蒙古馬兩個類群肌纖維發育表型及基因表達譜比較研究

摘 要：

為探究不同類群蒙古馬肌肉生長差異，本研究對生長環境差異最大、距離最遠的蒙古馬類群（巴爾虎馬、烏審馬）的肌肉表型與肌肉分子層面的差異進行了比較研究。本研究的試驗動物分別是3匹生長在陳巴爾虎旗的巴爾虎馬和3匹生長在烏審旗的烏審馬，均為在野外自由放養采食的健康種公馬。每個類群的平均年齡為5歲，同一類群馬匹體況相近。其中巴爾虎馬宰前活重為（303.10±14.10） kg、胴體重為（148.29±15.43） kg，烏審馬宰前活重為（287.90±37.5） kg、胴體重為（140.83±5.04） kg。將試驗動物按類群分為2個組，每組3個重復，對所有試驗動物進行屠宰并取其臀中肌，將采集的肌肉樣本石蠟包埋后進行HE和免疫組化染色，對肌纖維面積以及慢肌纖維占比進行統計；同時對所采集的肌肉樣本進行轉錄組測序，測序結果使用DESeq2軟件進行差異基因的篩選，使用David在線軟件對差異表達基因進行GO和KEGG富集分析，最后通過qRT-PCR對測序結果進行驗證。本試驗通過HE染色和免疫組化染色發現，巴爾虎馬臀中肌的肌纖維平均面積為（2 592±180.92）μｍ2，烏審馬臀中肌肌纖維面積為（1 997±73.39） μｍ2，二者差異顯著（Plt;0.05）；巴爾虎馬臀中肌慢肌纖維占比為（10.34±0.59）%，烏審馬臀中肌中慢肌纖維占比為（8.14±0.81）%，二者差異差異不顯著（Pgt;0.05）。本研究在巴爾虎馬和烏審馬的臀中肌中共鑒定出1 103個差異基因，其中有460個上調基因和643個下調基因在烏審馬的臀中肌中表達。研究發現，MYH15、MYOZ2、多個谷氨酸受體基因和多個GABAA型受體基因在巴爾虎馬臀中肌中高表達；MYH6和FOXO1基因在烏審馬臀中肌中高表達。對差異基因進行富集分析發現，GO分析富集到了208個條目，KEGG分析富集到了65個通路，所富集到的條目與通路主要和谷氨酸信號傳導、GABA信號傳導以及肌肉生長發育有關。本試驗對巴爾虎馬和烏審馬的臀中肌進行研究，發現在二者臀中肌肌肉表型方面，巴爾虎馬肌纖維面積顯著大于烏審馬，但慢肌纖維占比差異不顯著；在分子層面二者有較為明顯的差異，這些差異集中在了肌纖維類型、肌纖維面積以及肌肉中肌梭神經信號傳導等方面。

關鍵詞：

巴爾虎馬；烏審馬；肌纖維面積；轉錄組

中圖分類號：

S821.2"""" 文獻標志碼：A """"文章編號： 0366-6964（2025）02-0643-14

收稿日期：2024-05-20

基金項目：國家自然科學基金（U23A20224）；高校基本科研業務費項目-種業振興領軍人才（BR22-11-03）；農牧業廳種業專項（RK2300003651）；內蒙古自治區科學技術廳自治區科技重大專項（2021ZD0018;2020ZD0004; ZD20190039）

作者簡介：胡瀚文（2000-），男，山東棗莊人，碩士生，主要從事動物遺傳育種研究，E-mail： havyn0502@qq.com

*通信作者：白東義，主要從事馬屬動物遺傳育種與繁殖研究，E-mail：baidongyi1983@163.com

Comparative Study on Muscle Fiber Development Phenotype and Gene Expression Profile of Two Mongolian Horse Populations

HU" Hanwen1， BAO" Tugeqin1， REN" Xiujuan1， DING" Wenqi1， GONG" Wendian1， JIA" Zijie1， SHI" Lin1， MA" Muren2， Baorigele3， DUGARJAVIIN" Manglai1， BAI" Dongyi1*

（1.Key Laboratory of Equus Germplasm Innovation of Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Inner Mongolia Key Laboratory of Equine Science Research and Technology Innovation， Equus Research Center， Inner Mongolia Agricultural University， Hohhot 010018，" China;

2.Xilinhot Agricultural and Animal Husbandry Technology Extension Center， Xilinhot 026000，" China;

3.Horqin Left Back Banner Livestock and Fishery Technology Service Center， Horqin 028100，" China）

Abstract：

To investigate the differences in muscle growth among different populations of Mongolian horses， the muscle phenotype and molecular-level differences between the Mongolian horse populations with the most significant environmental differences and the greatest geographical distance（Baerhu horse and Wushen horse） was compared. The experimental animals in this study consisted of 3 Baerhu horses raised in the Chenbaerhu Banner and 3 Wushen horses raised in the Wushen Banner. All horses were healthy stallions， free-range grazing in the wild. The average age of the horses in each population was 5 years， with similar body conditions within each population. The pre-slaughter live weight of the Baerhu horses was （303.10±14.10） kg， and the carcass weight was （148.29±15.43） kg. The pre-slaughter live weight of the Wushen horses was （287.90±37.5） kg， and the carcass weight was （140.83±5.04） kg. The experimental animals were divided into two populations based on their breed， with 3 repetitions per group. All animals were slaughtered， and their gluteus medius muscles were collected. After the muscle samples were embedded in paraffin， HE and immunohistochemistry staining were performed. The muscle fiber area and the proportion of slow-twitch muscle fibers were statistically analyzed. Additionally， transcriptome sequencing was conducted on the collected muscle samples. The sequencing data were analyzed for differentially expressed genes using the DESeq2 software， and GO and KEGG enrichment analyses were performed using the David online tool. Finally，

qRT-PCR was used to validate the sequencing results. In this experiment， HE staining and immunohistochemical staining revealed that the average muscle fiber area of the gluteus medius in Baerhu horses was （2 592±180.92） μm2， while in Wushen horses it was （1 997±73.39） μm2， with a significant difference between the two populations （Plt;0.05）. The proportion of slow-twitch muscle fibers in the gluteus medius of Baerhu horses was （10.34±0.59）%， while in Wushen horses it was （8.14±0.81）%， with no significant difference between the two populations （Pgt;0.05）.This study identified a total of 1 103 differentially expressed genes in the gluteus medius of Baerhu and Wushen horses， with 460 upregulated genes and 643 downregulated genes expressed in the gluteus medius of Wushen horses. The study found that MYH15， MYOZ2， several glutamate receptor genes， and several GABAA receptor genes were highly expressed in the gluteus medius of Baerhu horses， while MYH6 and FOXO1 genes were highly expressed in the gluteus medius of Wushen horses. Enrichment analysis of the differentially expressed genes revealed 208 enriched items in the GO analysis and 65 pathways in the KEGG analysis. These enriched items and pathways were mainly associated with glutamate signaling， GABA signaling， and muscle growth and development. This study investigates the gluteus medius muscle of the Baerhu horse and the Wushen horse， finding that the fiber area of the gluteus medius in Baerhu horses is significantly larger than that in Wushen horses， while the proportion of slow muscle fibers shows no significant difference. At the molecular level， there are notable differences between the two populations， particularly in muscle fiber types， fiber area， and neuromuscular signaling in the muscle spindles.

