保健食品人參蜂王漿口服液中5種人參皂苷含量的測定

Determination of the Content of Five Ginsenosides in HealthCare Food Ginseng Royal Jelly Oral Liquid

ZHENG Yan， MAI Yunjia， HUANG Dishu， YE Youfang， XU Wanlu， YE Rong （Beihai Public Inspection and Testing Centre， Beihai 536ooo， China）

Abstract： Objective：To establish a method for simultaneous determination of the contents offive ginsenosides in ginseng royal jelly oral liquid by high performance liquid chromatography （HPLC）.Method： After ultrasonic extraction with methanol，dilution and fitration，the samples were subjected to gradient elution using a CAPCELL PAK- C₁₈ MG I column with water-acetonitrile as the mobile phase，and HPLC detection was performed. Result： The linear relationship of ginsenoside Rg_l， ，ginsenoside Re， ginsenoside Rb₁， ginsenoside Rb₃ ， and ginsenoside Rd was good r?0.999 8 ），with an average recovery rate of 97.4%～105.7%， ，and an relative standard deviation of （20 0.9%～1.3% . Conclusion： The method is simple to operate，accurate in results，and has good repeatability， and can be used for the determination of the contents of five ginsenosides in ginseng royal jelly oral liquid.

Keywords： ginseng royal jelly oral liquid; high performance liquid chromatography; ginsenoside; content determination

人參蜂王漿口服液是一種以人參和蜂王漿為主要原料制成的保健食品，具有調節免疫力、延緩衰老的保健功能。其主要功效成分人參具有補氣固脫、免疫調節、抗氧化等作用[。人參的活性成分包括原人參三醇型皂苷（人參皂苷 Rg₁ 、Re等）、原人參二醇型皂苷（人參皂苷 Rb₁ 、 Rb₃ 、Rd等）[2]。不同的人參皂苷具有不同的藥理活性， Rg₁ 具有修復神經損傷的藥理活性；Re具有保護心血管、抗氧化的藥理活性； Rb₁ 具有保護心肌細胞、抗炎的藥理活性； Rb₃ 具有提高心肌細胞收縮力、保護心血管、抗血栓的藥理活性；Rd具有鎮痛、抗炎、調節免疫的藥理活性[3-4]。《中國藥典》規定采用高效液相色譜法（HighPerformanceLiquid Chromatography，HPLC）測定人參中的人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁^[5] 。目前，含五加科原料保健食品中總皂昔含量多采用分光光度法測定，方法較為粗放。因此，本研究在參考人參皂苷測定方法的基礎上[，建立了以高效液相色譜法同時法測定人參蜂王漿口服液中人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 ?Rb₃ 和 Rd含量的方法[7-8]，以期為該制劑及含人參保健品的質量控制提供參考。

1材料與方法

1.1材料與設備

人參皂苷 Rg₁ （批號：110703-201832，純度92.4% ）、Re（批號：110754-201827，純度 93.4% ）、Rb₁ （批號：110704-201827，純度 91.2% ）、 Rb₃ （批號：111686-201504，純度 97.0% ）、Rd（批號：111818-201603，純度 92.1% ），均來源于中國食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇均為色譜純，賽默飛世爾科技有限公司；自制超純水；3批人參蜂王漿口服液，吉林敖東延邊藥業股份有限公司（批號：2306104）、北京市東風保健營養品有限責任公司（批號：20240903、20241201）。

Agilent1260高效液相色譜儀，安捷倫科技有限公司；XA205DU分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；5510E-DTH超聲波清洗儀，必能信超聲（上海）有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd對照品適量，加甲醇分別制成濃度為 2.307，2.105，1.868， 1.918mg?mL^-1 和 1.591mg?mL^-1 的貯備液。分別精密量取各對照品溶液 2mL ，置于同一 20mL 容量瓶中，70% 甲醇至刻度，搖勻，即得混合對照品儲備液（約200μg?mL^-1 ）。

