長(zhǎng)鏈非編碼RNAGAS5、NLR與D-二聚體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值

[摘" "要]" "目的：評(píng)價(jià)長(zhǎng)鏈非編碼RNA 生長(zhǎng)抑制特異性轉(zhuǎn)錄本5（growth arrest-specific 5， GAS5）、中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio， NLR）和D-二聚體（D-dimer， DD）聯(lián)合檢測(cè)在肺結(jié)核中的診斷效能。方法：選取2024年1—10月收治的肺結(jié)核住院患者50例納入觀察組，選取同期健康體檢者52人納入對(duì)照組。對(duì)兩組對(duì)象采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR評(píng)估GAS5表達(dá)，血常規(guī)檢測(cè)并計(jì)算NLR，同時(shí)檢測(cè)DD水平。繪制ROC曲線評(píng)價(jià)聯(lián)合檢測(cè)GAS5、NLR和DD對(duì)肺結(jié)核的診斷效能。結(jié)果：觀察組患者GAS5水平顯著低于對(duì)照組（0.216 vs 0.904， Plt;0.001），NLR和DD水平均高于對(duì)照組（4.564 vs 1.688、0.795 mg/L vs 0.300 mg/L， 均Plt;0.001）。3個(gè)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的ROC曲線AUC為0.937，敏感度為92.00%，特異度為82.70%。結(jié)論：GAS5、NLR和DD聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)核病的診斷具有較高的敏感度，聯(lián)合診斷效能卓越，為肺結(jié)核早期診斷及后續(xù)相關(guān)治療提供依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]" "肺結(jié)核；長(zhǎng)鏈非編碼RNA 生長(zhǎng)抑制特異性轉(zhuǎn)錄本5；中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值；D-二聚體；聯(lián)合診斷

[中圖分類號(hào)]" "R521" " " " " " " "[文獻(xiàn)標(biāo)志碼]" "A" " " " " " " "[文章編號(hào)]" "1674-7887（2025）01-0043-04

Diagnostic value of the combined detection of long non-coding RNA GAS5， NLR， and D-dimer in pulmonary tuberculosis*

LIU Haimei**#， WEI Yajing**#， ZHU Huiming， WANG Shouwei， MA Jiahui， LI Feng***" " " " （Department of Clinical Laboratory， Nantong Sixth People？蒺s Hospital， Jiangsu 226011）

[Abstract]" "Objective： To evaluate the diagnostic efficacy of the combined detection of long non-coding RNA growth arrest-specific 5（GAS5）， neutrophil-to-lymphocyte ratio（NLR） and D-dimer（DD） in pulmonary tuberculosis. Methods： A total of 50 inpatients with pulmonary tuberculosis admitted from January to October 2024 were included in the observation group， and 52 patients were included in the control group. Real-time quantitative PCR was used to evaluate the expression of GAS5 in the two groups， and the NLR was detected and calculated by routine blood tests， and the level of DD was detected at the same time. The diagnostic efficacy of combined detection of GAS5， NLR and DD in pulmonary tuberculosis was evaluated. Results： The level of GAS5 in the observation group was significantly lower than that in the control group（0.216 vs 0.904， Plt;0.001）， and the levels of NLR and DD were higher than those in the control group（4.564 vs 1.688 and 0.795 mg/L vs 0.300 mg/L， both Plt;0.001）. The AUC of the ROC curve of the three indexes was 0.937， the sensitivity was 92.00%， and the specificity was 82.70%. Conclusion： The combined detection of GAS5， NLR and DD has high sensitivity and excellent diagnostic efficiency in the diagnosis of tuberculosis， which provides a basis for the early diagnosis of pulmonary tuberculosis and subsequent related treatment.