Key words：

Baerhu horse; Wushen horse；muscle fiber area; transcriptome

*Corresponding author： BAI Dongyi， E-mail：baidongyi1983@163.com

蒙古馬是世界上起源最早的馬種之一［1］，目前蒙古馬分為四大類群（巴爾虎馬、百岔馬、烏審馬和烏珠穆沁馬）。在這四大類群中的巴爾虎馬與烏審馬所生長的地理環境差異最大、地理位置距離最遠，其中巴爾虎馬主要位于內蒙古北部的呼倫貝爾市陳巴爾虎旗、新巴爾虎左旗和新巴爾虎右旗，巴爾虎馬體格較大、體軀粗壯，是蒙古馬中古老而優良的類群；烏審馬主要位于內蒙古南部鄂爾多斯市的烏審旗一帶，烏審馬體小靈活、速度快、性情溫馴，適合沙漠地區騎乘和馱運。由于內蒙古地域遼闊，經緯度的不同導致了這兩個類群蒙古馬生活的環境存在氣候差異，同時兩個地區的地形地貌也有所不同。巴爾虎馬生存環境的氣候寒冷，降水較多，地貌多以肥沃草場為主；烏審馬生存環境的氣候較為溫暖與干旱，地貌多以荒漠為主。環境的差異除了會對馬匹產生直接影響，還會影響當地的牧草種類與牧草中營養物質的含量，從而間接影響馬匹日常的營養攝入。已有多項研究表明［2，3］，動物通過攝入不同的營養物質會對肌肉生長發育產生不同的影響，這些影響包括對肌纖維面積和肌纖維類型之間的轉化。巴爾虎馬與烏審馬在這4個類群中的生存環境差異最大，兩者之間可能存在較大的差異，因此選用巴爾虎馬和烏審馬這兩個蒙古馬類群作為本試驗的研究對象。

馬匹的肌肉性狀不僅會影響食用口感，同時還是影響馬匹運動水平的一個決定性因素。肌肉中的肌纖維類型占比可對肌肉性狀產生重要影響，肌纖維分為慢速氧化型（I型）、快速氧化型（IIａ型）、中間型（IIｘ型）和快速酵解型（IIｂ型）。在慢肌纖維含量占比多的肌肉中有更好的食用口感［4］，同時慢肌纖維中線粒體多、氧化力強、耐疲勞性強，更適合做長距離耐力型運動。蒙古馬是一種耐力水平極強的馬種［1］，為蒙古馬所設立的賽馬比賽也幾乎都是幾十千米的長距離的耐力賽。已有研究表明，適合長途耐力運動的蒙古馬肌肉中比適合短距離爆發運動的純血馬含有更高比例的慢肌纖維［5］，因此蒙古馬肌肉中慢肌纖維占比越高越有利于對其優勢的發揮。此外，肌纖維面積也會影響馬匹的運動性能，多個研究表明，肌纖維面積與肌肉最大力量呈正相關［6-8］。肌肉的最大力量可以使馬匹快速產生爆發力和加速度，同時可以延緩肌肉疲勞、提高身體穩定性，使馬匹能夠在較長時間內保持高質量的運動表現；肌肉力量還可以有效地支撐關節和骨骼，減少馬匹運動損傷的風險。臀中肌是為馬匹后肢提供動力的主要肌肉，同時有研究發現臀中肌可能是影響馬匹運動性能的重要肌肉［5］。因此本研究選擇對馬匹運動性能影響較大的臀中肌作為試驗研究對象，并對臀中肌肌纖維面積和慢肌纖維占比進行統計分析。

目前國內外已經大量使用轉錄組技術對肌肉進行研究，在利用轉錄組技術對馬匹肌肉的研究中發現，MYOM2和MYL1可能參與了蒙古馬肌肉快肌纖維向慢肌纖維的轉化，CACNB1、IDH3A、IDH3B和MYL6等基因可能與蒙古馬慢肌纖維發育有關［9，10］；GYS1、GYS2、GSK3A、AKT1和AKT2等基因與調控伊犁母馬糖原合成的糖原合酶的活性有關［11］。本試驗將利用轉錄組測序對肌肉分子層面的差異進行比較研究，以此來探究蒙古馬不同類群之間在肌肉這一重要經濟性狀所存在的差異，有利于后續對蒙古馬遺傳多樣性的研究。

1 材料與方法

1.1 試驗動物樣品采集

本試驗的研究動物分別是3匹生長在陳巴爾虎旗的巴爾虎馬和3匹生長在烏審旗的烏審馬，均為在野外自由放養采食的種公馬，每個類群的平均年齡為5歲。同一類群馬匹體況相近，其中巴爾虎馬宰前活重為（303.10±14.10） kg、胴體重為（148.29±15.43） kg，烏審馬宰前活重為（287.90±37.5） kg、胴體重為（140.83±5.04） kg。將試驗動物進行屠宰取其臀中肌［12］，將所采集的樣品切割為長約7 cm、直徑約2 cm的肌肉塊，將其裝入50 mL離心管并用4％的多聚甲醛固定24 h后經過乙醇梯度脫水至100%無水乙醇溶液，并于4℃低溫儲存供后續石蠟切片使用；再將所采集的樣品分割為邊長約為0.5 cm的肌肉塊，將其裝入2 mL離心管存放于液氮中，后轉移至-80℃冰箱保存供后續試驗使用。

1.2 石蠟切片

將無水乙醇中肌肉樣本修切成邊長0.5 cm左右的組織塊，二甲苯透明，浸蠟后包埋，再利用切片機（LeicaRM2245）制成厚度為 4 μｍ的組織切片，最后于烘箱中70℃ 烘片30 min，晾干備用。

1.3 HE染色

將肌肉組織切片進行二甲苯脫蠟；梯度酒精水化；蘇木素染細胞核；自來水沖洗返藍；伊紅染細胞質；95％酒精脫伊紅；無水乙醇清洗雜質；最后中性樹膠封片固定。

1.4 免疫組化染色

將組織切片放入二甲苯脫蠟、梯度酒精回水、抗原修復、PBS沖洗，試驗流程依據 UltraSensitiveTMS-P超敏試劑盒說明書制定，加入試劑Ａ（過氧化物酶阻斷液）室溫孵育10 min；PBS沖洗加入試劑B（正常非動物免疫血清）室溫孵育10 min；去掉試劑B，滴加抗肌球蛋白7抗體（兔，稀釋濃度1∶200，Bioss，中國北京），該抗體為第一抗體，與MyHCＩ特異性反應。4℃孵育過夜；PBS沖洗加入試劑C（第二抗體）室溫孵育10 min；PBS沖洗加入試劑D（鏈霉菌抗生物素過氧化物酶）室溫孵育10 min；PBS沖洗加入DAB染色；蘇木素染細胞核；自來水沖洗返藍；無水乙醇清洗雜質；中性樹膠封片固定。

