兩省交界地區β地中海貧血復合缺失型α地中海貧血的發生率及基因診斷

郭柳薇,黃 ,李穎莉

(廣西醫科大學第七附屬醫院,廣西梧州 543001)

兩省交界地區β地中海貧血復合缺失型α地中海貧血的發生率及基因診斷

(廣西醫科大學第七附屬醫院,廣西梧州 543001)

目的研究兩省(廣東、廣西)交界地區β地中海貧血雜合子復合缺失型α地中海貧血的基因型及發生率。方法采用RDB/PCR技術檢測17種中國人較常見β地中海貧血基因突變位點。采用單管多重PCR技術檢測3種缺失型α地中海貧血(左缺失-α4.2缺失,右缺失-α3.7缺失,東南亞型缺失__SEA)。結果在217例β地中海貧血雜合子標本中共檢出30例復合缺失型α地中海貧血,檢出率為 13.82%。 其中β 地中海貧血雜合子合并__SEA/α α20例(9.21%),合并-α3.7/α α7例(3.22%),合并-α4.2/α α2例(0.92%),合并__SEA/-α4.21例(0.46%)。檢出的 30例β地中海貧血基因突變類型共有 8種,分別是CD41-42(-TCT T)、TATAboxnt-28(A→G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅱnt654(C →T)、β E(G →A)、TATAboxnt-29(A→G)、CD43(G→T)。結論兩省交界地區人群β地中海貧血雜合子復合缺失型α地中海貧血的發生率為13.82%,β地中海貧血基因突變類型呈現多樣性。在遺傳咨詢和產前診斷中應引起重視。

α地中海貧血;β地中海貧血;基因診斷

地中海貧血(Thalassemia)是由于珠蛋白肽鏈合成受到部分或完全抑制,造成肽鏈合成不平衡所引起的一組遺傳性溶血性貧血,分為α地中海貧血和β地中海貧血。由于珠蛋白缺失的多樣性,所致缺乏的珠蛋白鏈的類型、數量及臨床表現不一[1]。α地中海貧血和β地中海貧血是中國南方(尤其是廣東和廣西)最常見、發病率最高、危害最大的人類遺傳病之一。梧州市在地理上是廣東與廣西交界的地方,根據本院兩省交界地區隨機人群篩查資料表明,α地中海貧血基因檢出率為9.44%,β地中海貧血基因檢出率為8.15%[2]。兩種不同類型地中海貧血雜合子之間婚配,即有生育α與β地中海貧血雙重雜合子的機會。為了解兩省交界地區β地中海貧血雜合子復合缺失型α地中海貧血的發生率及基因型分布,本實驗對217例β地中海貧血基因攜帶者進行了α珠蛋白基因分析研究,現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 217例標本為廣西梧州市及其周邊的岑溪、蒼梧、藤縣和廣東的封開、郁南、都城等地來本院產檢的孕婦及其丈夫以及部分婚檢者,受檢者中男80例,女137例。年齡20～40歲。

1.2 地中海貧血基因診斷 由深圳亞能生物技術有限公司提供試劑,按說明進行操作。

1.3 標本采集和制備 用EDTA-K2抗凝血2 mL,用全血DNA快速提取試劑從抗凝全血中抽提人基因組DNA,按說明進行操作。

1.4 β地中海貧血基因檢測 采用RDB/PCR技術檢測17種中國人較常見β地中海貧血基因突變位點。取3μ L DNA(2～200 ng/L)加入反應管中,PCR條件:50℃15 min,95℃10 min,然后94℃60 s→55℃30 s→72℃30 s經35個循環,最后72℃延伸5 min。將擴增產物與結合有中國人較常見的17種β地中海貧血基因突變寡核苷酸探針的膜條進行反向點雜交,檢測中國人群常見的8個位點:CD41-42(-TCT T),IVS-2-654(C→T),CD17(A→T),-28(A→G),CD26(G→A),CD71-72(+A),CD43 G→T,-29 A→G)和9個少見位點突變(起始密碼子 ATG→AGG,CD14-15(+G),CD27-28(+C),-32(C→A),-30(T→C),IVS-1-1(G→T),IVS-1-5(G→C),CD31(-C),CAP+40-+43(-AAAC)。

1.5 α地中海貧血基因診斷 采用單管多重PCR技術檢測3種缺失型α地中海貧血(左缺失-α4.2缺失,右缺失-α3.7缺失,東南亞型缺失__SEA)。取 DNA 3 μ L(2～200 ng/L)加入反應管中。PCR反應條件:97℃15 min,然后98℃45 s→64℃90 s→72℃180 s經35個循環,最后72℃延伸5 min。取8μ L的PCR產物在1.2%的瓊脂糖凝膠(加EB)電泳,紫外燈下觀察基因圖譜為 1 800 bp、2 000 bp、1 600 bp、1 300 bp 的條帶,分別為α珠蛋白正常基因,-α3.7缺失型、-α4.2缺失型、__SEA缺失型的擴增產物。

2 結 果

RDB檢測β珠蛋白基因結果:檢測出217例β地中海貧血基因攜帶者。在217例β地中海貧血中共檢出30例復合缺失型α地中海貧血。檢出率為13.82%。其中β地中海貧血雜合子合并__SEA/α α20 例(占9.21%),合并-α3.7/α α7 例(3.22%),合并-α4.2/α α2 例(0.92%),合并__SEA/-α4.21 例(0.46%)。 檢出的30例β地中海貧血基因突變類型共有8種,分別是CD41-42(-TCTT)、TATAboxnt-28(A →G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅱnt654(C →T)、βE(G→A)、TATAboxnt-29(A→G)、CD43(G→T)。具體結果見表1、2。