[Key words]" "pulmonary tuberculosis; long non-coding RNA growth arrest-specific 5; neutrophil-to-lymphocyte ratio; D-dimer; combined diagnosis

肺結(jié)核仍是全球公共衛(wèi)生面臨的重大挑戰(zhàn)，主要由結(jié)核分枝桿菌感染引起，在中低等收入國(guó)家造成了極高的發(fā)病率與死亡率[1]。準(zhǔn)確及時(shí)的診斷對(duì)有效管理和控制該疾病至關(guān)重要[2]。傳統(tǒng)結(jié)核的診斷依賴于微生物培養(yǎng)、PCR和影像學(xué)技術(shù)，但這些方法往往存在耗時(shí)、成本高以及敏感性和特異性結(jié)果的變異性等局限[3]。生物標(biāo)志物的研究為提高肺結(jié)核診斷的準(zhǔn)確性和可靠性開辟了新途徑[4]。

生長(zhǎng)抑制特異性轉(zhuǎn)錄本5（growth arrest-specific 5， GAS5）已成為多種細(xì)胞過程中關(guān)鍵的調(diào)節(jié)因子，包括細(xì)胞凋亡、免疫反應(yīng)和炎癥途徑[5-6]。研究[7-8]表明，GAS5參與對(duì)結(jié)核分枝桿菌感染的宿主反應(yīng)。因此，評(píng)估GAS5可能提供對(duì)肺結(jié)核發(fā)病機(jī)制的重要見解，并有助于區(qū)分活動(dòng)性結(jié)核和其他感染性疾病。

中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio， NLR）是系統(tǒng)性炎癥的簡(jiǎn)單且具有成本效益的標(biāo)志物[9]。中性粒細(xì)胞是先天免疫反應(yīng)的關(guān)鍵組成部分，由于其清除病原體的作用而在感染性疾病中升高[10]。淋巴細(xì)胞在介導(dǎo)適應(yīng)性免疫中發(fā)揮重要作用，其減少可能表明免疫失調(diào)或中性粒細(xì)胞活動(dòng)過度[11]。研究[12-13]表明，較高的NLR與活動(dòng)性結(jié)核感染相關(guān)，使其成為診斷和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展的潛在指標(biāo)。

D-二聚體（D-dimer， DD）是纖維蛋白降解產(chǎn)物，在凝血過程中具有重要作用，被廣泛用作血栓的生物標(biāo)志物[14]。其水平在多種炎癥性和感染性疾病中升高，包括肺結(jié)核[15]。研究[16]發(fā)現(xiàn)，DD升高與疾病嚴(yán)重性和并發(fā)癥的發(fā)生相關(guān)。此外，DD在評(píng)估凝血和炎癥中的作用使其成為評(píng)估肺結(jié)核對(duì)全身健康影響的寶貴標(biāo)志物[17]。DD與其他指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)肺結(jié)核，或許能對(duì)肺結(jié)核患者的病情進(jìn)行更全面的評(píng)估，進(jìn)而提升診斷的準(zhǔn)確性[18]。本研究旨在系統(tǒng)評(píng)估聯(lián)合檢測(cè)GAS5、NLR及DD在肺結(jié)核早期診斷中的潛在應(yīng)用價(jià)值及其對(duì)疾病進(jìn)程的評(píng)估意義，有助于推動(dòng)肺結(jié)核的診斷、防控和治療。

1" "對(duì)象與方法

1.1" "研究對(duì)象" "選取2024年1—10月南通市第六人民醫(yī)院收治的肺結(jié)核住院患者50例納入觀察組，符合《肺結(jié)核診斷》（WS 288-2017）等診斷標(biāo)準(zhǔn)[19]，包括臨床癥狀（如咳嗽、咳痰2周以上，或伴有咯血、低熱、盜汗、乏力等）、影像學(xué)檢查（胸部X線或CT顯示典型肺結(jié)核病變）、實(shí)驗(yàn)室檢查（痰涂片抗酸桿菌陽(yáng)性、痰培養(yǎng)結(jié)核分枝桿菌陽(yáng)性或分子生物學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性）。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）合并其他嚴(yán)重的肺部疾病（如嚴(yán)重肺炎、肺膿腫、肺癌等）患者；（2）嚴(yán)重肝、腎功能不全，無法耐受肺結(jié)核治療以及后續(xù)研究檢查者；（3）患有嚴(yán)重精神疾病，無法配合完成研究相關(guān)檢查和調(diào)查者；（4）正在參與其他可能影響本研究結(jié)果的臨床試驗(yàn)者。選取同期健康體檢者52人納入對(duì)照組，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡、性別與觀察組盡量匹配；（2）同期體檢人員；（3）無肺結(jié)核相關(guān)癥狀；（4）胸部X線或CT檢查無肺結(jié)核相關(guān)影像學(xué)表現(xiàn)；（5）同意參與研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）既往有肺結(jié)核病史或正在進(jìn)行肺結(jié)核預(yù)防性治療的人員；（2）近期3個(gè)月內(nèi)有與活動(dòng)性肺結(jié)核患者密切接觸史，可能處于結(jié)核潛伏感染狀態(tài)者；（3）患有其他可能影響肺部影像學(xué)表現(xiàn)或免疫狀態(tài)的疾病（如自身免疫性疾病、嚴(yán)重的呼吸道感染等）；（4）拒絕進(jìn)行后續(xù)研究所需的檢查項(xiàng)目者。本研究方案經(jīng)南通市第六人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)：NTLYLL2024034），研究對(duì)象均知曉并簽署知情同意書。

