益氣養血顆粒的質量標準研究

摘 要：目的:建立益氣養血顆粒的質量控制方法。方法：用薄層色譜法對該藥的黃芪、陳皮、淫羊藿進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定陳皮。結果:薄層色譜鑒別斑點清晰，陰性對照無干擾，橙皮苷在20.08～602.4ng范圍內線性關系良好（r=0.9999），平均回收率為99.04%，RSD=1.76%(n=6)。結論：該法操作簡便，方法穩定，專屬性強，可作為該制劑的質量控制方法。

關鍵詞：益氣養血顆粒；薄層色譜法；HPLC；橙皮苷

中圖分類號：R284.1文獻標識碼：A文章編號：1673-2197（2008）09-0032-03

益氣養血顆粒是由人參、黃芪、陳皮、淫羊藿等中草藥組成，具有益氣養血的功效，用于氣血不足所致的氣短心悸，面色不華，體虛乏力。為控制該藥品的質量，本研究對該藥中的黃芪、陳皮、淫羊藿3種藥材進行了薄層鑒別，并采用 HPLC法測定陳皮中橙皮苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫Agilent-1200高效液相色譜儀，ChemStation 色譜工作站，日本AND GR-202電子分析天平。

1.2 試藥

益氣養血顆粒及各被檢藥材的陰性制劑由廣西嘉進藥業有限公司提供；黃芪甲苷、淫羊藿苷、橙皮苷對照品購于中國藥品生物制品檢定所；硅膠G、GF254為化學純(青島海洋化工廠)；其它化學試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層鑒別

2.1.1 黃芪鑒別

取本品10g，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨試液振搖洗滌3次，每次20mL，取正丁醇液蒸干，殘渣加稀乙醇1mL使溶解，加在中性氧化鋁柱（100~120目，2g，內徑1.5cm）上，用40%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水1mL使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱（內徑1.5cm，柱高12cm）上，依次用水20mL、40%乙醇30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺黃芪的陰性樣品同法制成陰性對照溶液再取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種對照品溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（13∶5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性樣品則不顯示。見圖 1。

2.1.2 陳皮鑒別

取本品細粉10g，加水20mL使溶解，置分液漏斗中，加環己烷振搖洗滌3次，每次20mL，水液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。另取缺陳皮的陰性樣品同法制成陰性對照溶液，另取橙皮苷對照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酯乙酯-甲醇-水-吡啶（100∶17∶13∶5）為展開劑，展至約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開劑，展至約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性樣品則不顯示。見圖 2。

2.1.3 淫羊藿鑒別

稱取本品細粉10g，加水30mL使熔解，水液用乙醚振搖提取3次，每次30mL，棄去乙醚液，水液用乙酸乙酯振搖提取3次，每次30mL，蒸干，殘渣加甲醇1mL溶解，作為供試品溶液。另取缺淫羊藿的陰性樣品同法制成陰性對照溶液，另取淫羊藿苷對照品加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各10μL，分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-丁酮-水（10∶1∶1∶1）液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。陰性樣品則不顯示。見圖 3。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件分析

Agilent SB-C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)；乙腈－0.1%磷酸 (20：80) 為流動相；流速1.0mL/min；檢測波長283nm。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含20μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備

取本品粉末約1g置錐形瓶中，精密稱定，精密加甲醇25mL，稱定重量，回流1h，放冷，用甲醇補足減失的重量，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.3.4 測定法

分別精密吸取對照品和供試品溶液各 10μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積積分值。按外標法以峰面積計算，即得。

2.3.5 專屬性考察

取缺陳皮樣品按供試品溶液制備方法制備， 進樣，測定。圖譜表明在該色譜條件下，陰性對照無干擾，結果見圖4。

2.3.6 標準曲線的制備

精密稱分別精密吸取濃度為20.08μg/mL的橙皮苷對照品溶液按正文擬訂的色譜條件分別進樣分別吸取上述對照品溶液1μL、5μL、10μL、20μL、30μL，注入色譜儀，測定，以峰面積積分值為縱坐標（Y），橙皮苷對照品進樣量（ng）為橫坐標（X）繪制標準曲線，得回歸方程為：

Y=2541.5X +216.2 （r=0.9999）

結果表明：橙皮苷在20.08～602.4ng范圍內，進樣量與峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.3.7 精密度實驗

取同一份供試品溶液，按上述色譜條件，連續進樣6次，測定峰面積積分值，RSD為0.58%。

2.3.8 穩定性實驗

取同一份樣品溶液，放置0，2，4，6，8，10h， 按上述色譜條件，分別測定峰面積積分值，RSD為0.77％。

2.3.9 重復性實驗

精密稱取同一批的樣品 6份，按上述方法試驗，結果平均含量是0. 578mg/g，RSD=1.42％。

2.3.10 加樣回收率實驗

精密量取已測定含量的益氣養血顆粒(0. 578mg/g)約0.5 g，平行取樣6份，精密加入濃度為0.284mg/mL的橙皮苷對照品溶液各1mL，精密加入甲醇24mL，按正文擬訂的方法制備供試品溶液、測定，計算回收率，詳見表1。

2.3.11 樣品含量測定

按擬訂的含量測定方法，測定了本品3批樣品中的橙皮苷含量，結果見表2。

3 討論

（1）本文考察了流動相乙腈0.1%磷酸^［1］、甲醇-水^［2］等條件，

發現乙腈0.1%磷酸所得的峰形，分離度較好。

（2）本文對不同的超聲時間、不同的回流時間進行了考察，發現回流1h提取效率最高。

參考文獻：

［1］ 楊紅俠，宋逍等. HPLC法測定消石膠囊中橙皮苷的含量［J］.現代中醫藥，2006，26（6）：53-54.

［2］ 楊國忠，陳玲.HPLC法測定十昧活血丸中橙皮苷的含量［J］.中國藥師，2006，9（11）：1030-1031.

（責任編輯：王尚勇）

Studies on the Quality Standard of Yiqiyangxue Granule

Chen Xuesong，Huang Heng

(Wuzhou institute for food and drug control，Wuzhou 543002，China)

Abstract：

Objective:to establish the method for quality control of Yiqiyangxue Granule.Methods:Radix astragali，Pericarpium Citri Reticulatae，epimedium were identified by TLC．The content of epimedium was determined by HPLC.Results: the spots of TLC were distinct. The negative sample had no interference.The linear regression for hesperidin Was obtained over the range of20~1000ng. The average recovery was 99.04％，RSD=1.76％（n=6）.Conclusion: the established method is simple， feasible and repeatable， and can be used for the quality supervisory ofYiqiyangxue Granule.

Key words：

Yiqiyangxue Granule；TLC；HPLC；Icariine