板藍根泡騰顆粒的制備及質量評價

（1.清華大學生命科學與醫學研究院，北京100084；2.貴陽中醫學院，貴州貴陽550002）

摘要：目的：制備板藍根泡騰顆粒，并對其進行質量評價。方法：確定板藍根泡騰顆粒的制備方法，建立HPLC法測定板藍根泡騰顆粒中尿苷、鳥苷、腺苷的含量，對其進行外觀性狀觀察，鑒別，溶化性試驗。結果：制備的泡騰顆粒泡騰迅速，溶液澄清，無沉淀，不掛壁，外觀好。結論：板藍根泡騰顆粒制備工藝簡單，性質穩定，質量可控。

關鍵詞：板藍根；泡騰顆粒；制備；質量評價

中圖分類號：R927.11文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）10-0033-03

中藥板藍根（radixisatidis）為十字花科植物菘藍（IsatisindigoticaFort.）的干燥根，是中國傳統中藥，歷代本草均有記載。本品性寒味苦，具有清熱解毒、涼血消斑的功效，臨床廣泛用于抗菌、抗病毒、抗血小板聚集、抗內毒素，能夠增強機體的免疫功能。泡騰顆粒是以適宜的酸和堿為崩解劑制成的一種顆粒劑^［1］，入水后會產生大量二氧化碳氣體從而迅速溶解，藥物起效迅速，具有攜帶、使用方便，水中分布均勻，成本低，生物利用度高等優點，兼具固體制劑和液體制劑的特點。本研究將板藍根藥材經過提取、干燥得板藍根提取物，以泡騰效果為評價指標將板藍根提取物制備成板藍根泡騰顆粒，并建立HPLC法測定板藍根泡騰顆粒中尿苷、鳥苷、腺苷的含量，同時對其進行外觀性狀觀察，鑒別，溶化性試驗。

1儀器與試藥

1.1儀器

Agilent1100型高效液相色譜儀（DAD檢測器）；PrevailC18柱（4.6×250mm，5μm）；XS105型電子天平（d=0.01mg，梅特勒-托利多公司）；SL300N型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；RUC-5200型超聲波清洗器（上海睿祺電子設備有限公司）；CH-10槽形混合機（長沙市岳麓區中南制藥機械廠）；YK-60搖擺制粒機（長沙市岳麓區中南制藥機械廠）。

1.2試藥

尿苷、鳥苷、腺苷對照品均購于中國科學院生物化學研究所（HPLC法測定純度分別為99.3%、99.1%、99.3%）；精氨酸對照品、板藍根對照藥材均購于中國藥品生物制品檢定所；乙腈（色譜純，默克公司）；其他為分析純；水為超純水；所用藥材購于安徽亳州藥材市場；檸檬酸、無水碳酸氫鈉、乳糖、正丁醇、冰醋酸、茚三酮均為分析純；以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板。

2方法與結果

2.1板藍根提取物的制備

將板藍根藥材用6倍量水回流提取3次，每次1h，提取液過濾、濾液合并，濃縮至相對密度為1.2（50℃），加乙醇使含醇量達到60％靜置24h使沉淀，取上清液回收乙醇，并減壓干燥成干浸膏，粉碎即得板藍根提取物。

2.2板藍根泡騰顆粒的制備

將所有物料分別干燥并粉碎過100目篩備用，取處方量以等量遞加的方法加入主藥及其他輔料，過篩混勻，用70％的乙醇溶液為潤濕劑制軟材，過16目篩濕法制粒，50℃干燥2h得干顆粒，16目整粒后即得。

2.3不含板藍根提取物的泡騰顆粒

（陰性樣品）的制備。除主藥外，將其它所有物料按板藍根泡騰顆粒的制備方法制備即得。

2.4理化性質

（1）性狀。本品為棕色至棕褐色顆粒；味酸甜、微苦。

（2）鑒別。取本品1.0g，研碎，置具塞三角錐形瓶中，加甲醇10mL，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液；另取精氨酸對照品2mg，檸檬酸0.3g，無水碳酸氫鈉0.2g，加甲醇10mL，超聲處理30min，過濾，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液、板藍根泡騰顆粒供試品溶液各1~2μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（19∶5∶5，V/V/V）為展開劑展開，展距12cm，取出，熱風吹干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

（3）溶化性^［2］分別取3批板藍根泡騰顆粒各10g，置盛有200mL水的燒杯中，水溫為20℃，板藍根泡騰顆粒迅速產生氣體而呈泡騰狀，5min內顆粒完全分散并溶解在水中，溶液澄清透亮，不掛壁。

2.5含量測定

（1）色譜條件。色譜柱：PrevailC18（4.6×250mm，5μm）；柱溫：25℃；流動相：A（水）-B（乙腈）；梯度洗脫：0→34min（2%B→20%B）；流速為：0.5mL#8226;min^-1；檢測波長：254nm，進樣量10μL。

（2）系統適應性試驗。在色譜條件下，分別測定核苷類對照品、板藍根泡騰顆粒和不含板藍根提取物的空白泡騰顆粒，色譜圖見圖1、2、3，結果顯示，共存成分不干擾主藥的測定，理論塔板數按腺苷峰計算不低于10000。