1.2" "檢測(cè)方法

1.2.1" "標(biāo)本采集" "兩組對(duì)象于清晨7：00—9：00采集肘部靜脈血，分別進(jìn)行各指標(biāo)的檢測(cè)。

1.2.2" "qPCR檢測(cè)GAS5表達(dá)水平" "采集靜脈血4 mL于含有分離膠的真空采血管，靜置15 min待血液凝固后，4 ℃ 3 000 r/min離心10 min，將分離出的血清分裝于Rnase-free離心管-80 ℃保存，采用QuanStudio實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（試劑由TaKaRa公司提供）檢測(cè)GAS5表達(dá)。先從外周血分離總RNA，用NanoDrop光譜儀測(cè)其純度和濃度后，取5 μg總RNA，按廠家說明結(jié)合反轉(zhuǎn)錄酶、隨機(jī)引物，經(jīng)25 ℃ 10 min、42 ℃ 60 min、70 ℃ 5 min反轉(zhuǎn)錄為cDNA。qPCR反應(yīng)體系構(gòu)建，采用SYBR Green熒光染料定量分析，引物序列為L(zhǎng)ncRNA GAS5上游：GTGAGGTATGGTGCTGGGTG；下游：GCCAATGGCTTGAGTTAGGC，以GAPDH為內(nèi)參基因（上游：CCAGGTGGTCTCCTCTGA；下游：GCTGTAGCCAAATCGTTGT）。反應(yīng)體系總量20 μL，含10 μL 2×SYBR Green PCR Master Mix、1 μL cDNA模板、各0.5 μL的10 μmol/L上下游引物及8 μL無RNA酶的水。設(shè)初始預(yù)變性95 ℃ 2 min，40個(gè)循環(huán)（變性95 ℃ 15 s、退火60 ℃ 30 s、延伸72 ℃ 30 s），引物特異性熔解曲線分析確保特異性，用2-ΔΔCt法計(jì)算結(jié)果。

1.2.3" "中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及NLR計(jì)算" "采集肘部靜脈血置于含有EDTA抗凝劑的真空采血管，充分混勻，采用Sysmex XN血常規(guī)檢測(cè)儀用于血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)。依據(jù)公式NLR=中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)/淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，計(jì)算NLR。

1.2.4" "DD檢測(cè)" "采集靜脈血2 mL置于含有枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管，充分混勻，室溫下1 500 r/min離心15 min，分離血漿用于DD檢測(cè)。使用Sysmex CS5100全自動(dòng)血液凝固分析儀檢測(cè)DD水平。

1.3" "統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" "采用SPSS 27.0統(tǒng)計(jì)軟件，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用■±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，呈偏態(tài)分布資料以中位數(shù)M（P25， P75）表示，采用Pearson進(jìn)行相關(guān)性分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，采用ROC曲線評(píng)價(jià)GAS5、NLR以及DD單測(cè)或聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺結(jié)核的診斷價(jià)值。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2" "結(jié)" " " 果

2.1" "兩組患者基線資料比較" "兩組年齡、性別、高血壓史、糖尿病史、吸煙史、飲酒史等差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見表1。

2.2" "兩組患者血清學(xué)指標(biāo)比較" "兩組在NLR、DD以及GAS5含量方面差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均Plt;0.001），見表2。