1.5 肌纖維表型信息統計

將6匹馬的臀中肌染色切片用顯微鏡放大400倍（目鏡10×，物鏡40×）進行觀察，并將每匹馬的染色切片截取5個視野進行后續分析。利用image pro和imagej圖像處理軟件對肌纖維個數與肌纖維面積進行統計。

1.6 RNA測序

將6匹蒙古馬臀中肌肌肉樣品使用Trizol試劑（Invitrogen，加利福尼亞州，美國）和動物組織RNA純化試劑盒TRK1002（LCSience，得克薩斯州休斯敦市，美國）提取總RNA，使用Agilent 2100生物分析儀和Agilent RNA6000納米試劑盒（Agilent，加利福尼亞州，美國）對RNA的數量和質量進行分析，然后使用mRNA-Seq樣品制備試劑盒（Illumina，加利福尼亞州圣地亞哥市，美國）生成測序文庫。文庫在Illumina Hiseq 4000平臺上測序，生成2×150 bp的配對端reads。

1.7 測序數據分析

使用FastQC（https：//www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/）對測序數據進行質控；使用HISAT2（version 2.0.5）軟件將質控后的reads比對到參考基因組（Equcab3.0，ftp：//ftp.ncbi.nlm.nih.gov/genomes/all/GCF/002/863/925/GCF_002863925.1_EquCab3.0）；使用stringtie構建蒙古馬肌肉樣本表達譜；將標準設定為P adjlt;0.05且|log2 （Fold Change）|≥1，并用DESeq2軟件進行差異基因篩選；最后使用David（https：//david.ncifcrf.gov/）在線軟件對差異表達基因進行GO和KEGG富集分析。

1.8 實時熒光定量PCR驗證

本試驗選擇GAPDH作為內參基因［13-15］，隨機選取6個差異基因于上海生工生物工程公司合成引物（表1）。用Trizol提取本試驗所采集的臀中肌肌肉樣本中總RNA，經酶標儀檢測濃度較高且OD值在1.8～2.0之間的RNA用于后續試驗。根據PrimeScriptTMRT Master Mix反轉錄試劑盒（TaKaRa，中國）說明書進行反轉錄，合成cDNA。再使用TB Green Premix Ex TaqTM II定量試劑盒（TaKaRa，中國）進行后續qRT-PCR驗證，反應體體系總體積為20μL：TB Green Premix Ex Taq Ⅱ為10 μL，ROX Reference DyeⅡ為0.4 μL，上、下游引物（10 μmol·L-1）各0.8 μL，cDNA為2.0 μL和6.0 μL的ddH2O 。每個樣品重復3次，95℃預變性30 s；95℃變性5 s，60℃退火30 s，42個循環；熔解曲線60℃進行1 min， 95℃進行15s，每5s增加0.5℃熔解曲線。結果采用2-ΔΔCt定量分析方法進行表達量分析。

1.9 統計分析

本試驗對肌纖維表型的統計分析主要涉及到了標準誤與P值的計算。通過計算每個樣本平均值的標準差得到標準誤，標準誤數值越小樣本數據越能代表總體數據；通過獨立雙樣本T檢驗得到兩組數據之間的P值，Plt;0.05即可推斷兩組數據差異顯著。

本試驗首先將得到的肌纖維表型數據結果進行整理，通過計算每匹馬的平均肌纖維表型數據，得到同一類群馬匹的平均肌纖維表型數據，利用GraphPad Prism軟件計算同一類群肌纖維表型數據的標準誤，同時利用GraphPad Prism軟件對得到的肌纖維表型數據平均值進行T檢驗，得到P值。

2 結 果

2.1 肌肉表型差異

本試驗通過HE染色對肌纖維面積進行統計（圖1），發現巴爾虎馬臀中肌的肌纖維平均面積為（2 592±180.92）μｍ2，烏審馬臀中肌肌纖維面積為（1 997±73.39） μｍ2（表2），二者差異顯著（Plt;0.05）。同時本試驗通過免疫組化染色對慢肌纖維占比進行統計（圖2），發現巴爾虎馬臀中肌慢肌纖維占比為（10.34±0.59）%，烏審馬臀中肌中慢肌纖維占比為（8.14±0.81）%，巴爾虎馬臀中肌中的慢肌纖維較多，但與烏審馬相比差異不顯著（Pgt;0.05，表2）。

2.2 差異基因的表達與鑒定

本研究在巴爾虎馬和烏審馬的臀中肌中共鑒定出1 103個差異基因，其中有460個上調基因和643個下調基因在烏審馬的臀中肌中表達（圖3）。在這些鑒定出來的差異基因中包括與肌纖維生長發育有關的MYH6、MYH15、MYOZ2和FOXO1等基因，和多個與神經傳導有關的基因，其中包括多個可以編碼谷氨酸離子型受體和代謝型受體的基因，如GRIA、GRIK、GRIN、GRID和GRM相關基因，還包含多個GABAA型受體基因，包括GABRA、GABRB、GABRG和GABRR等基因。通過分層聚類圖（圖4）可以發現MYH15、MYOZ2、多個谷氨酸受體基因和多個GABAA型受體基因在巴爾虎馬臀中肌中高表達，MYH6和FOXO1基因在烏審馬臀中肌中高表達。

2.3 差異基因的GO富集分析

差異基因的GO分析共富集到了208個條目，包括110個生物過程（biological process，BP）條目，44個細胞組分（cellular component，CC）條目和54個分子功能（molecular function，MF）條目。其中BP主要富集到了突觸傳遞，谷氨酸能途徑（synaptic transmission， glutamatergic）、γ-氨基丁酸信號傳遞途徑（gamma-aminobutyric acid signaling pathway）和突觸組織（synapse organization）等。CC主要富集到了谷氨酸能突觸（glutamatergic synapse）、GABA-A 受體復合物（GABA-A receptor complex）和肌動蛋白復合物（myosin complex）等。MF主要富集到了谷氨酸受體活性（glutamate receptor activity）、GABA-A受體活性（GABA-A receptor activity）、鈣離子結合（caicium ion binding）和肌動蛋白結合（actin binding）等（圖5）。在GO富集到的這些條目中，少量的富集到了與肌肉發育相關的條目，大量富集到了與神經傳導相關的條目，以上這些所富集到的條目與所鑒定到的部分差異基因結果趨勢相符。

