微生態制劑對肝硬化患者腸道菌群及內毒素水平干預療效觀察

【摘要】 目的 探討微生態制劑對肝硬化患者腸道菌群、內毒素水平的干預作用及療效。

方法選擇肝硬化患者57例，另選取24例健康體檢者作為健康組，將57例肝硬化患者隨機分為對照組25例，觀察組32例，兩組均采用常規護肝利尿治療，觀察組在此基礎上，加用雙歧桿菌三聯活菌膠囊治療8周，分別測定治療前各組及治療后兩疾病組腸道10種細菌菌落數和內毒素水平。并對比兩疾病組治療前后并發癥的變化情況。結果 治療前肝硬化患者的內毒素水平顯著高于健康體檢者（P＜0.01），腸道菌群中的雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌顯著低于健康體檢者（P＜0.05或0.01），葡萄球菌、梭菌顯著高于健康體檢者（P＜0.01）。治療前兩疾病組內毒素水平及各腸道菌群菌落數比較差異無統計學意義（P均＞0.05），治療后對照組內毒素水平無顯著變化（P＞0.05），觀察組內毒素水平顯著低于治療前（P＜0.01）；對照組中腸桿菌、真桿菌較治療前顯著下降（P＜0.05或0.01），觀察組中腸桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌、擬桿菌較治療前顯著升高，葡萄球菌、梭菌較治療前顯著降低（P＜0.05或0.01），其中治療后觀察組的雙歧桿菌、乳桿菌菌落數顯著高于對照組（P＜0.05或0.01）。治療前后比較，觀察組的并發癥發生率顯著降低（P＜0.01），對照組無改變。結論微生態制劑能調節腸道菌群狀態，提高腸道有益菌如雙歧桿菌含量，降低內毒素水平，對降低肝硬化并發癥發生率、改善預后具有重要的臨床意義。

【關鍵詞】 內毒素；腸道菌群；微生態制劑；肝硬化

文章編號：1003-1383(2010)06-0659-03 中圖分類號：R 575.2文獻標識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2010.06.003

Study on the effect of microecologial agents in the intestinal flora and endotoxin level of patients with liver cirrhosis

CHEN Yuping，ZHONG Zhuanhua，LIANG Yuehuan，WANG An

(The People's Hospital of Zhuhai，Guangdong Zhuhai，519000，China)

【Abstract】 Objective To investigate the effect of microecological agents on the intestinal flora and endotoxin level of patients with liver cirrhosis.

Methods 57 patients with liver cirrhosis and 24 healthy participants were chosen. 57 patients with cirrhosis were randomly divided into control group(25 cases) and treatment group(32 cases)，both groups were treated with conventional diuretic liver，the treatment group was added bifidobacterium triple viable capsule for 8 weeks.10 colonies number and endotoxin levels were measured in three groups pre and post treatment.

Results Endotoxin levels in cirrhotic patients was significant higher than healthy group (P＜0.01)，the colonies number of bifidobacteria，Lactobacillus and enterobacteriaceae in the intestinal flora were significant lower than healthy group(P＜0.05 or 0.01)，the colonies number of staphylococcus aureus and Fusobacterium was significant higher than healthy group before treatment(P＜0.01). Endotoxin levels and the number of colonies of intestinal flora was no significant difference before treatment (P＞0.05)， there was no significant difference of the levels of endotoxin in the control group after treatment(P＞0.05)，while the level of Endotoxin in the treatment group was significantly lower(P＜0.01);the level of Enterobacteriaceae and Eubacterium was significant lower in control group(P＜0.05 or 0.01)，the level of Bifidobacterium，Lactobacillus and Eubacterium increased significantly，staphylococci were significant lower in treatment group(P＜0.05 or 0.01)，while the colony count of Bifidobacterium and Lactobacillus bacteria were significant larger in treatment group(P＜0.05 or 0.01).The complication rate of the treatment group were significantly lower after treatment comparing to before treatment(P＜0.01)， no change was found in control group.

Conclusion Microecological agents can effectively regulate the condition of intestinal flora， enhancing the content of beneficial bacterium，such as bifidobacteria，declining the level of endotoxin，and exert considerable clinical significance in hepatocirrhosis treatment in bringing down the incidence of complication and improving the prognosis.

