桂樓復方對子宮腺肌病異位內膜細胞遷移和侵襲的影響研究

【摘要】 背景 子宮腺肌病（AM）是婦科常見的疑難病，但其具體機制尚未明確。中醫藥治療AM有一定優勢，前期研究顯示，桂樓復方宮內緩釋系統可明顯降低AM模型大鼠子宮內膜細胞增殖、侵襲能力。目的 探討桂樓復方對子宮腺肌病異位內膜細胞（AMDC）遷移、侵襲的影響，并研究其對Rho/ROCK信號通路的影響。方法 本研究于2021年10月—2023年4月在山東中醫藥大學附屬醫院實驗中心完成。使用CCK-8法檢測AMDC細胞活力并篩選最佳藥物濃度。設置空白組，使用桂樓復方（50、100 mg/L）處理AMDC，劃痕實驗檢測細胞遷移能力，Transwell實驗檢測細胞侵襲能力，免疫印跡法Western Blotting）/實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2在蛋白和mRNA水平的表達情況。Rescue實驗中使用激動劑U-46619（1 μmol/L）和桂樓復方（100 mg/L）處理AMDC，Western Blotting法檢測RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表達改變情況。結果 與空白組比較，100 mg/L桂樓復方干預后AMDC細胞存活率未明顯降低，差異無統計學意義（Pgt;0.05），是不影響細胞活性的最佳藥物濃度。選取50、100 mg/L桂樓復方進行后續實驗。與空白組比較，桂樓復方50 mg/L、100 mg/L組AMDC遷移、侵襲能力受到抑制（Plt;0.001），RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表達水平下調（Plt;0.001），U-46619 1 μmol/L組RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表達上調（Plt;0.001）。與U-46619 1 μmol/L組比較，U-46619 1 μmol/L聯合桂樓復方100 mg/L組RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白表達下調（Plt;0.001）。空白組與桂樓復方50 mg/L、100 mg/L組RhoB的蛋白及mRNA表達水平差異均無統計學意義（Pgt;0.05）。結論 桂樓復方可有效抑制AMDC的遷移、侵襲能力，不影響細胞活性的最佳藥物濃度為100 mg/L，桂樓復方可下調RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表達水平，并可逆轉 U-46619 對 RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達水平的上調作用，從而抑制AM病局部異位病灶的持續進展，其作用可能與調控Rho/ROCK通路密切相關。

【關鍵詞】 子宮腺肌病；桂樓復方；子宮內膜；子宮腺肌病異位內膜細胞；遷移；侵襲；Rho/ROCK信號通路

【中圖分類號】 R 711.71 【文獻標識碼】 A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0491

Effect of Guilou Compound on Migration and Invasion of Adenomyosis Derived Cells

ZHANG Yinuo1，WANG Zilu2，SHI Yaxin2，WANG Xin3，GAO Xinyu2，ZHANG Quanying2，YU Mengdie2，XU Li4*，SHI Wei5*

1.College of Traditional Chinese Medicine，Shandong University of Chinese Medicine，Jinan 250355，China

2.College of the First Clinical Medical，Shandong University of Chinese Medicine，Jinan 250355，China

3. Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China

4.Department of Gynecology and Obstetrics，the Second Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China

5.Department of Gynecology，Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250011，China