2.4 差異基因的KEGG富集分析

差異基因的KEGG分析共富集到了65個通路，其中主要富集到了尼古丁成癮（nicotine addiction）、谷氨酸能突觸（glutamatergic synapse）、PI3K-Akt信號通路（PI3K-Akt signaling pathway）、馬達蛋白（motor proteins）、GABA能突觸（GABAergic synapse）和mTOR信號通路（mTOR signaling pathway）等與肌肉發育或神經傳導相關的通路（圖6），其中差異最顯著的尼古丁成癮通路中包含了大量編碼谷氨酸受體以及GABAA型受體的基因。KEGG分析結果也進一步證實了巴爾虎馬與烏審馬臀中肌之間的主要差異包括由谷氨酸受體基因和GABAA型受體基因所造成的肌肉神經信號傳導方面的差異。

2.5 實時熒光定量PCR驗證

為了驗證RNA-Seq的結果是否準確，以GAPDH為內參基因，隨機選取6個差異基因（IVD、PEAR1、MYH6、NYAP2、SYT4和CALML5）進行qRT-PCR驗證。qRT-PCR結果與RNA-Seq的表達趨勢一致，表明RNA-Seq數據可靠（圖7）。

3 討 論

3.1 巴爾虎馬與烏審馬臀中肌肌纖維表型差異

通過HE染色和慢肌纖維免疫組化染色發現，巴爾虎馬與烏審馬的臀中肌肌纖維表型的主要差異體現在肌纖維面積方面，巴爾虎馬臀中肌肌纖維面積顯著大于烏審馬，同時二者臀中肌中的慢肌纖維占比差異不顯著。因此只從肌纖維對運動性能的影響考慮，推測二者耐力運動水平相當，但由于肌纖維面積的差異，巴爾虎馬可能擁有更強的肌肉力量與爆發力，同時運動受傷風險也相對較小。肌纖維面積與動物品種、營養狀況和生存環境有關，在本研究中的巴爾虎馬長期生長在有肥沃草場、牧草種類豐富、營養價值高的陳巴爾虎旗［16］，而烏審馬所在的烏審旗的地貌多為草原化荒漠，牧草資源相對匱乏［17］，烏審馬日常所能獲得的營養物質種類和水平可能低于巴爾虎馬，同時動物所攝取到的營養物質水平越高越能促進動物骨骼肌肌纖維肥大［18，19］。因此推測，環境的差異導致二者所能攝取到的營養物質的種類與水平不同是導致二者臀中肌中肌纖維面積存在顯著差異的可能原因之一。

3.2 影響巴爾虎馬與烏審馬臀中肌肌肉生長發育和肌纖維面積相關的差異基因

在鑒定出來的差異基因中，MYOZ2是巴爾虎馬臀中肌中顯著上調的基因，是骨骼肌Z線組成的結構蛋白［20］。多個研究表明，MYOZ2的表達量與肌肉的生長發育密切相關［21，22］，相較于胎兒期，成年期蒙古馬肌肉中MYOZ2基因高表達［23］，還有研究發現成年動物中MYOZ2基因在骨骼肌的慢肌纖維中特異性表達［24］。在本試驗中，雖然二者在慢肌纖維占比方面差異不顯著，但MYOZ2基因的表達趨勢與表型結果相符。

差異基因分析發現，FOXO1基因在烏審馬臀中肌中高表達，FOXO1基因可以對肌纖維類型的轉化產生直接的影響，會減少肌肉中的慢肌纖維數量［25］。在骨骼肌中特異性過表達FOXO1的轉基因小鼠中，小鼠體重變輕，骨骼肌質量減少，慢肌纖維相關基因表達下調［26］，以上研究結果與本試驗表型結果的趨勢相符。除了對肌纖維類型的影響外，FOXO1基因主要參與了骨骼肌萎縮［27］，FOXO1基因的過度表達會導致肌纖維面積減少［28］，抑制小鼠肌肉中FOXO1的表達可以有效阻止肌纖維面積的減少，并且可以起到延緩肌少癥發生的作用［29］。本研究中，在FOXO1上調的烏審馬臀中肌中的肌纖維面積顯著小于巴爾虎馬，本研究結果與以往研究相符。

肌球蛋白重鏈（myosin heavy chain，MyHC）是構成肌肉中肌球蛋白分子的一部分，在哺乳動物中，已有11個基因可以編碼MyHC，并且這些基因在進化過程中高度保守［30］。MyHC有4種亞型，即I、IIa、IIx和IIb，MyHC的4種亞型分別代表著4種不同類型的肌纖維，由不同的MyHC組成的肌肉具有不同的收縮能力和ATP酶活性，其中MyHCI型在慢肌纖維中高表達［31］。本研究鑒定到的差異基因MYH6在烏審馬臀中肌中顯著上調表達，MYH6是作為編碼MyHCI重鏈的一個亞基的基因，并且與MyHCI的表達之間成負相關［32］，因此理論上當MYH6的表達水平升高時會抑制MyHCI的表達，而MyHCI表達被抑制則可以推斷肌肉中的慢肌纖維含量較少。同時在對兔骨骼肌的研究中發現，MYH6的表達量與肌纖維面積成負相關［33，34］，這些研究與本試驗的研究結果一致。

差異基因分析還發現，多個γ-氨基丁酸A型受體（gamma-aminobutyric acid type A，GABAA）基因在巴爾虎馬臀中肌中顯著上調，GABAA型受體是一類通過配體門控的離子通道，參與了神經突觸的快速信息傳遞，這也是本研究富集到了多個與神經信號傳導相關通路的主要原因之一。γ-氨基丁酸（gamma-aminobutyric acid，GABA）是一種抑制性神經遞質，GABA可與GABAA型受體結合，產生神經抑制或興奮。GABA還是一種小分子量的非蛋白型氨基酸，具有食用安全性［35］，可添加于食品中通過外源攝入讓肌肉通過GABAA受體接收到更多GABA信號，而有研究表明通過外源攝入的GABA可以增加肌纖維面積［36］。同時有試驗發現，GABA可以促進生長激素（growth hormone，GH）的釋放［37］，當GH作用到肝臟的時候，肝臟會分泌胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor-1，IGF1），進而通過IGF-1/PI3K/AKT信號通路影響mTOR信號通路，而這兩個通路均在本研究中被富集。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mechanistic target of rapamycin，mTOR）是一種保守的蛋白激酶， 在骨骼肌肥大中起至關重要的作用，mTOR可調控下游核糖體蛋白p70s6k和真核翻譯起始因子4E結合蛋白1 （4e-binding protein1，4E-BP1） ， 進而促進蛋白質合成和骨骼肌肥大［38］。