【Key words】microecological agents；intestinal flora；endotoxin；liver cirrhosis

肝硬化患者隨著疾病的進展，其腸道微生態出現不同程度的紊亂，已得到越來越多學者的研究證實，糾正失調的腸道菌群狀態，改善其腸道屏障功能，從而減少肝硬化各種并發癥的發生，已成為越來越多人的共識，筆者通過肝硬化患者長期隨訪對照使用微生態制劑，探討微生態制劑對腸道菌群及內毒素水平的干預調節作用，及對肝硬化患者預后的影響，報告如下。

對象和方法

1.對象 選擇2007年6月～2009年12月在我院住院治療的乙型病毒性肝炎肝硬化患者57例，診斷符合2000年全國病毒性肝炎會議制定的肝硬化診斷標準［1］，及2001年10月中華醫學會肝臟病學會制定的酒精性肝病診斷標準（草案）［2］。排除肝癌、感染及其他重要器官衰竭的患者。所有患者治療前4周均未服用抗生素、微生態制劑。將57例肝硬化患者隨機分為兩組，觀察組32例，男28例，女4例，年齡42~82歲，平均（59.00±10.99）歲，對照組25例，男19例，女6例，年齡35~75歲，平均（54.24±11.34）歲，另選取24例健康體檢者作為健康組，男11例，女13例，年齡26~78歲，平均（51.46±14.76）歲。觀察組與對照組在年齡、性別以及肝功能ChildPugh分級等方面比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

2.治療方法 觀察組與對照組患者均給予常規護肝利尿等對癥治療，觀察組加用雙歧三聯活菌膠囊（含長型雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、腸球桿菌等，規格：每粒210 mg，含各活菌量達4萬cfu以上）口服，每次2粒，每日3次，療程8周，治療前1天及治療后8周分別檢測10種腸道需氧厭氧菌落數、內毒素水平，觀察上消化道出血、腹水、肝性腦病等并發癥發生率。

3.腸道菌群的檢測 稱取新鮮糞便0.5克，加入無菌稀釋液中，按10倍稀釋法，稀釋至108濃度，選擇腸道中具有代表性的需氧菌4種（腸桿菌、葡萄球菌、酵母菌、腸球菌）、厭氧菌6種（擬桿菌、雙歧桿菌、消化球菌、梭菌、乳桿菌、真桿菌），然后用滴注法接種于選擇性培養基，需氧菌置35℃孵箱培養24～48 h計數。厭氧菌采用抽氣換氣培養法培養72 h計數，使用ALB半自動微生物鑒定系統（法國生物梅里埃公司）進行細菌鑒定，結果以每克糞便中菌落形成單位的對數值（Lg cfu#8226;g-1）表示。

4.內毒素的檢測嚴格無菌操作，采取外周靜脈血1 ml，注入專用無熱源試管待測。采用改良鱟試驗法（LAT），檢測內毒素所有物品均經去熱源處理，操作步驟按廈門鱟試劑廠提供的鱟試劑盒說明書進行，結果以EU/ml表示。

5.統計學處理 使用SPSS 13.0統計軟件進行統計處理，計量資料以均數±標準差(-±s)表示，組內比較采用配對t檢驗，組間比較采用兩獨立樣本均數t檢驗，計數資料用百分數或率表示，采用χ²檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

結果

1.肝硬化組腸道菌群、內毒素水平與健康組的比較 肝硬化患者的內毒素水平顯著高于健康體檢者（P＜0.01），腸道菌群中的雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌顯著低于健康體檢者（P＜0.05或0.01），葡萄球菌、梭菌顯著高于健康體檢者（P＜0.01）。見表1。

2. 兩疾病組治療前后檢測結果的比較 治療前兩組內毒素水平及各腸道菌群菌落數比較差異無統計學意義（P均＞0.05），治療后對照組內毒素水平無顯著變化（P＞0.05）。觀察組內毒素水平顯著低于治療前（P＜0.01）；對照組中腸桿菌、真桿菌較治療前顯著下降（P＜0.05或0.01），觀察組中擬桿菌、雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌較治療前顯著升高，葡萄球菌、梭菌較治療前顯著降低（P＜0.05或0.01），其中治療后觀察組的雙歧桿菌、乳桿菌菌落數顯著高于對照組（P＜0.05或0.01）。見表2。

3. 兩疾病組并發癥的變化情況 對照組治療前上消化道出血、腹水、肝性腦病等并發癥發生率為44%(11/25)，觀察組為72%（23/32），治療后對照組的并發癥發生率仍為44%(11/25)，觀察組為34%(11/32)。治療前后比較，觀察組的并發癥發生率顯著降低（χ²=9.035，P＜0.01），對照組無改變。

