宋金元原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥微米粉末噴灑用于肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛的實(shí)驗(yàn)研究

摘 要：目的：評(píng)價(jià)沒藥微米粉末、血竭微米粉末對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛模型的鎮(zhèn)痛效果及安全性，并對(duì)其鎮(zhèn)痛作用機(jī)理進(jìn)行初探。方法：分別采用小鼠熱板法和小鼠扭體法，與空白組、阿司匹林組、鹽酸曲馬多組對(duì)照，觀察實(shí)驗(yàn)藥物的軀體鎮(zhèn)痛效果；建立小鼠肛腸病術(shù)后疼痛模型，采取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)該模型小鼠血清中前列腺素E2（PGE2）和β-內(nèi)啡肽（β-EP）測(cè)定，研究其鎮(zhèn)痛作用及鎮(zhèn)痛機(jī)制；以急性皮膚粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)觀察藥物局部外用的毒性與不良反應(yīng)。結(jié)果與結(jié)論：沒藥、血竭微米粉末均具有明確的軀體鎮(zhèn)痛作用；沒藥微米粉末噴灑對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛模型具有明確的鎮(zhèn)痛作用，其作用與鹽酸曲馬多原料藥外用相當(dāng)；血竭微米粉末也具有鎮(zhèn)痛作用，與阿司匹林原料藥外用的效果相當(dāng)；本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)沒藥、血竭微米粉末對(duì)小鼠皮膚粘膜有急性刺激作用。沒藥微米粉末的鎮(zhèn)痛機(jī)理可能與提高神經(jīng)激素β-EP的含量，發(fā)揮中樞鎮(zhèn)痛作用有關(guān)；血竭微米粉末的鎮(zhèn)痛機(jī)理可能與抑制PGE2合成有關(guān)。

關(guān)鍵詞：原創(chuàng)性；單味鎮(zhèn)痛中藥；微米粉末；噴灑；肛腸病術(shù)后；疼痛；實(shí)驗(yàn)研究

中圖分類號(hào)：R283文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2008）09-0024-03

宋金元時(shí)期（公元960~1368年），《開寶本草》首次明確提出沒藥“主破血止痛”，血竭“主心腹猝痛……止痛生肉”，指明了宋金元原創(chuàng)性單味鎮(zhèn)痛中藥即：沒藥、血竭。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小白鼠，體重為18～22g(由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供)，動(dòng)物合格證：scxk（湘）2004-0005。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑與器材

PGE2ELISA試劑盒（上海森雄科技實(shí)業(yè)有限公司進(jìn)口分裝，批號(hào)：0711111）；β-EP ELISA試劑盒（BPB Biomedicals，Inc.USA，湖南晶科生物試劑有限公司原裝進(jìn)口，批號(hào)：70621S）；三用恒溫水箱（浙江省余姚市檢測(cè)儀表廠生產(chǎn)，浙制02810175）；Thermo multiskanink3酶標(biāo)儀（美國熱電-芬蘭雷勃酶標(biāo)儀MK3）。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

沒藥微米粉末（D50=11.68μm，D90=56.40μm），血竭微米粉末（D50=6.92μm，D90=32.52μm），均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)教育部工程技術(shù)研究中心提供；阿司匹林原料藥，山東新華制藥股份有限公司生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字號(hào)：H37020354，批號(hào)：07200；鹽酸曲馬多原料藥，中國科學(xué)院分裝，標(biāo)準(zhǔn)：EP 5.0，批號(hào)：070227；參照《中華人民共和國藥典》（2005版），沒藥用量為3～10g，臨床常用量為10g；血竭用量為1～2g，臨床常用量為2g。實(shí)驗(yàn)藥物劑量均根據(jù)其臨床常用量為基準(zhǔn)計(jì)算（劑量換算參考人和動(dòng)物按體表面積折算的等效劑量比率表^［1］）。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法及分組