有試驗用不同濃度GABA飼喂小鼠，發現肌肉中GABAA型受體的基因表達量也有所增加［39］。由此推測，哺乳動物通過外源攝入GABA可以增加肌肉中GABAA型受體基因的含量，進而可以接收更多的外源性GABA信號，形成正向循環。巴爾虎馬的生長地屬于高緯度的寒冷地帶，已經有研究發現低溫可以增加植物體內GABA含量［40-43］，推測巴爾虎馬生長地的植物可能會含有較多的GABA。因此本研究初步猜測可能由于環境溫度差異導致巴爾虎馬進食了富含較多GABA的植物導致肌肉中GABAA型受體基因含量增加，并進一步增大了巴爾虎馬臀中肌的肌纖維面積。

3.3 影響巴爾虎馬與烏審馬臀中肌肌梭信號傳導相關的差異基因

MYH15是MYH6的旁系同源物，參與肌動蛋白結合和細胞骨架運動活性，在本研究中MYH15在巴爾虎馬臀中肌中顯著上調表達。MYH15除了作為肌球蛋白重鏈會直接對肌肉產生影響外［44］，還有研究發現MYH15在肌梭中有所表達［45］。MYH15對肌梭有重要影響，肌梭的肌球蛋白表達譜在整個肌梭中區域性變化，并且亞型變化影響肌球蛋白-肌動蛋白跨橋動力學［46，47］。肌梭是哺乳動物體內最重要的本體感受器，可以根據肌肉受到的拉伸與收縮激活相關機械力門控離子通道，將機械力信號轉變為電信號，并傳遞至中樞神經系統，影響肌肉的后續活動。一個典型的肌梭由梭內纖維、梭囊、感覺神經纖維末梢和運動神經纖維末梢組成。在梭內纖維方面，根據形態和表達的MyHC亞型的不同可分為核袋纖維1（nuclear bag 1 fiber）、核袋纖維2 （nuclear bag 2 fiber）和核鏈纖維（nuclear chain fiber）［48］。由于不同的梭內纖維表達的MyHC亞型不同，因此初步推測二者肌梭中不同類型的梭內纖維數量與比例存在差異，同時二者梭內纖維的差異可能是影響本試驗中MYH15與MYH6基因的表達量出現差異的因素之一。

在感覺神經方面，肌梭中感覺神經的信號傳導與谷氨酸有較大聯系。谷氨酸可通過激活兩類受體來發揮作用，兩類受體分別為代謝型谷氨酸受體（metatropic glutamate receptors，mGluRs）和離子型谷氨酸受體（iontropic glutamate receptors，iGluRs）［49］。在富集分析中發現，大量的差異基因富集到了一系列谷氨酸受體相關信號通路，在差異基因分析結果中，絕大多數的谷氨酸受體的相關基因在巴爾虎馬臀中肌中上調表達。

肌梭中感覺神經末梢有大量突觸小泡，這些突觸小泡可以分泌代謝型谷氨酸［50］。代謝型谷氨酸受體可進一步分為Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ組。其中I組的代謝型谷氨酸受體（可被差異基因GRM1編碼）主要定位于突觸后膜，可通過與Gq蛋白偶聯增強細胞內Ca2+的釋放［51］，在本試驗GO分析的結果中富集到差異基因數目最多的條目為鈣離子結合。同時I組代謝型谷氨酸受體可以激活其他效應蛋白，其中包括mTOR信號通路［52］，mTOR信號通路在本試驗KEGG分析中被顯著富集，已有多個研究表明mTOR可以通過激活下游因子促進肌纖維肥大［38，53］，這些報道與本研究結果相符。離子型谷氨酸受體分為4個亞型：離子型谷氨酸受體包括N-甲基-D-天冬氨酸受體（n-methyl-d-aspartate receptor，NMDAR）、α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑烯丙酸受體（alpha-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid receptor，AMPAR）、海人藻酸受體（kainate receptor， KAR）和δ受體［52］，這些受體可分為NMDA受體和非NMDA受體，在本研究的差異基因中均包含可以編碼這4個亞型的基因。谷氨酸NMDA受體（可被差異基因GRIN2A和GRIN2B編碼）活性主要與Ca2+內流相關，同時可以抑制FOXO1基因的表達［54］。以上內容與試驗結果一致，并且也說明谷氨酸受體可能會間接通過影響mTOR信號通路與FOXO1基因對肌纖維面積產生影響。

離子型谷氨酸KA受體家族的5種亞基GluK1～GluK5分別由GRIK1～GRIK5基因編碼［55］，本試驗中這5個基因均為顯著差異基因。在對秀麗隱桿線蟲的研究中發現了第一個可以感應寒冷溫度的受體蛋白GLR-3 ，GLR-3在哺乳動物中對應的是由GRIK2基因編碼的GluK2蛋白。此研究同時發現，GluK2可能為受體型冷傳感器，而非冷激活通道，同時發現GluK2可能會感覺到小鼠背根神經節神經元中的低溫［56］，而背根神經節神經元是感覺傳導初級神經元，與肌梭中感覺神經元有重要聯系。另一項研究發現，在低溫脅迫下，過表達南極獨角雪冰魚和尼羅羅非魚基因GRIK1均能通過抑制凋亡重要轉錄因子的表達而減少因低溫脅迫誘導的細胞凋亡，同時由于兩種魚類的生存溫度差異較大，此試驗猜測GRIK1在南極魚中有更多的拷貝數或者表達量更高［57］。因此本試驗推測，由于巴爾虎馬長期生長在寒冷的高緯度地區，二者生長地環境溫度的不同導致谷氨酸KA受體基因出現了差異。

同時試驗發現，差異基因SLC17A6與SLC17A8在巴爾虎馬臀中肌中上調，這兩個基因分別編碼囊泡谷氨酸轉運蛋白2（vesicular glutamate transporter 2，VGLUT2）和囊泡谷氨酸轉運蛋白3（vesicular glutamate transporter 3，VGLUT3），神經遞質谷氨酸可以通過這些蛋白轉運到突觸小泡中，然后再釋放到突觸間隙進行信號傳導［58］。在脊椎動物的肌肉中，位于神經肌肉接頭處參與信號傳導的因子主要為乙酰膽堿（acetylcholine，ACh），因此在肌肉中谷氨酸受體的存在位置多為肌梭的感覺神經末梢處。已有研究發現，肌梭所造成的牽張反射可以增強肌肉力量［59］，同時還有研究發現興奮后的肌梭主要通過肌梭內的Iα傳入神經纖維與α運動神經元提高機體的神經募集運動單位的能力［60，61］，而運動單位所能被募集的數量與肌肉力量成正相關［62］。本研究推測，巴爾虎馬臀中肌中可能有更多參與肌梭信號傳導的谷氨酸受體基因，也因此巴爾虎馬臀中肌中的肌梭可能更多或更活躍，進而導致巴爾虎馬相較于烏審馬會有更大的肌肉力量，同時能表現出更好的運動控制與運動表現。