表1 217例β地中海貧血雜合子基因型分布

表2 30例輕型β地中海貧血復合α地中海貧血雙重雜合子基因分布

3 討 論

在地中海貧血高發區,β地中海貧血復合α地中海貧血的檢出率已引起人們的關注。人類有4個α-珠蛋白基因位于16對染色體上,每條染色體上有2個α-基因(α 1和α 2)。如果一條16號染色體缺失1個α基因者稱為α+地中海貧血(亦稱α地中海貧血2),缺失2個α基因者稱為α0地中海貧血(亦稱α地中海貧血1)。在東南亞地區α-基因的改變以缺失型較為常見,最常見的為東南亞缺失(__SEA/α α)、左缺失(-α4.2/α α)及右缺失(-α3.7/α α)。

本組資料顯示,兩省交界地區α、β復合型地中海貧血的檢出率為13.82%,其中復合α地中海貧血1的檢出率為9.21%,復合右缺失α地中海貧血2為3.22%,復合左缺失α地中海貧血2為0.92%。與韓俊英等[3-4]報道的大致相符。值得注意的是有1例CD17(A→T)復合 HbH(__SEA/-α4.2),出現3種基因型同存現象。這類地中海貧血不僅有β基因的缺陷而且又有α基因的缺失,這使得α和β珠蛋白鏈的失衡狀態有所改善,相應的臨床癥狀減輕,表現為中間型地中海貧血[5]。常常表現β地中海貧血的特征,如果不作基因診斷,往往會掩蓋α地中海貧血的存在。

引起β地中海貧血的分子機制主要是β珠蛋白基因點突變,是中國南方最常見的遺傳性溶血性疾病之一。據文獻報道,全世界已發現300多種點突變類型,中國人占21種,且以CD41-42(-TCT T)、IVS-Ⅱnt654(C→T)、CD17(T→A)、-28(A→G)、CD71-72(+A)為最常見。從表1、2看出本組確診的217例β地中海貧血雜合子中以上5種突變類型占94.93%,與黃欣秋[6]報道的相似,但基因位點突變率排序有所不同。

在2種相同類型地中海貧血雜合子婚配,生育重型地中海貧血患兒的概率為1/4,1個β地中海貧血雜合子與1個α地中海貧血雜合子婚配無生育重型地中海貧血患兒的風險。但生育α、β復合型地中海貧血雙重雜合子的概率為1/4。在α、β復合型地中海貧血發生率這樣高的情況下,這種α β地中海貧血雙重雜合子無論與α或β地中海貧血雜合子婚配,均有1/4的概率生育重癥地中海貧血患兒。即胎兒水腫綜合征或β地中海貧血重癥患兒,重型β地中海貧血患者靠長期輸血為生,大多也因嚴重貧血或繼發感染在兒童期死亡,給社會和家庭帶來沉重的經濟負擔[7]。隨著分子生物技術的不斷發展和基因檢測方法的日趨成熟,積極開展地中海貧血高發區人群的篩查,準確診斷β地中海貧血復合缺失型α地中海貧血,對及時指導婚配,避免重癥地中海貧血患兒的出生具有重要意義。

[1]李軍,殷和.地中海貧血的診斷技術及進展[J].重慶醫學,2009,38(7):864.

[3]韓俊英,曾瑞萍,胡彬.廣東地區β地中海貧血復合缺失型α地中海貧血雙重雜合子檢出率[J].中華血液學雜志,2001,22(10):514.

[4]區小冰,黃鈺君,張力,等.小兒α、β復合型地中海貧血基因診斷及臨床表現[J].臨床血液學雜志:輸血與檢驗版,2007,4(4):147.

[5]李德發,祖瑩,孫平,等.合并α珠蛋白基因缺失的β地中海貧血患兒基因型分析[J].中國優生與遺傳雜志,2005,13(3):23.

[6]黃欣秋.21例β0地中海貧血的基因類型與臨床表現分析[J].廣西醫學,2009,31(4):497.

[7]莫建坤,區小冰,黎永新.β-地中海貧血患者與其父母地中海貧血基因檢測結果分析[J].廣東醫學,2006,27(7):1001.

Incidence and genetic diagnosis ofβ-thalassemia compoundα-thalassemia in the border area of two provinces

GUO Liu-wei,HUANGYing,LI Ying-li
(The Seventh Af filiated Hospital of Guangxi Medical University,Wuzhou 543001,China)

ObjectiveTo investigate the genotype and incidence of β-thalassemia compound α-thalassemia in the border area of Guangdong and Guangxi.MethodsThe 17 β-thalassemia mutation were detected by reverse dot blot(RDB).Three kinds of deletional α-thalassemia were detected by gap-PCR.ResultsOf 217 β-thalassemia,30 were detected to be combined with α-thalassemia:20 combined with__SEA/α α(9.21%),7 combined with-α3.7/α α(3.22%),2 combined with-α4.2/α α(0.92%),1 combined with__SEA/-α4.2(0.46%).In the 30 heterozygotes,8 types mutation were as follow:CD41-42(-TCTT),TATAboxnt-28(A → G),CD17(A→T),CD71-72(+A),IVS-Ⅱnt654(C→T),β E(G→A),TATAboxnt-29(A→G),CD43(G→T).Conclusion13.82%ofβ-thalassemia compound α-thalassemia were found in the border area of Guangdong and Guangxi.The type of gene mutation in βthalassemia were multifarious.It should be pay attention to the genetic counseling and prenatal diagnosis.

α-thalassemia;β-thalassemia;gene diagnosis

R556.9;Q344.13

A

1671-8348(2010)14-1827-02

2009-10-06

2009-12-18)

·論 著·