丹參的^１３Ｃ－ＮＭＲ指紋圖譜研究

(1.山東省分析測試中心，山東 濟(jì)南 250014；2.山東省科學(xué)院生物研究所，山東 濟(jì)南 250014)

摘 要：目的：利用傅立葉變換核磁共振波譜儀測定不同產(chǎn)地丹參提取物的¹³C-NMR圖譜，建立鑒別丹參藥材真?zhèn)蝺?yōu)劣的核磁共振指紋圖譜分析。方法：對丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜進(jìn)行解析；并與其活性成分丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮進(jìn)行¹³C-NMR譜圖的比較與指認(rèn)；獲得了兩種丹參偽品¹³C-NMR譜圖，并與丹參特征提取物譜圖進(jìn)行相似度分析。結(jié)果：相似度分析處理結(jié)果表明，利用NMR指紋圖譜能快速確定丹參藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。結(jié)論：該方法操作簡單、快捷、可靠，可以作為丹參藥材真?zhèn)舞b別的依據(jù)。

關(guān)鍵詞：¹³C-NMR；指紋圖譜；丹參；鑒別

中圖分類號：R284.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A文章編號：1673-2197（2008）10-0021-02

丹參為唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。主產(chǎn)我國的四川、河北、安徽等省，有祛瘀止痛，活血通經(jīng)，清心除煩之功效^［1］?，F(xiàn)代臨床上主要用于加強(qiáng)心肌收縮力以及促進(jìn)組織的修復(fù)與再生等。丹參是最為廣泛應(yīng)用的中藥材之一。有報道其偽品為旋花科植物甘薯Ipomoea batatas(L)La的干燥須根，經(jīng)染色后的加工品及中藥續(xù)斷等。為此本篇以不同產(chǎn)地丹參的特征提取物為研究對象，以核磁共振作為主要研究手段，對獲取的丹參¹³C-NMR指紋圖譜進(jìn)行相似度分析，以此作為控制丹參藥材質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

儀器：Varian INOVA 600型超導(dǎo)傅立葉變換核磁共振波譜儀。試藥：乙醇為分析醇，蒸餾水；丹參及甘薯的干燥須根，丹參偽品續(xù)斷購自山東臨沂、蒙陰、莒縣、安徽、河北等地，由山東省分析測試中心王曉研究員鑒定；丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、二氫丹參酮對照品由山東省分析測試中心提供。

2 實驗方法

2.1 樣品的制備

取丹參各產(chǎn)地樣品5g，加90%乙醇25mL，超聲提取45min^［2，3］，濾取提取液，將溶劑揮干，取一定量殘余物備用。

2.2 實驗條件

丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、二氫丹參酮和丹參及其偽品提取物的¹³C-NMR指紋圖譜用Varian INOVA 600型超導(dǎo)傅立葉變換核磁共振波譜儀在25℃測定，掃描次數(shù)分別為10000次，以CDCl3-d 做溶劑，TMS為內(nèi)標(biāo)。

2.3 精密度實驗

(1)儀器精密度：將約5mg丹參酮IIA用CDCl3-d，在上述實驗條件下重復(fù)測定¹³C-NMR六次，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學(xué)位移的RSD為2.1%

(2)方法精密度：將丹參提取物1號約5mg在上述實驗條件下重復(fù)測定¹³C-NMR六次，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學(xué)位移的RSD為3.2%

2.4 穩(wěn)定性實驗

將丹參提取物1號在0、2、4、6、8及24h時測定，計算丹參酮IIA中17位甲基碳信號化學(xué)位移的RSD為3.4%，結(jié)果表明，丹參供試品常溫下24h保持穩(wěn)定。