4 結 論

本研究對生長環境差異最大、距離最遠的兩個蒙古馬類群（巴爾虎馬、烏審馬）的臀中肌進行肌肉表型與肌肉轉錄組的研究發現，巴爾虎馬臀中肌肌纖維面積顯著大于烏審馬，但二者慢肌纖維占比差異不顯著。差異基因分析的結果表明，MYH6、FOXO1、GABAA型受體基因和谷氨酸受體基因可能對蒙古馬的肌纖維面積產生影響，其中GABAA型受體基因和部分谷氨酸受體基因可以間接通過影響mTOR信號通路與FOXO1基因對肌纖維面積產生影響。同時研究還發現，影響肌梭中梭內纖維的MYH15與影響肌梭中感覺神經纖維信號傳導的多個谷氨酸受體基因的表達量在本試驗中差異顯著，推測巴爾虎馬和烏審馬臀中肌肌梭之間存在差異。本試驗結果有助于加強蒙古馬在重要經濟性狀方面的選育工作，同時推動了對蒙古馬遺傳多樣性的進一步研究。

參考文獻（References）：

［1］ 杜 明，李 蓓，白東義，等.內蒙古農業大學馬屬動物研究中心科研進展［J］.內蒙古農業大學學報：自然科學版，2022， 43（5）： 1-15.

DU M，LI B，BAI D Y，et al.A review of the research work of equine research center of inner Mongolia Agricutural University［J］. Journal of Inner Mongolia Agricultural University：Natural Science Edition，2022，43（5）：1-15.（in Chinese）

［2］ 梁婷玉，吳建平，劉 婷，等.肌纖維類型分類及轉化機理研究進展［J］.肉類研究，2018，32（9）：55-61.

LIANG T Y，WU J P，LIU T，et al.Recent progress in classification and transformation mechanism of muscle fiber types［J］.Meat Research，2018，32（9）：55-61.（in Chinese）

［3］ 歐秀瓊，李 星.豬肌肉肌纖維生長發育與類型轉化及營養調控［J］.上海農業學報，2019，35（5）：149-154.

OU X Q，LI X.Growth，development and type transformation of muscle fiber in pigs and its nutrition regulation［J］.Acta Agriculturae Shanghai，2019，35（5）：149-154.（in Chinese）

［4］ 侯任達，張 潤，侯欣華，等.畜禽肌纖維發育規律及相關基因研究進展［J］.畜牧獸醫學報，2022，53（10）：3279-3286.

HOU R D，ZHANG R，HOU X H，et al.Research progress on the pattern of muscle fiber development and related genes in livestock and poultry［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2022，53（10）：3279-3286.（in Chinese）

［5］ 賈紫潔，圖格琴，丁文淇，等.蒙古馬全身主要骨骼肌表型譜的構建及比較研究［J］.畜牧獸醫學報，2023，54（2）：596-607.

JIA Z J，BAO T，DING W Q，et al.Construction and comparative study of the phenotypic spectrum of the main skeletal muscles throughout the mongolian horse［J］.Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2023，54（2）：596-607.（in Chinese）

［6］ 董文芳.A型肉毒毒素注射劑量與骨骼肌形態及收縮力量效關系的動物實驗研究［D］.北京：北京協和醫學院，2019.

DONG W F.Experimental study of dose-response relationship between botulinum toxin type A injecting dose and skeletal muscular morphology and strength change［D］.Beijing：Peking Union Medical College，2019.（in Chinese）

［7］ ANDERSEN J L，AAGAARD P.Effects of strength training on muscle fiber types and size;consequences for athletes training for high-intensity sport［J］.Scand J Med Sci Sports，2010，20 Suppl 2：32-38.

［8］ 王鵬程.沼澤型水牛與廣西本地黃牛背最長肌生理生化指標及差異表達基因研究［D］.南寧：廣西大學，2018.

WANG P C.Physiological biochemical indexes and expression differences of longissimus muscle in swamp buffalo and native cattle［D］.Nanning：Guangxi University，2018.（in Chinese）

［9］ 賈紫潔.蒙古馬全身主要骨骼肌表型及相關基因研究［D］.呼和浩特：內蒙古農業大學，2023.

JIA Z J.Study on the phenotype of major skeletal muscle and related gene in Mongolian horses［D］.Hohhot：Inner Mongolia Agricultural University，2023.（in Chinese）

［10］ 圖格琴.蒙古馬骨骼肌纖維類型及其耐力訓練適應性轉化的分子機制研究［D］.呼和浩特：內蒙古農業大學，2023.

BOU T.Study on the molecular mechanism of muscle fiber type and adaptive transition of endurance training in skeletal muscles of Mongolian horses［D］.Hohhot：Inner Mongolia Agricultural University，2023.（in Chinese）

［11］ 錢書蔓.基于轉錄組和代謝組學研究伊犁母馬不同組織糖原合成分子機制［D］.烏魯木齊：新疆農業大學，2023.

QIAN S M.Molecular mechanisms of glycogen synthesis in different tissues of Yili mares based on transcriptome and metabolomics［D］. Urumqi：Xinjiang Agricultural University，2023.（in Chinese）

［12］ DINGBOOM E G，DIJKSTRA G，ENZERINK E，et al.Postnatal muscle fibre composition of the gluteus medius muscle of Dutch Warmblood foals;maturation and the influence of exercise［J］.Equine Vet J Suppl，1999，31（S31）：95-100.

［13］ ALEMAN M，NIETO J E.Gene expression of proteolytic systems and growth regulators of skeletal muscle in horses with myopathy associated with pituitary pars intermedia dysfunction［J］.Am J Vet Res，2010，71（6）：664-670.

［14］ EIVERS S S，MCGIVNEY B A，GU J，et al.PGC-1α encoded by the PPARGC1A gene regulates oxidative energy metabolism in equine skeletal muscle during exercise［J］.Anim Genet，2012，43（2）：153-162.

［15］ BAO T，HAN H，LI B，et al.The distinct transcriptomes of fast-twitch and slow-twitch muscles in Mongolian horses［J］.Comp Biochem Physiol Part D：Genomics Proteomics，2020，33：100649.

［16］ 楊 蕊.內蒙古主要飼草產品的品質比較分析［D］.呼和浩特：內蒙古農業大學，2023.

YANG R.Comparative analysis on the quality of main forage products in Inner Mongolia［D］.Hohhot：Inner Mongolia Agricultural University，2023.（in Chinese）

［17］ 馬丹陽.草場流轉與草原畜牧業適度規模經營研究——以內蒙古四個牧業旗縣為例［D］.呼和浩特：內蒙古大學，2023.

MA D Y.Research on grassland rental and moderate scale management of grassland animal husbandry：a case study of four animal husbandry counties in Inner Mongolia［D］.Hohhot：Inner Mongolia University，2023.（in Chinese）

［18］ 趙雷云.飼糧營養水平對薩湖F1代羔羊生產性能和肌纖維特性及肌肉發育相關基因表達的影響［D］.楊凌：西北農林科技大學，2021.