參照文獻(xiàn)^［1］分別進(jìn)行小鼠熱板法與小鼠扭體法，前者選取雌性小鼠180只，后者選取雌雄各81只，均隨機(jī)分成9組：空白組（1mL生理鹽水）、沒藥低劑量組（0.03g/只）、沒藥中劑量組（0.06g/只）、沒藥高劑量組（0.12g/只）、血竭低劑量組（0.005g/只）、血竭中劑量組（0.01g/只）、血竭高劑量組（0.02g/只）、阿司匹林組（0.0016g/只）、鹽酸曲馬多組（0.0002g/只）。

肛腸病術(shù)后疼痛模型參考Milligan-Morgan痔手術(shù)的操作方法^［2］造模，肛周創(chuàng)面約0.5cm×0.5cm大小。造模成功小鼠，隨機(jī)選取80只分為5組，每組16只，分別為模型對(duì)照組（適量面粉）、沒藥高劑量組（0.12g/只）、血竭高劑量組（0.02g/只）、阿司匹林組（0.0016g/只）、鹽酸曲馬多組（0.0002g/只）。與隨機(jī)選取的16只正常小鼠（正常對(duì)照組，適量面粉），均以無菌棉簽粘取各藥粉末均勻?yàn)⒂趧?chuàng)面，每天給藥2次，3天后分別采集各組小鼠眼眶靜脈血，分離血清，測(cè)定PGE2和β-EP（ELISA法）。

參照文獻(xiàn)^［3］進(jìn)行急性皮膚粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)，小鼠64只，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組：沒藥高劑量組（0.12g/只）、血竭高劑量組（0.02g/只）。按皮膚粘膜刺激性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分^［3］。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

計(jì)量資料以±s表示，采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 小鼠熱板法

如表1，高劑量沒藥、血竭微米粉末對(duì)小鼠痛閾提高率均有不同程度的影響（P<0.05），與阿司匹林、鹽酸曲馬多原料藥作用相當(dāng)（P>0.05）。

2.2 小鼠扭體法

注：與空白組比較，*P<0.05；與阿司匹林組比較，★P<0.05；與鹽酸曲馬多組比較，▲P<0.05。

如表2，高劑量沒藥、血竭微米粉末對(duì)小鼠扭體反應(yīng)均有明顯抑制作用（P<0.05），前者與鹽酸曲馬多原料藥作用相當(dāng)（P>0.05），后者與阿司匹林原料藥作用相當(dāng)（P>0.05）。

2.3 肛腸病術(shù)后疼痛模型實(shí)驗(yàn)

注：與模型對(duì)照組比較，*P<0.05；與正常對(duì)照組比較，▲P<0.05；與阿司匹林組比較，★P<0.05；與鹽酸曲馬多組比較，■P<0.05。

如表3，高劑量沒藥微米粉末對(duì)肛腸病術(shù)后疼痛模型小鼠血清中PGE2、β-EP的含量均有明顯影響（P<0.05），與鹽酸曲馬多原料藥作用相當(dāng)（P>0.05）。高劑量血竭微米粉末僅能影響PGE2的含量，與阿司匹林原料藥作用相當(dāng)（P>0.05）。

2.4 急性皮膚粘膜刺激性實(shí)驗(yàn)

如表4、表5，用藥前后小鼠體重相當(dāng)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），肉眼觀察未見皮膚粘膜出現(xiàn)紅斑、水腫、滲出等異常，觀察小鼠全身情況未見中毒表現(xiàn)，病檢亦未見異常，表明兩種實(shí)驗(yàn)藥物局部外用對(duì)皮膚粘膜無急性刺激作用。