2.5 樣品NMR指紋圖譜的測定

將各批次丹參樣品及偽品按2.1所述方法進(jìn)行制備并測定其¹³C-NMR指紋圖譜。典型指紋圖譜見圖1。

圖1 1號丹參樣品的¹³C-NMR核磁共振指紋圖譜

3 相似度分析

根據(jù)專家的形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，首先選取1號野生丹參藥材測定指紋圖譜，并以其指紋圖譜為參照，以向量夾角法為測度，進(jìn)行相似度分析。向量夾角法是以N 個數(shù)值組成的行( x1， x2， x3，…，xn ) 稱為N維向量，簡記為大寫字母X， 定義|X|=x21+x22+x23+…+x2n為向量X 的模。如果存在兩個向量X 及Y 則稱為X 與Y 的內(nèi)積，X、 Y 之間的向量夾角按照下面公式計算。如果cosθ越接近1則說明兩個向量越相似^［4］。

cosθ=X#8226;Y|X|×|Y|

每個NMR指紋圖譜都可以看作一組對應(yīng)化學(xué)位移的峰高(或峰面積)的數(shù)值，可將這組數(shù)值看作多維空間中的向量，使兩個指紋圖譜間相似性的問題轉(zhuǎn)化為多維空間的兩個向量的相似性問題，利用上面公式計算cosθ來定量表

征指紋圖譜間的相似性。cosθ值大于0.85為推薦藥材，小于0.85為不推薦藥材或其它種屬藥材。相似度分析結(jié)果見表1。

4.1 丹參中功效成分的¹³C-NMR譜分析

丹參的主要功效成分為丹參酮類化合物等，見圖2、表2。因此獲得丹參中丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮的¹³C-NMR譜對于確認(rèn)和辨別丹參的指紋圖譜非常重要。 丹參提取物及丹參酮類化合物的歸屬見表3。 

4.2 丹參的¹³C-NMR指紋圖譜特征

丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜包含了丹參提取物中所有物質(zhì)的氫信號，因此可以全面地反映丹參的整體化學(xué)組成，同時丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜中的特征峰則可以反映丹參的特征信號，便于鑒別和指認(rèn)。因此丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜可以從整體面貌和局部特征信號兩方面的結(jié)合來反映丹參的整體特征。同時丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜與其丹參酮類成分（丹參酮IIA、丹參酮Ⅰ、隱丹參酮和二氫丹參酮）¹³C-NMR中特征峰的比較，則達(dá)到了在整體上了解丹參特征面貌的同時，對其特征成分進(jìn)行指認(rèn)和鑒別的目的，進(jìn)而對其質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

4.3 丹參的¹³CNMR指紋圖譜的相似度

利用向量夾角法計算¹³C-NMR指紋圖譜的相似度能夠定量的對獲得的指紋圖譜進(jìn)行科學(xué)有效的評價。不同丹參¹³C-NMR指紋圖譜的相似度結(jié)果見表1。對于不同產(chǎn)地丹參的相似度，除了7、8外，其余丹參的¹³C-NMR指紋圖譜相似度都在0.85以上，說明不同丹參有效成分及含量方面的一致性。但由于產(chǎn)地不同等原因，又造成了其指紋圖譜之間具有一定的差異性，即相似度的差異。而7、8號樣品的指紋圖譜則相似度存在較大差異，可以歸為偽品或其他種屬藥材。

5 結(jié)論

通過對不同產(chǎn)地丹參提取物及其偽品的指紋圖譜的研究表明，不同丹參提取物的¹³C-NMR指紋圖譜有很好的重現(xiàn)性和高度的特征性，¹³C-NMR指紋圖譜和特征性數(shù)據(jù)能夠準(zhǔn)確地反映丹參特征性化學(xué)成分的存在，可以作為丹參質(zhì)量評價的相對標(biāo)準(zhǔn)圖譜和數(shù)據(jù)。依據(jù)本方法可以快捷方便地鑒別丹參藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 任仁安.中藥鑒定學(xué)［M］.北京:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社， 1986.

［2］ 郭孝武，沈志剛.超生提取對丹參藥材中酯溶性成分的影響［J］.陜西師范大學(xué)學(xué)報，2007，35（3）：48-51.

［3］ 曹明成，沈善，潘純發(fā).丹參提取工藝的實驗研究［J］.中成藥，1996，18（1）：4-6.［4］ 孫慶雷， 林云良，王曉等.金銀花的¹³C-NMR指紋圖譜研究［J］.波譜學(xué)，2006，23(2):28-34.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）