山茱萸多糖的研究進展

摘 要：山茱萸多糖是山茱萸中的一種主要活性成分之一，具有多種藥理作用和生物活性功能，是目前的一個研究熱點。筆者對山茱萸多糖的提取、分離純化、化學(xué)結(jié)構(gòu)及生物活性等多方面進行了綜述，為山茱萸資源的深入開發(fā)起一定借鑒作用。

關(guān)鍵詞：山茱萸；多糖；分離純化；化學(xué)結(jié)構(gòu)；生物活性

中圖分類號：R282文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）09-0135-03

山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(Fructus Corni)的干燥果肉，又名山萸肉、藥棗、肉棗等。臨床上以除去種子的成熟果實入藥，其味酸、澀、微溫，歸肝腎經(jīng)，有補益肝腎、澀精固脫之功效，是我國的傳統(tǒng)中藥材^［1-2］。山茱萸果肉中含糖類、有機酸類及其酯類、鞣質(zhì)類等^［3］，是治療糖尿病、冠心病和高血壓病的主要藥材。近年來山茱萸多糖的研究已取得一定進展，藥理學(xué)研究證明，山茱萸多糖是山茱萸生物學(xué)活性物質(zhì)的重要成分。本文就山茱萸多糖的化學(xué)和藥理學(xué)研究情況綜述如下。

1 山茱萸多糖的提取

1.1 熱水提取法

山茱萸多糖的提取方法通常采用水提醇沉法。一般先將其干燥的果實用95%的乙醇或石油醚脫脂，再經(jīng)熱水提取后，加入一定量的無水乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖加水復(fù)溶后，再經(jīng)過透析除去小分子化合物，柱層析純化醇沉后，即可得山茱萸多糖。張彩瑩等^［4］利用均勻設(shè)計法確定了水提醇沉法的最佳工藝條件：料液比:1∶36，提取溫度：100℃，提取時間：180min，多糖的得率為199.36mg/g（相對于預(yù)處理的山茱萸粉末）。此法的優(yōu)點在于提取所用溶劑蒸餾水經(jīng)濟易得，提取率較高，而且操作安全簡便，不會造成大的污染。但是此法提取的時間較長且能耗較大。

1.2 稀堿提取法

李平等^［5］以四川產(chǎn)山茱萸為原材料，對山茱萸水提取后的殘渣用4倍體積2.5mol/L NaOH，4℃提取4h，重復(fù)提取兩次。濾過，合并濾液，用HCl中和濾液至中性，減壓濃縮，濃縮液經(jīng)過醇沉、洗滌、真空干燥，得褐色山茱萸堿提粗多糖。此法可使多糖含量增加，但酸堿提易破壞多糖的立體結(jié)構(gòu)及活性，且提取后液體需要中和，程序繁瑣，所以較少使用^［6］。

1.3 超聲水提法

研究表明^［7］，利用超聲波的高頻震蕩、加速度和強烈的“空化效應(yīng)”及攪拌作用，可加速有效生物活性成分進入溶劑，從而提高提取率、縮短提取時間、節(jié)約溶劑，并可在低溫下進行，有利于有效成分的保護，同時設(shè)備也較為簡單，具有廣泛的應(yīng)用前景。張麗娟等^［8］利用超聲水提法從山茱萸中提取山茱萸多糖，表明影響提取率的主要因素為料液比，最佳提取工藝為料液比1∶20、提取溫度80℃、提取時間60min。多糖的平均提取率為：13.65%。

2 山茱萸多糖的分析

2.1 山茱萸多糖的含量測定

目前山茱萸多糖的含量一般采用苯酚-硫酸法^［4，9］來測定。

2.2 純度檢測^［10］

山茱萸多糖的純度可用聚丙烯酰胺凝膠電泳、醋酸纖維薄膜電泳和凝膠色譜法檢測。聚丙烯酰胺凝膠電泳所用緩沖液為pH9.5的硼砂液，染色劑是高碘酸-希夫試劑；醋酸纖維薄膜電泳所用緩沖液為pH12.0的硼砂液，甲苯胺藍染色；凝膠色譜法所用凝膠為Sephadex G-150和DEAE Sephadex A50，0.1mol/L NaCl洗脫，蒽酮-硫酸法檢測。多糖經(jīng)兩種電泳均為單一色帶，經(jīng)凝膠色譜柱層析，流出液均為單峰，再用考馬斯亮藍G-250染色法檢測蛋白質(zhì)含量，即可說明它們均為單一組分。

2.3 山茱萸多糖的化學(xué)組成分析

楊云等人^［11］采用氣相色譜法，從粗多糖中分離純化得到了1個級分Co-4，研究表明它是葡萄糖、木糖、半乳糖和巖藻糖等四種單糖組成，其摩爾比為7.75∶3.88∶3.20∶1。

舒曉燕等人^［12］采用薄層色譜和紅外光譜分析法，得出酸性多糖M可能是由兩種單糖所組成：葡萄糖，甘露糖或半乳糖。

李平等人分別研究了水提^［13］和堿提山茱萸多糖的單糖組成，研究表明水提山茱萸多糖PFCAⅢ主要由鼠李糖、阿拉伯糖和葡萄糖以13.74∶50.54∶35.72的摩爾比組成，平均分子量為1.74×104，水溶性較差；堿提山茱萸多糖PFCCⅠ由木糖和葡萄糖以18.8∶81.2的摩爾比聚合而成，其水溶性較好。