3 討論

沒藥是嗎啡發(fā)現(xiàn)之前常用的鎮(zhèn)痛藥，意大利科學(xué)家從沒藥中提取三種倍半萜烯成分，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明至少有兩種成分具有強(qiáng)烈鎮(zhèn)痛作用^［4］。其中呋喃桉葉烷-1，3-二烯和莪術(shù)烯通過作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的阿片受體，起到強(qiáng)烈鎮(zhèn)痛作用，可被納洛酮阻斷^［5］；熱敏呋喃二烯重排后是呋喃欖香烯，該化合物和其它相關(guān)的呋喃倍半萜與沒藥的鎮(zhèn)痛作用也有一定關(guān)系^［5］。本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)了沒藥微米粉末的強(qiáng)烈鎮(zhèn)痛作用，灌胃給藥既可抑制熱刺激引起的疼痛，也可抑制化學(xué)刺激性疼痛；噴灑用藥可降低PGE2的含量，提高β-EP的含量，從而對(duì)肛腸病術(shù)后創(chuàng)面疼痛起到較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。β-EP是目前公認(rèn)的疼痛抑制性神經(jīng)遞質(zhì)^［6］，主要作用于阿片受體，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示沒藥微米粉末的鎮(zhèn)痛機(jī)制可能與提高β-EP含量，使其作用于阿片受體而產(chǎn)生強(qiáng)烈的中樞鎮(zhèn)痛作用有關(guān)。PGE2的含量降低可能是由于沒藥微米粉末的強(qiáng)烈鎮(zhèn)痛作用使小鼠疼痛減輕，PGE2代謝后未繼續(xù)產(chǎn)生所致，并非藥物外周鎮(zhèn)痛機(jī)制的體現(xiàn)。

龍血竭主要含有黃酮類、皂苷類、芪類、酚類、有機(jī)酸、酯類和揮發(fā)油等成分^［7］，血竭皂甙是合成腎上腺皮質(zhì)激素的原料，有較強(qiáng)的抗炎鎮(zhèn)痛作用，能明顯減輕創(chuàng)面疼痛^［8］。林啟云^［9］、曾雪瑜^［10］等的實(shí)驗(yàn)均表明，國產(chǎn)血竭具有抗炎鎮(zhèn)痛作用。另有研究表明國產(chǎn)血竭的抗炎鎮(zhèn)痛藥理作用與其改善局部微循環(huán)、抑制血小板聚集和降低血液粘度等藥理機(jī)制有關(guān)^［11］；謝文等^［12］研究也表明，國產(chǎn)血竭有明顯的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，且對(duì)二甲苯部位PGE2和腹腔注射醋酸后腹腔液PGE2的釋放有明顯的抑制作用。本次實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了血竭微米粉末的抗炎鎮(zhèn)痛作用，噴灑用藥能降低血清中PGE2的含量，從而對(duì)肛腸病術(shù)后創(chuàng)面疼痛產(chǎn)生抑制作用。PGE2是重要的致痛炎癥介質(zhì)，疼痛時(shí)中樞及外周含量上升，術(shù)前或術(shù)后的有效鎮(zhèn)痛可使其降低。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果中血竭微米粉末對(duì)血清中PGE2的降低，提示血竭微米粉末的鎮(zhèn)痛的機(jī)制可能和抑制PGE2合成有關(guān)。然而越來越多學(xué)者認(rèn)為血竭的鎮(zhèn)痛作用不僅與抗炎有關(guān)，馬全順^{［13、14］}等的實(shí)驗(yàn)證明了血竭總黃酮是血竭發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的有效部位，劉向明^［15］等則認(rèn)為龍血素B可能是其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的主要成分，通過直接干預(yù)初級(jí)感覺傳入神經(jīng)元的痛覺信息傳入而產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。本次實(shí)驗(yàn)尚未涉及到此方面，今后可做進(jìn)一步深入研究。

