高糖環(huán)境通過抑制免疫反應(yīng)基因1的表達(dá)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞促炎性M1型極化

摘要：目的 研究高糖環(huán)境對(duì)巨噬細(xì)胞極化的影響及其潛在分子機(jī)制。方法 將離體培養(yǎng)的RAW264.7細(xì)胞隨機(jī)分為過表達(dá)對(duì)照組（NC-OE組）、免疫反應(yīng)基因1過表達(dá)組（IRG1 OE組）、沉默對(duì)照組（NC-siRNA組）和IRG1沉默組（IRG1 siRNA組），電穿孔進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后再組內(nèi)隨機(jī)分為對(duì)照組（Con組）和高糖組（HG組），60 mmol/L葡萄糖干預(yù)72 h后收集細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性，相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，Western blotting檢測(cè)細(xì)胞中IRG1、iNOS、Arg-1、IL-1β和IL-10蛋白表達(dá)，免疫熒光染色檢測(cè)細(xì)胞中iNOS和Arg-1 蛋白熒光水平，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中IL-1β 和IL-10 蛋白水平。結(jié)果 與對(duì)應(yīng)Con 組相比，HG組IRG1表達(dá)均下降（Plt;0.01），同時(shí)出現(xiàn)較多梭形和多突形細(xì)胞且兩極可見伸展的偽足，iNOS表達(dá)升高（Plt;0.01）、Arg-1表達(dá)下降（Plt;0.05），IL-1β表達(dá)和分泌升高（Plt;0.05）、IL-10分泌下降（Plt;0.01）。轉(zhuǎn)染IRG1過表達(dá)質(zhì)粒后，與對(duì)應(yīng)NC-OE組相比，IRG1 OE組IRG1 水平均升高（Plt;0.01）；高糖環(huán)境下，HG-IRG1 OE組梭形和多突形細(xì)胞明顯減少、iNOS 表達(dá)下降（Plt;0.01）、Arg-1表達(dá)升高（Plt;0.01）、IL-1β表達(dá)和分泌下降（Plt;0.01）、IL-10表達(dá)和分泌升高（Plt;0.05）。IRG1沉默后，與對(duì)應(yīng)NC-siRNA組相比，IRG1 siRNA組IRG1水平降低（Plt;0.01）；高糖環(huán)境下，HG-IRG1 siRNA組多突形細(xì)胞和偽足進(jìn)一步增加、Arg-1表達(dá)降低（Plt;0.01）、IL-10表達(dá)和分泌減少（Plt;0.05）。結(jié)論 高糖環(huán)境誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞促炎性M1型極化進(jìn)而誘發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與抑制巨噬細(xì)胞中IRG1蛋白表達(dá)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞；M1 型極化；炎癥因子；高糖環(huán)境；免疫反應(yīng)基因1

目前全球范圍內(nèi)2型糖尿病（T2DM）發(fā)病率驟增，成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題［1， 2］，而炎癥學(xué)說在T2DM 發(fā)病機(jī)制中的作用受到廣泛關(guān)注［3-5］。高糖高脂膳食可激活先天免疫，進(jìn)而誘導(dǎo)T2DM發(fā)生發(fā)展［6， 7］，且高糖環(huán)境是體內(nèi)T2DM的主要病理特征［8］，因此深入研究高糖環(huán)境下先天免疫細(xì)胞炎癥反應(yīng)及潛在機(jī)制對(duì)于T2DM病理機(jī)制研究及相關(guān)藥物研發(fā)具有重要意義。……