值胃癌組織 66 191.21±10.19癌旁組織 66 209.91±4.85▲正常胃黏膜組織 42 214.23±5.85△

2.3 TFF1與COX-2的相關性分析 TFF1與COX-2的表達呈負相關(r=-0.891,P＜0.01)。

3 討 論

COX-2是前列腺素合成過程中一個重要的限速酶。生理狀態下,COX-2基因在絕大多數組織細胞中不表達,只有在細胞內外廣泛的刺激下才呈誘導性表達。近年來研究發現COX-2高表達與腫瘤發生、發展密切相關。COX-2在腫瘤細胞的增殖、凋亡過程中起重要作用[1-2],它的表達延長了癌細胞的生存期,有利于癌細胞發生浸潤與轉移,同時在正常組織細胞中COX-2的表達則有利于細胞基因突變的累積,增加細胞癌變的可能性;腫瘤細胞中COX-2的表達可通過上調黏附因子、基質金屬蛋白酶等促進腫瘤細胞發生浸潤與轉移[3]。馬丹等[4]研究發現COX-2在胃癌組織中的表達陽性率為76.74%,COX-2蛋白的表達可作為反應胃癌侵襲轉移的生物學指標。本研究結果顯示在正常胃黏膜組織、癌旁組織、胃癌組織中,COX-2表達呈逐漸上升趨勢,差異有統計學意義(P＜0.01)。提示隨著COX-2表達的不斷增加,促進細胞的無限增殖、分化,抑制細胞凋亡,最終發展成為胃癌。

TFF1于1982年由Masiakowski等[5]在雌激素誘導的人乳腺癌細胞系MCF-7中獲得。TFF1在正常組織中主要由胃竇和胃體的隱窩及表層上皮的黏膜細胞產生,而在食管、結腸、胰腺、肝臟、前列腺、卵巢等組織中低水平表達甚至不表達。大量研究發現TFF1表達于正常胃黏膜,在胃黏膜腸化、不典型增生到胃癌的發展過程中TFF1表達逐漸降低,50%甚至更多的胃癌組織TFF1表達缺失[6-7]。提示TFF1進行性缺失參與了早期胃癌的發生。Park等[8]對基因圖譜分析時發現,原發性胃癌發生時,人染色體21q22常有復位基因的缺失,而此位點正是TFF1的基因所處位置,表明TFF1在胃癌發生的早期起作用,進而可能影響相關癌基因及抑癌基因的改變,促進胃癌的發生。本研究結果顯示在正常胃黏膜組織、癌旁組織、胃癌組織中,TFF1表達呈逐漸減弱趨勢,差異有統計學意義(P＜0.01)。

Milne等[9]研究發現在傳統胃癌組織中COX-2過表達而TFF1表達缺失,提示2種分子之間可能存在相互作用并引起TFF1的下調、COX-2的上調以及通過2種分子所特有的途徑共同在胃癌的發生、發展中發揮作用。Regalo等[10]研究證實,C/EBP-β作為COX-2的一個轉錄因子,通過其與 COX-2的關系而在胃癌的發生中扮演重要角色。而現已知C/EBP-β是TFF1下調的一個轉錄因子[11]。有研究發現TFF1可通過依賴src的自體活化環調控前列腺素和TXA-2表達,抑制COX-2能阻斷 TXA-2R途徑,抑制 TFF1誘導的侵襲和血管生成[12]。本研究相關性分析顯示TFF1與COX-2的表達呈負相關(r=-0.891,P＜0.01),可認為在胃癌的發生過程中,TFF1和COX-2之間可能存在相互作用或是通過2種分子共有的途徑引起TFF1的下調、COX-2的上調。COX-2的表達增加可抑制TFF1的表達,使TFF1表達減弱,細胞增殖與凋亡失衡,最終導致胃癌的發生。

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