綜上所述，山茱萸多糖的單糖主要由戊糖和己糖構(gòu)成，如戊糖中的木糖，己糖中的葡萄糖、半乳糖、鼠李糖等，此外還有一些單糖衍生物如甘露糖等。這為確定其結(jié)構(gòu)奠定了良好的基礎(chǔ)。

2.4 山茱萸多糖的理化性質(zhì)分析

糖在濃硫酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物，后者與α-萘酚作用形成紫紅色復(fù)合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環(huán)；與蒽酮作用生成藍綠色復(fù)合物；與苯酚作用生成黃棕色復(fù)合物。Benedict試劑為含Cu²⁺的堿性溶液，能使還原糖氧化成酸類化合物，其堿性較Fehling試劑弱、靈敏度高、干擾因素少^［14］，可用來檢測山茱萸多糖是否具有還原性。

3 山茱萸多糖的藥理活性

3.1 抗氧化性和清除自由基的作用

李平等^{［13，15］}用水提山茱萸多糖對油脂抗氧化性能實驗表明，該多糖對動物油具有較好的抗氧化能力，其效果接近于VC；對植物油具有一定的抗氧化能力，但效果比VC及TBHQ差。該多糖對Fenton體系產(chǎn)生的羥基自由基有清除作用，清除率為50%，所需藥量為430μg/mL；對鄰苯三酚體系產(chǎn)生的超氧陰離子自由基有一定的清除作用。該課題組^［5］還對堿提所得的山茱萸多糖PFCCⅠ用Fenton反應(yīng)檢測PFCCⅠ對·OH的清除作用，并以羥基自由基·OH清除劑苯甲酸和甘露醇為對照，結(jié)果顯示三者對·OH的清除率達50%所需濃度分別為18、330、80μg/mL；PFCCⅠ還可有效抑制豬油和芝麻油的氧化，其對O₂-的清除率達50%，所需濃度為35.0μg/mL。結(jié)果表明堿提山茱萸多糖具有良好的抗油脂氧化和清除自由基能力。

3.2 免疫興奮作用

苗明三等^{［16，17］}研究了山茱萸多糖對環(huán)磷酰胺致免疫抑制小鼠的作用，結(jié)果表明山茱萸多糖可顯著提高CY，致免疫抑制小鼠腹腔巨噬細胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)，促進免疫抑制小鼠溶血素、溶血空斑的形成和淋巴細胞轉(zhuǎn)化，提示山茱萸多糖有較好的免疫興奮作用。

3.3 抗衰老作用

歐芹等^{［18，19］}研究了山茱萸多糖對HDF細胞β-半乳糖苷酶及p16基因表達的影響。結(jié)果表明山茱萸多糖可提高細胞活力、降低β-半乳糖苷酶含量及 p16蛋白表達陽性細胞數(shù)，提示山茱萸多糖可通過改變p16的表達而發(fā)揮其抗HDF細胞衰老作用。

3.4 保護腦組織的作用

張麗娟等^［8］利用線栓法制備大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型，通過測量腦組織NO含量和NOS活性，探討山茱萸多糖了對腦缺血再灌注大鼠腦組織的保護作用。結(jié)果表明山茱萸多糖能明顯降低NO含量及NOS活性，從而保護腦組織。

關(guān)于山茱萸多糖的藥理活性，目前報道的有其抗衰老、增強免疫的作用，而其它研究卻甚少。多糖一般具有抗腫瘤、抗病毒、降血糖血脂、抗輻射、有抗凝血、抗突變、抗?jié)兊裙δ埽虼松杰镙嵌嗵堑纳锘钚杂写谶M一步研究，進而為其產(chǎn)品的開發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

4 展望

近年來，由于分子生物學(xué)、生物化學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，多糖的多種生物活性逐漸被人們發(fā)現(xiàn)和認識，已成為當(dāng)前新藥發(fā)展的方向之一。山茱萸多糖是山茱萸中所含的重要化學(xué)成分和有效成分，具有一定的藥理活性。目前對于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的研究還不夠全面和深入，同時關(guān)于多糖的高級結(jié)構(gòu)與其生物學(xué)活性關(guān)系的研究也不清楚。隨著現(xiàn)代化分離技術(shù)和現(xiàn)代分析儀器的發(fā)展和完善，山茱萸多糖的純化工藝、構(gòu)效關(guān)系及活性研究是今后的主要研究方向，具有巨大的開發(fā)潛能。

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（責(zé)任編輯：姜付平）

Advancement in Research of Polysaccharide From Fructus Corni

Li Xiaorong，Zhao Peng，Zhang Lihua

(Department of Pharmaceutical，Shanxi University of Chinese Medicine，Xianyang 712046)

Abstract：

The polysaccharide of Fructus Corni，was a kind of the main functional components of the Fructus Corni，possesses various pharmacological and physiological activities and studies on this polysaccharides has become to a research hotspot in recent years.The research progress of extraction，isolation and purification，chemical constitution and bioactivities of the polysaccharides of Fructus Corni were reviewed in this paper，which is helpful to the further research and development of Fructus Corni.

Key words：

Fructus Corni；Polysaccharides；Isolation and purification；Chemical constituti on；Bioactivity