ZHAO L Y.Effects of dietary nutrition levels on the production performance，muscle fiber characteristics and muscle development related gene expression of suffolk x Hu F1 lambs［D］.Yangling：Northwest Aamp;F University，2021.（in Chinese）

［19］ 曹 妍.伊犁鵝早期生長發育規律及腿肌mRNA表達譜的研究［D］.烏魯木齊：新疆農業大學，2022.

CAO Y.Study on early growth and development and mRNA expression profile of leg muscle of Yili geese［D］.Urumqi：Xinjiang Agricultural University，2022.（in Chinese）

［20］ 蘇強強.綿羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆及在涼山半細毛羊組織的時空表達［D］.雅安：四川農業大學，2011.

SU Q Q.Cloning of MYOZ2、MYOZ3 gene in Ovine and tissues with time expression in Liangshan semi-fine wool sheep［D］. Yaan： Sichuan Agricultural University，2011.（in Chinese）

［21］ 王 孜，陳楚雯，侯紹云，等.瀘寧雞MYOZ2基因的分子特征及其在不同日齡腿肌中的表達［J］.西南民族大學學報：自然科學版，2024，50（3）：276-282.

WANG Z，CHEN C W，HOU S Y，et al.Molecular characteristics of MYOZ2 gene and its expression in leg muscles of Luning chickens at different ages［J］.Journal of Southwest Minzu University：Natural Science Edition，2024，50（3）：276-282.（in Chinese）

［22］ 嚴 丹，吳義景，王志秀，等.MYOZ2調控鴨肌肉生長的功能研究［J］.中國家禽，2022，44（5）：19-24.

YAN D，WU Y J，WANG Z X，et al.Function study of MYOZ2 in regulating muscle growth in duck［J］.China Poultry，2022，44（5）： 19-24.（in Chinese）

［23］ 丁文淇，圖格琴，任秀娟，等.胎兒期與成年期蒙古馬骨骼肌肌纖維類型轉化研究［J］.畜牧獸醫學報，2022，53（1）：88-99.

DING W Q，BAO T，REN X J，et al.Study on muscle fiber type transformation of Mongolian horse during fetal and adult period［J］. Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica，2022，53（1）：88-99.（in Chinese）

［24］ HSU C P，MOGHADASZADEH B，HARTWIG J H，et al.Sarcomeric and nonmuscle α-actinin isoforms exhibit differential dynamics at skeletal muscle Z-lines［J］.Cytoskeleton，2018，75（5）：213-228.

［25］ KOSMAS K，MICHAEL Z，PAPATHANASIOU A E，et al.Skeletal muscle dysfunction in experimental pulmonary hypertension［J］. Int J Mol Sci，2022，23（18）：10912.

［26］ HITACHI K，KIYOFUJI Y，YAMAGUCHI H，et al.Simultaneous loss of skeletal muscle myosin heavy chain IIx and IIb causes severe skeletal muscle hypoplasia in postnatal mice［J］.FASEB J，2023，37（1）：e22692.

［27］ CALISSI G，LAM E W F，LINK W.Therapeutic strategies targeting FOXO transcription factors［J］.Nat Rev Drug Discov，2021， 20（1）：21-38.

［28］ JI L L，YEO D.Mitochondrial dysregulation and muscle disuse atrophy［J］.F1000Res，2019，8：F1000 Faculty Rev-1621.

［29］ OKAMURA T，HASHIMOTO Y，OSAKA T，et al.The sodium-glucose cotransporter 2 inhibitor luseogliflozin can suppress muscle atrophy in Db/Db mice by suppressing the expression of foxo1［J］.J Clin Biochem Nutr，2019，65（1）：23-28.

［30］ SCHIAFFINO S，REGGIANI C.Fiber types in mammalian skeletal muscles［J］.Physiol Rev，2011，91（4）：1447-1531.

［31］ EBARB S M，PHELPS K J，DROUILLARD J S，et al.Effects of anabolic implants and ractopamine-HCl on muscle fiber morphometrics，collagen solubility，and tenderness of beef longissimus lumborum steaks［J］.J Anim Sci，2017，95（3）：1219-1231.

［32］ SCHEFFLER T L，LEITNER M B，WRIGHT S A.Technical note：protocol for electrophoretic separation of bovine myosin heavy chain isoforms and comparison to immunohistochemistry analysis［J］.J Anim Sci，2018，96（10）：4306-4312.

［33］ 穆 琳，王文洲，趙博昊，等.福建黃兔肌纖維性狀及Myh6基因表達水平分析［J］.浙江大學學報：農業與生命科學版，2017， 43（3）：365-370.

MU L，WANG W Z，ZHAO B H，et al.Analysis of muscle fiber traits and Myh6 gene expression level in Fujian yellow rabbit［J］. Journal of Zhejiang University：Agriculture amp; Life Sciences，2017，43（3）：365-370.（in Chinese）

［34］ 胡帥帥，王文洲，閆曉榮，等.新西蘭白兔中Myh6基因的表達及與肌纖維性狀的相關性［J］.華南農業大學學報，2017，38（2）：12-17.

HU S S，WANG W Z，YAN X R，et al.Myh6 gene expression and its correlation with muscle fiber traits of New Zealand white rabbits［J］.Journal of South China Agricultural University，2017，38（2）：12-17.（in Chinese）

［35］ 李海峰，李冰冰，石碩碩，等.γ-氨基丁酸在食品中的應用研究進展［J］.河南工業大學學報：自然科學版，2023，44（1）：117-125.

LI H F，LI B B，SHI S S，et al.Research progress on the application of γ-aminobutyric acid in food［J］.Journal of Henan University of Technology：Natural Science Edition，2023，44（1）：117-125.（in Chinese）

［36］ SAKASHITA M，NAKAMURA U，HORIE N，et al.Oral supplementation using gamma-aminobutyric acid and whey protein improves whole body fat-free mass in men after resistance training［J］.J Clin Med Res，2019，11（6）：428-434.

［37］ ATHAPATHTHU A M G K，MOLAGODA I M N，JAYASOORIYA R G P T，et al.Gamma-aminobutyric acid （GABA） promotes growth in zebrafish larvae by Inducing IGF-1 expression via GABAA and GABAB receptors［J］.Int J Mol Sci，2021，22（20）：11254.

［38］ LIANG R，SHEN X P，WANG F，et al.H19X-encoded miR-322（424）/miR-503 regulates muscle mass by targeting translation initiation factors［J］.J Cachexia Sarcopenia Muscle，2021，12（6）：2174-2186.

［39］ 王語涵.γ-氨基丁酸對肌肉生長發育的調控作用和機制研究［D］.重慶：西南大學，2023.

WANG Y H.Regulation and mechanism of gamma-aminobutyric acid on muscle growth and development［D］.Chongqing：Southwest University，2023.（in Chinese）

［40］ MALEKZADEH P，KHARA J，HEYDARI R.Alleviating effects of exogenous Gamma-aminobutiric acid on tomato seedling under chilling stress［J］.Physiol Mol Biol Plants，2014，20（1）：133-137.

