雷帕霉素對光誘導下視網膜色素上皮細胞自噬的影響

師若迪，徐 晨，俞 洋

（寧夏醫科大學中醫學院，寧夏 銀川750004）

年齡相關性黃斑變性（age-related macular degeneration，AMD）是影響視網膜黃斑區的一種進行性疾病，多見于50 歲以上人群，是世界上主要致盲疾病之一，預計到2040 年，約有2.9 億人受到AMD的影響，其中1.1 億人在亞洲［1］。AMD 是一種多因素疾病，其中光感受器-視網膜色素上皮（retinal pigment epithelium， RPE ）復合體退化是導致AMD 發病的機制之一，而導致其退化的風險之一便是日光照射［2］。由于AMD 發病率高，對視力的嚴重影響，且現階段的治療方法有限，近年來已成為眼科學研究的熱點。

細胞自噬是一種保守的細胞生存途徑，它可以分解受損的蛋白質和細胞器，并維持體內的平衡［3］，是細胞生長、分化、存活和自我平衡的重要途徑，有研究表明自噬參與了AMD 發病機制中所有細胞死亡途徑的調節［4］。目前，自噬與視網膜光損傷的關系尚不明確。為探討光損傷中自噬的變化，本研究采用mTOR 抑制劑雷帕霉素預處理人視網膜色素上皮細胞（ARPE-19），觀察光照對ARPE-19 細胞的影響，對光損傷中RPE 細胞自噬的變化進行研究，探討雷帕霉素對光誘導下視網膜色素上皮細胞自噬的影響。

1 材料和方法

1.1 細胞株

原 代ARPE-19，購 買 于BNCC（BNCC3377 13）。將ARPE-19 細胞放入37 ℃、5%的CO2培養箱中培養，每隔1 d 換液1 次，細胞生長密度到90%時消化細胞，以1∶3 進行傳代，選取3～5 代細胞進行實驗。

1.2 主要試劑和儀器

胎牛血清、DMEM/F12（美國Gibco 公司）；mRFP-eGFP-LC3 雙熒光質粒（生工生物工程上海股份有限公司）；MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒（碧云天生物技術，C0009S）Annexin V-FITC/PI 雙染細胞凋亡檢測試劑盒（上海貝博生物科技有限公司，BB-4101）；……