沒藥、血竭微米粉末噴灑對(duì)肛腸病術(shù)后創(chuàng)面的鎮(zhèn)痛作用，分別與鹽酸曲馬多、阿司匹林原料藥外用相當(dāng)，證實(shí)了沒藥、血竭微米粉末具有較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用，且沒藥較血竭鎮(zhèn)痛作用更強(qiáng)。而沒藥微米粉末能在本實(shí)驗(yàn)中顯示出與鹽酸曲馬多外用相當(dāng)?shù)膹?qiáng)烈鎮(zhèn)痛作用，與其本身的鎮(zhèn)痛機(jī)制有關(guān)，也可能與創(chuàng)面直接給藥有關(guān)。鹽酸曲馬多為中樞性鎮(zhèn)痛藥，中樞給藥或肌注效果較好，創(chuàng)面給藥吸收利用相對(duì)較差；而沒藥、血竭等中藥含有揮發(fā)油，具有良好的透皮吸收作用^{［16、17］}，加上中藥微米粉末粒徑微小，創(chuàng)面直接給藥的吸收利用更好，故能顯示出較強(qiáng)的鎮(zhèn)痛作用。

綜上所述，實(shí)驗(yàn)表明宋金元原創(chuàng)性單味中藥微米粉末—沒藥微米粉末及血竭微米粉末噴灑對(duì)肛腸病術(shù)后創(chuàng)面鎮(zhèn)痛是安全有效的，且沒藥微米粉末的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)于血竭微米粉末。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 李儀奎.中藥藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991：562，350-353.

［2］ Milligan ETC，Morgan CN，Jones LE，et al.Surgical anatomy ofthe anal canal and the operation treatment of hemorrhoids［J］.Lancet，1937，（2）：1119-1124.

［3］ 謝秀瓊.中藥新制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1994：567-568.

［4］ 常怡勇.沒藥將成為止痛特效藥［J］.中華養(yǎng)生保健，2008，（3）：43.

［5］ 萬文珠，婁紅祥.沒藥的化學(xué)成分和藥理作用［J］.國外醫(yī)藥·植物藥分冊(cè)，2005，20（6）：236-241.

［6］ 金蔭昌.分子藥理學(xué)［M］.天津：天津科技出版社，1990：444.

［7］ 張慶云，朱輝，陳紅英，等.龍血竭研究進(jìn)展［J］.武警醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，13（1）：69-71.

［8］ 李曉蘭，蘇振坤，楊清.龍血竭散在肛瘺術(shù)后的臨床應(yīng)用［J］.大腸肛門病外科，2005，11（4）：279-280.

［9］ 林啟云.廣西血竭的藥理作用及毒性試驗(yàn)［J］.廣西中醫(yī)藥，1986，9(6)：33.

［10］ 曾雪瑜，何飛，李友娣，等.廣西血竭的消炎止痛作用及毒性研究［J］.中國中藥，1999，24（3）：171.

［11］ 熊元君，劉滿江，劉 發(fā)，等.復(fù)方血竭止痛擦劑的抗炎止痛與活血化瘀作用［J］.中藥藥理與臨床，1999，15(3)：30.

［12］ 謝文，馬克昌，謝艷，等.不同品種血竭外用時(shí)的鎮(zhèn)痛抗炎作用［J］.中醫(yī)正骨，1999，11(2)：5-6.

［13］ 馬全順，尹世金，陳素，等.血竭總黃酮對(duì)小鼠三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞河豚毒素敏感型鈉通道電流的抑制作用［J］.中南民族大學(xué)學(xué)報(bào) (自然科學(xué)版)，2004，23（3）：5-8.

［14］ 馬全順，尹世金，張凡，等.血竭總黃酮對(duì)三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞河豚毒素不敏感型鈉電流峰值的濃度依賴性抑制［J］.中國臨床康復(fù)，2005，9（25）：108-111.

［15］ 劉向明，陳素，尹世金，等.血竭及其成分龍血素B對(duì)背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞河豚毒素敏感型鈉通道電流的影響［J］.中國科學(xué)C輯：生命科學(xué)，2004，34（1）：80-87.

［16］ 王成軍，牛淑平.論藥摩方的促透皮吸收法［J］.中醫(yī)文獻(xiàn)，1999，（4）：19.

［17］ 張會(huì)宗，李成森.祛斑止癢膏透皮吸收試驗(yàn)初步研究［J］.中草藥，2000，31(1)：42～44.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）