［41］ YANG R Q，FENG L，WANG S F，et al.Accumulation of γ-aminobutyric acid in soybean by hypoxia germination and freeze-thawing incubation［J］.J Sci Food Agric，2016，96（6）：2090-2096.

［42］ ZHU X J，LIAO J R，XIA X L，et al.Physiological and iTRAQ-based proteomic analyses reveal the function of exogenous γ-aminobutyric acid （GABA） in improving tea plant （Camellia sinensis L.） tolerance at cold temperature［J］.BMC Plant Biol，2019， 19（1）：43.

［43］ TOUBIANA D，SADE N，LIU L F，et al.Correlation-based network analysis combined with machine learning techniques highlight the role of the GABA shunt in Brachypodium sylvaticum freezing tolerance［J］.Sci Rep，2020，10（1）：4489.

［44］ ZHANG Z R，DU H R，YANG C W，et al.Comparative transcriptome analysis reveals regulators mediating breast muscle growth and development in three chicken breeds［J］.Anim Biotechnol，2019，30（3）：233-241.

［45］ ROSSI A C，MAMMUCARI C，ARGENTINI C，et al.Two novel/ancient myosins in mammalian skeletal muscles：MYH14/7b and MYH15 are expressed in extraocular muscles and muscle spindles［J］.J Physiol，2010，588（Pt 2）：353-364.

［46］ LIU J X，ERIKSSON P O，THORNELL L E，et al.Fiber content and myosin heavy chain composition of muscle spindles in aged human biceps brachii［J］.J Histochem Cytochem，2005，53（4）：445-454.

［47］ NICHOLS T R，COPE T C.Cross-bridge mechanisms underlying the history-dependent properties of muscle spindles and stretch reflexes［J］.Can J Physiol Pharmacol，2004，82（8-9）：569-576.

［48］ 連文璽，饒家聲，郝柳芳，等.肌梭形態研究進展［J］.生理學報，2022，74（6）：1039-1047.

LIAN W X，RAO J S，HAO L F，et al.Research progress on muscle spindle morphology［J］.Acta Physiologica Sinica，2022，74（6）： 1039-1047.（in Chinese）

［49］ REINER A，LEVITZ J.Glutamatergic signaling in the central nervous system：ionotropic and metabotropic receptors in concert［J］. Neuron，2018，98（6）：1080-1098.

［50］ 洪 劍，連苡涵，王海利.肌梭中機械力離子通道及其信號傳遞機制研究進展［J］.軍事醫學，2023，47（5）：395-400.

HONG J，LIAN Y H，WANG H L.Advances in mechanosensitive ion channels and possible mechanisms of mechanical signal transmission［J］.Military Medical Sciences，2023，47（5）：395-400.（in Chinese）

［51］ MARKS C R，SHONESY B C，WANG X，et al.Activated CaMKIIα binds to the mGlu5 metabotropic glutamate receptor and modulates calcium mobilization［J］.Mol Pharmacol，2018，94（6）：1352-1362.

［52］ NISWENDER C M，CONN P J.Metabotropic glutamate receptors：physiology，pharmacology，and disease［J］.Annu Rev Pharmacol Toxicol，2010，50：295-322.

［53］ 李 爽，付玉瑩，佟慧麗，等.GRP94通過PI3K/AKT/mTOR信號通路促進牛肌肉衛星細胞分化［J］.中國獸醫學報，2023，43（10）：2101-2108.

LI S，FU Y Y，TONG H L，et al.GRP94 promotes differentiation of bovine skeletal muscle satellite cells through PI3K/AKT/mTOR signaling pathway［J］.Chinese Journal of Veterinary Science，2023，43（10）：2101-2108.（in Chinese）

［54］ SPRENGEL R.Role of AMPA receptors in synaptic plasticity［J］.Cell Tissue Res，2006，326（2）：447-455.

［55］ 李世超，阮懷珍.Kainate受體參與痛覺調控機制研究進展［J］.神經解剖學雜志，2012，28（1）：85-88.

LI S C，RUAN H Z.Research progress on the mechanism of Kainate receptor involved in pain regulation［J］.Chinese Journal of Neuroanatomy，2012，28（1）：85-88.（in Chinese）

［56］ GONG J K，LIU J Z，RONAN E A，et al.A cold-sensing receptor encoded by a glutamate receptor gene［J］.Cell，2019，178（6）： 1375-1386.

［57］ 張曉雯，張艷杰，李 瑋，等.南極獨角雪冰魚與尼羅羅非魚Grik1基因的克隆及其在低溫脅迫下的作用比較［J］.大連海洋大學學報，2023，38（1）：68-75.

ZHANG X W，ZHANG Y J，LI W，et al.Cloning and function exploration comparison of Grik1 in Antarctic crocodile icefish （Chionodmco hamatus） and Nile tilapia （Oreochromis niloticus） exposed to cold stress［J］.Journal of Dalian Ocean University，2023， 38（1）：68-75.（in Chinese）

［58］ RUEL J，EMERY S，NOUVIAN R，et al.Impairment of SLC17A8 encoding vesicular glutamate transporter-3，VGLUT3，underlies nonsyndromic deafness DFNA25 and inner hair cell dysfunction in 1 mice［J］.Am J Hum Genet，2008，83（2）：278-292.

［59］ 王春暉.快速伸縮復合訓練對青年男子籃球運動員下肢爆發力的影響研究［J］.遼寧體育科技，2022，44（1）：135-140.

WANG C H.Study on the effect of rapid stretching compound training on lower limb explosive force of youth male basketball players［J］.Liaoning Sport Science and Technology，2022，44（1）：135-140.（in Chinese）

［60］ 黃 碩，趙小峰.全身振動訓練對老年肌少癥患者下肢肌力和活動能力的影響［J］.中國康復，2024，39（3）：160-162.

HUANG S，ZHAO X F.Effect of whole body vibration training on lower limb muscle strength and mobility in elderly patients with sarcopenia［J］.Chinese Journal of Rehabilitation，2024，39（3）：160-162.（in Chinese）

［61］ 劉曉冬.振動訓練對男子跳遠運動員下肢爆發力即時影響的研究［D］.北京：北京體育大學，2020.

LIU X D.A study of the acute effect of vibration training on the explosive power of the lower limbs of male long jumpers［D］. Beijing：Beijing Sport University，2020.（in Chinese）

［62］ 陳劍飛.上肢末端釋放訓練對散打運動員直拳爆發力干預效果的研究［D］.上海：上海體育學院，2023.

CHEN J F.Study on the effect of upper limb end ballistic training on the explosive power of Sanda athletes［D］.Shanghai：Shanghai University of Sport，2023.（in Chinese）

（編輯 郭云雁）