圖1混合對照品的HPLC圖譜

圖2泡騰顆粒的HPLC圖譜

圖3陰性泡騰顆粒的HPLC圖譜

（3）對照品溶液制備及標準曲線：分別精密稱取經五氧化二磷干燥至恒重的尿苷對照品1.92mg，鳥苷對照品1.75mg，腺苷對照品2.12mg置于同一25mL量瓶中，用20％甲醇溶液溶解，并用20％甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取0.25mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL置于10mL量瓶中，加入20％甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得一系列不同濃度的混合對照品溶液，按上述色譜條件測定，以尿苷、鳥苷、腺苷對照品濃度（mg#8226;mL^-1）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，其回歸方程為：尿苷：Y=41344X+2.5323（r=0.9999），鳥苷：Y=47076X+2.4053（r=0.9999），腺苷：Y=59968X+1.4399（r=0.9999），結果表明尿苷、鳥苷、腺苷分別在1.92~38.4μg#8226;mL^-1；1.75~35μg#8226;mL^-1；2.12~42.4μg#8226;mL^-1范圍內線性關系良好。

（4）板藍根泡騰顆粒供試品溶液和陰性樣品溶液的制備。取080101批板藍根泡騰顆粒和陰性樣品各0.5g，精密稱定，置25mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得板藍根泡騰顆粒供試品溶液和陰性樣品溶液。

（5）精密度試驗。取1mL中含有38.4μg的尿苷、35.0μg的鳥苷和42.4μg的腺苷的混合對照品溶液連續進樣6次，以尿苷、鳥苷、腺苷的峰面積計算，RSD分別為尿苷0.058％，鳥苷0.29％，腺苷0.028％，說明本方法精密度良好。

（6）重復性試驗。取080101批板藍根泡騰顆粒6份按2.5.4項下的供試品制備方法操作制備供試品溶液，按上述色譜條件測定峰面積，計算含量，含量測定結果的RSD分別為尿苷0.40％，鳥苷0.85％，腺苷0.18％，表明本方法重復性良好。

（7）穩定性試驗。取080101批板藍根泡騰顆粒1份按2.5.4項下的供試品制備方法操作制備供試品溶液，分別在0h，1h，2h，4h，6h，8h測定，以尿苷、鳥苷、腺苷的峰面積計算，RSD分別為尿苷0.95％，鳥苷0.75％，腺苷0.13％，表明供試品溶液在8h內穩定。

（8）泡騰顆粒的含量測定。按照2.5.4項下供試品溶液制備方法制備9份樣品，按上述色譜條件測定峰面積，計算含量，080101、080102、080103批板藍根泡騰顆粒的總核苷含量的平均值分別為151.1mg/100g、157.8mg/100g、161.1mg/100g。

（9）加樣回收試驗。

①對照品儲備液的制備精密稱取經五氧化二磷干燥至恒重的尿苷對照品3.05mg，鳥苷對照品1.85mg，腺苷對照品2.73mg置10mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得儲備液。

②回收率試驗取080101批板藍根泡騰顆粒9份，各約0.5g，精密稱定，置25mL具塞錐形瓶中，3份為一組，分別精密加入對照品儲備液0.8mL、1.0mL、1.2mL，按2.4.4項方法制備所需溶液，即得9份樣品，按上述色譜條件測定峰面積，計算含量，得到尿苷的高、中、低回收率為994％、100％、997％，鳥苷的高、中、低回收率為99.3％、995％、99.1％，腺苷的高、中、低回收率為98.9％、99.7％、99.7％，結果均在100％左右，表明本法回收率良好。

3討論

（1）板藍根水提液具有抗菌、抗病毒之功效，有關抗病毒活性物質目前尚無定論，有文獻報道結合氨基酸、喹唑酮、糖蛋白和多糖為抗病毒活性物質，而脂溶性成分靛藍、靛玉紅在水提液中含量極少，且未見報道有抗病毒作用，故選用板藍根藥材中脂溶性成分靛藍、靛玉紅做指標成分不合適。已有文獻報道采用高效液相色譜/二極管陣列檢測/質譜/質譜聯用技術（HPLC/DAD/MS2）對板藍根注射液進行分析，鑒定其中含有腺苷、尿苷、鳥苷、胞苷和腺嘌呤5種成分^［3］。而板藍根藥材中的尿苷、鳥苷、腺苷等核苷類成分能夠干擾病毒核酸的合成，常常是中成藥抗病毒的活性成分^［4，5］，故本文選取板藍根藥材中的尿苷、鳥苷和腺苷的總量對板藍根泡騰顆粒的質量進行評價。

（2）制備薄層樣品時，考察了用甲醇、乙醇、低濃度甲醇、低濃度乙醇^［6］溶解精氨酸對照品和板藍根對照藥材，但在薄層板上，精氨酸對照品和板藍根對照藥材的斑點明顯超出板藍根泡騰顆粒的斑點，考慮是板藍根泡騰顆粒上樣點的局部離子化微環境不同于藥材與對照品的微環境所致，故在制備精氨酸對照品和板藍根對照藥材溶液時先在甲醇中溶解成比例的檸檬酸和無水碳酸氫鈉，使對照品和對照藥材的環境和板藍根泡騰顆粒的環境一致。結果表明，該方法能很好地對板藍根泡騰顆粒進行TLC鑒別。

參考文獻：

［1］王淑華，林永強.泡騰片的常用輔料及制備方法［J］.食品與藥品，2006，8（3）：70-72.［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學工業出版社，2005：142.

［3］金郁，肖珊珊，孫毓慶.高效液相色譜/二極管陣列檢測/質譜/質譜聯用在板藍根注射液成分鑒定中應用［J］.色譜，2003，21（6）：558-561.

［4］李子成，陳淑華，蔣寧，等.核苷類抗病毒藥物的研究進展［J］.化學研究與應用，2002，14（1）：15-20.

［5］肖珊珊，金郁，孫毓慶.板藍根化學成分、藥理及質量控制研究進展［J］.沈陽藥科大學學報，2003，20（6）：455-459.

［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）［M］.北京：化學工業出版社，2005.

（責任編輯：姜付平）