討論

腸道微生態中的腸道菌群是腸生物屏障的一個重要組成部分，其菌群及構成比的此消彼長，直接影響著腸道抗定植、生物拮抗及免疫功能，尤其影響著來源其中的內毒素的產生、釋放與移位。近年的研究已經證實，腸微生態失衡、比例失調紊亂，將導致因一些有益菌如雙歧桿菌、乳桿菌的減少從而降低其附著于腸壁上所固有的抵抗外來致病菌定植的能力，同時正常常駐菌所分泌的溶菌酶、抗體、黏液的減少，勢必導致腸微絨毛損害，使腸黏膜抵抗力下降，各種內源性、外源性致病菌對腸壁的黏附定植能力增強，尤其是內毒素，隨著腸道菌群失調，腸道中一些革蘭氏陰性桿菌優勢生長，內毒素產生釋放增加，隨著腸屏障功能損害，腸黏膜通透性增加，黏附定植的一些外來菌及內毒素隨著門脈、淋巴系統進入肝臟及各器官系統也就成為必然［3］。近年研究發現，內毒素通過介導枯否氏細胞的免疫活性，刺激αTNF、NO合酶等細胞因子的釋放，誘導炎癥介質的級聯反應及促進產生肝臟高動力循環狀態［4，5］等，直接影響肝硬化及其并發癥的發生發展。因此，恢復腸道菌群的生態平衡，意義重大。

雙歧三聯活菌制劑是臨床常用的微生態制劑，其含有長型雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌三種腸道益生菌，雙歧桿菌與乳酸桿菌等厭氧菌定植嵌入腸黏膜上皮細胞間構成天然的生物屏障，降低腸道pH值，增強局部免疫功能，抵抗革蘭氏陰性桿菌對腸黏膜的定植存活和繁殖，從而保護腸黏膜屏障，減少內毒素的產生和細菌移位，降低血氨水平。

本研究結果發現，肝硬化患者的內毒素水平顯著高于健康體檢者（P＜0.01），腸道菌群中的雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌顯著低于健康體檢者（P＜0.05或0.01），葡萄球菌、梭菌顯著高于健康體檢者（P＜0.01）。觀察組口服雙歧桿菌活菌制劑8周后，其腸道雙歧桿菌、乳酸桿菌菌落數較治療前明顯增加，葡萄球菌數較治療前明顯降低，內毒素水平也較治療前明顯降低（P＜0.05或0.01），而對照組無此變化；同時還發現，觀察組的腹水、上消化道出血、肝性腦病等并發癥的發生率較治療前也顯著降低（P＜0.01），而對照組治療前后無變化。說明微生態制劑通過調節腸道菌群，使腸道有益菌增加，抑制腸道有害細菌的過度繁殖，維持腸道生態平衡，減少腸道內毒素的產生、吸收、移位，降低肝硬化患者血液中內毒素水平，改善肝臟代謝，改善高動力循環，從而減少、延緩肝硬化及其各種并發癥的發生發展。

綜上所述，我們認為，肝硬化患者長期口服微生態制劑，調節增強患者腸屏障功能，降低內毒素水平及細菌移位，對改善肝硬化患者的預后具有重要的臨床意義。

參考文獻

［1］中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會聯合修訂． 病毒性肝炎防治方案［J］.中華肝臟病雜志，2000，8(6)：324-329.

［2］中華醫學會肝臟病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組.酒精性肝病診斷標準(草案) ［J］.中華肝臟病雜志，2001，9(5):264

［3］殷 瓅，陳維雄. 肝硬化對腸粘膜屏障的損害［J］.國際消化病雜志2008，28（4）：287-291.

［4］袁 春，葉 進. 肝硬化和腸道細菌移位［J］.臨床消化病雜志，2008，20（2）：11-123.

［5］劉 剛，王 強，王育紅. 腸屏障功能與多器官功能障礙綜合征［J］.海軍總醫院學報，2008，21（2）：96-100.

(收稿日期：2010-08-10 修回日期：2010-10-31)

(編輯：梁明佩 英文審校：鐘京梓)

※基金項目：珠海市科委立項科研課題資助（編號：200701036PC20071005）。

作者簡介：陳渝萍（1964-），女，重慶市人，消化內科主任醫師，醫學碩士。

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