1.2.2 樣品前處理

精密量取樣品 1mL ，置于 5mL 容量瓶中，加上適量甲醇，超聲處理 10min（ 300W， 250kHz） ，渦旋混勻，放冷，用 70% 甲醇稀釋至刻度，搖勻，過濾，即得樣品溶液。

1.2.3 色譜條件

色譜柱：CAPCELLPAK- ?C₁₈ MGⅡ色譜柱（ 250mm×4.6mm ， 5μm ）；流動相：水（A）-乙腈（B），梯度洗脫。洗脫程序： 0～35min ， 19%B ： 35～ 60min ， 19%40%B ； 60～ 65min ； 40% 19%B ： 65～70min ， 21%B 。流速： 1.3mL?min^-1 ：進樣量： 20μL ；檢測波長： 203nm ；柱溫： 25^°C 。

2 結果與分析

2.1專屬性試驗

取制備好的對照品、空白、樣品溶液分別注入液相色譜儀進行分析。結果表明，空白溶液在5種人參皂昔各自的保留時間處無相應峰出現，說明方法具有良好的專屬性。對照品和樣品溶液5種成分理論塔板數均 gt;10 000 。人參皂苷 Rg₁ 和Re分離度均 ?1.8 ，其他成分分離度 gt;1.5 ，且峰形良好。

2.2 線性關系和檢測限分析

精密量取“1.2.1”項下適量混合對照品儲備液0.20、0.50、1.00、 2.00mL 和 5.00mL ，置于 10mL 容量瓶中，用 70% 甲醇稀釋至刻度，制得標準系列溶液 1～5 。按“1.2.3”項條件下進樣檢測，以標準系列溶液濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標繪制標準曲線；將混合對照品儲備液稀釋至信噪比接近3時的質量濃度作為檢測限，回歸方程、線性范圍、相關系數和檢出限見表1。各成分在各自范圍內線性關系良好，方法靈敏度較高。

2.3精密度試驗

將標準系列溶液3按“1.2.3”項下條件測定6次，測得人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和 Rd峰面積，計算相對標準偏差（RelativeStandardDeviation，RSD）分別為 0.3% 、 0.8% 、 0.6% 、 0.4% 、 0.9% ，表明儀器具有良好的精密度。

2.4穩定性試驗

取供試品（批號2306104）溶液，在室溫下放置0、4、8、16、 24h 后按“1.2.3”項下條件測定，根據人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd色譜峰面積計算RSD，分別為 0.3% 、 0.9% ！ 0.8% 、 0.3% ！ 0.8% 表明供試品溶液在 24h 內穩定性良好。

2.5 重復性試驗

取同一批樣品（批號2306104），按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液6份，在“1.2.3”條件下進樣，測得人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和 Rd含量，計算RSD分別為 1.1% 、 1.6% 、 0.8% 、 0.9% 、 1.0% ，表明該方法重復性良好。

2.6 加樣回收率試驗

精密量取（批號2306104）樣品3份，每份 1mL 精密加入 100μL 混合對照品儲備液，按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“1.2.3”條件下測定，結果見表2。5種人參皂昔的平均回收率在

97.4%～ 105.7% ，RSD為 0.9%～ 1.3% ，表明該方法測定結果準確[9]。

2.7樣品含量測定

取3批人參蜂王漿口服液，按“1.2.2”項下方法制備供試品溶液，在“1.2.3”條件下測定，結果見表3。

3結論

本實驗建立了HPLC法同時測定保健食品人參蜂王漿口服液中人參皂苷 Rg₁ 、Re、 Rb₁ 、 Rb₃ 和Rd含量的方法。該方法高效快速，準確可靠，相比于《保健食品理化及衛生指標檢驗與評價技術指導原則（2020年版）》規定的保健食品人參總皂苷測定方法[1]，對皂苷單體成分的檢測更具針對性，可為該制劑及含人參保健品的質量控制提供參考。

參考文獻

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[10]國家市場監督管理總局.保健食品理化及衛生指標檢驗與評價技術指導？原則（2020年版）[EB/OL].（2020-10-16）[2025-04-16].https：//www.cfe-samr.org.cn/zcfg/bjsp_134/gsgg/zc/202207/t20220729_4392.html.