2.3" "觀察組內(nèi)指標(biāo)相關(guān)性分析" "NLR、DD與GAS5組間均未見顯著相關(guān)性，見表3。

2.4" "GAS5、NLR以及DD水平對(duì)肺結(jié)核臨床診斷效能評(píng)價(jià)" "GAS5、NLR以及DD早期診斷肺結(jié)核的ROC曲線AUC分別為0.817、0.887、0.774。上述3種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC最大為0.937，高于單個(gè)指標(biāo)，敏感度和特異度分別為92.00%和82.70%，見表4、圖1。

3" "討" " " 論

肺結(jié)核早期診斷困難，當(dāng)前方法存缺陷，耐藥菌株使形勢(shì)更嚴(yán)峻，亟待創(chuàng)新策略提升診治水平。本研究深入剖析了肺結(jié)核患者相關(guān)指標(biāo)的變化情況，結(jié)果顯示，肺結(jié)核患者的GAS5水平顯著降低，提示該長(zhǎng)鏈非編碼RNA在肺結(jié)核病理生理進(jìn)程中扮演重要角色，極有可能參與宿主對(duì)結(jié)核分枝桿菌的免疫應(yīng)答調(diào)控。通過調(diào)節(jié)炎癥因子與細(xì)胞因子表達(dá)，GAS5的表達(dá)上調(diào)或許能增強(qiáng)細(xì)胞抗感染能力，為肺結(jié)核病情進(jìn)展及治療反應(yīng)監(jiān)測(cè)提供關(guān)鍵信息。

同時(shí)，結(jié)核患者的NLR水平顯著高于健康體檢者，這一現(xiàn)象與機(jī)體炎癥反應(yīng)程度緊密相連。中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在免疫反應(yīng)中分工不同，NLR升高表明機(jī)體免疫反應(yīng)失衡，且其與結(jié)核病的活動(dòng)性及嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可作為潛在生物標(biāo)志物，輔助臨床醫(yī)師判斷患者免疫狀態(tài)與病情進(jìn)展[20-21]。在治療過程中，NLR降低也與病情緩解相關(guān)，具有評(píng)估療效的價(jià)值。

此外，肺結(jié)核患者的DD水平顯著升高，意味著凝血狀態(tài)增強(qiáng)，存在與疾病相關(guān)的潛在血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)核感染引發(fā)的全身性炎癥反應(yīng)[22]，伴隨微血管損傷與凝血機(jī)制激活，致使DD水平上升。臨床研究[16]表明，DD水平與疾病活動(dòng)性及嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可用于評(píng)估病程與預(yù)后，還能提示潛在并發(fā)癥，有助于臨床及時(shí)干預(yù)。

在診斷策略上，單獨(dú)檢測(cè)GAS5、NLR、DD有助于診斷肺結(jié)核時(shí)，準(zhǔn)確性和敏感度存在局限。而聯(lián)合檢測(cè)這3項(xiàng)指標(biāo)，能夠從免疫應(yīng)答、炎癥與免疫狀態(tài)、系統(tǒng)性炎癥及凝血過程等多個(gè)維度，全面反映肺結(jié)核的病理生理狀態(tài)，極大地提高早期診斷的準(zhǔn)確性，聯(lián)合檢測(cè)的AUC明顯高于單獨(dú)檢測(cè)。

然而，本研究尚存在一定不足：樣本量相對(duì)較小，難以確保研究結(jié)果具有廣泛的普遍性；同時(shí)缺乏多中心數(shù)據(jù)，可能導(dǎo)致結(jié)論的穩(wěn)健性受到影響，數(shù)據(jù)收集過程中固有的批量效應(yīng)，也可能掩蓋生物標(biāo)志物之間的真實(shí)關(guān)系。應(yīng)積極擴(kuò)大樣本量，開展多中心研究，從而建立起基于這些生物標(biāo)志物的可靠結(jié)核病診斷標(biāo)準(zhǔn)與方案。同時(shí)開展縱向研究，動(dòng)態(tài)評(píng)估治療期間及治療后這些生物標(biāo)志物的變化，深入探究其在疾病進(jìn)展與消退中的作用，為更有效地抗擊結(jié)核病提供有力支持，降低結(jié)核病對(duì)全球健康的重大影響。

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[收稿日期] 2024-12-12