*Corresponding authors：XU Li，Associate chief physician；E-mail：xulisw@126.com

SHI Wei，Chief physician/Doctoral supervisor；E-mail：71000131@sdutcm.edu.cn

【Abstract】 Background Adenomyosis（AM）is a common and difficult gynecological disease，but its specific mechanism has not been fully elucidated. Traditional Chinese Medicine（TCM） has certain advantages in the treatment of AM，preliminary studies have shown that Guilou compound-releasing intrauterine system can significantly reduce the proliferation and invasion ability of endometrial cells in rats with AM model. Objective To investigate the effect of Guilou compound on the migration and invasion of human adenomyosis derived cells（AMDC），and study its effect on Rho/ROCK signaling pathway. Methods The experiment was completed from October 2021 to April 2023 in Central Laboratory of the Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine. The CCK-8 assay was used to detect AMDC cell viability and screen the optimal drug concentration. AMDC were treated with Guilou compound（50 and 100 mg/L），and the cell migration viability was detected by scratch assay，and cell invasion ability was detected by Transwell assay. The expression of RhoA，RhoB，RhoC，ROCK1，and ROCK2 at protein and mRNA levels was detected by Western Blotting/RT-qPCR assay. In the Rescue experiment，AMDC were treated with agonist U-46619（1 μmol/L） and Guilou compound（100 mg/L），and the protein expression of RhoA，RhoB，RhoC，ROCK1，and ROCK2 was detected by Western Blotting. Results Compared with the control group，the survival rate of AMDC treated with 100 mg/L mass concentration of Guilou compound was not significantly decreased（Pgt;0.05），which was the optimal drug concentration without affecting the cell viability，50 and 100 mg/L mass concentrations of Guilou compound were selected for subsequent experiments. Compared with the control group，the migration and invasion ability of AMDC in the Guilou compound （50 mg/L，100 mg/L） group was significantly inhibited （Plt;0.001），the protein and mRNA expression levels of RhoA，RhoC，ROCK1，and ROCK2 were significantly down-regulated（Plt;0.001），while the protein expression of RhoA，RhoC，ROCK1 and ROCK2 in the U-46619 1 μmol/L group were significantly up-regulated（Plt;0.001）. Compared with the U-46619 1 μmol/L group，the protein expression of RhoA，RhoC，ROCK1，and ROCK2 in the U-46619（1 μmol/L） combined with Guilou compound（100 mg/L） group was significantly down-regulated（Plt;0.001）. There was no significant difference in protein and mRNA expression levels of RhoB in the control group and Guilou compound（50 mg/L，100 mg/L） group（Pgt;0.05）. Conclusion Guilou compound can effectively inhibit the migration and invasion ability of AMDC with the optimal drug concentration of 100 mg/L that does not affect the cell viability，Guilou compound can reverse the up-regulation of U-46619 on the protein expression of RhoA，RhoC，ROCK1 and ROCK2，thus inhibiting the the continuous progression of ectopic lesions of AM，which may be closely related to the regulation of Rho/ROCK pathway.

【Key words】 Adenomyosis；Guilou compound；Endometrium；Adenomyosis derived cells；Invasion；Migration；Rho/ROCK signal pathway

子宮腺肌病（AM）是一種以子宮內膜（包括腺體和間質）侵入子宮肌層，并向其內彌漫性生長而引起的疾病［1］。臨床主要表現為月經過多、進行性加重的痛經以及不孕，好發于育齡期婦女，發病率為7%～23%［2］，且有逐年升高的趨勢，是婦科常見的疑難病，嚴重影響女性的身心健康和生活質量。

AM的病因及發病機制尚不明確，其中子宮內膜向肌層遷移、侵襲和植入并在肌層內增生和擴展等類似惡性腫瘤的生物學行為是其發病的重要基礎［3］。課題組前期研究證實，AM病灶樣本中存在具有惡性腫瘤轉移和侵襲特征的細胞亞群，子宮內膜細胞侵襲、遷移能力增強是導致AM的關鍵性環節［4］。Ras同源基因（Rho）/Rho相關螺旋卷曲蛋白激酶（ROCK）途徑介導的細胞侵襲、遷移，在腫瘤的黏附和浸潤過程中發揮重要作用［5］。有研究表明，異位子宮內膜中存在Rho/ROCK信號通路相關基因的異常表達［6-7］。

中醫藥治療AM有一定優勢，能有效改善臨床癥狀、減緩疾病進程，遠期療效穩定，且無抑制性腺軸功能、影響生育能力、破壞子宮解剖結構等西醫治療的不良反應，《子宮內膜異位癥診療指南（第三版）》［8］、2020年《子宮腺肌病診治中國專家共識》［2］已明確推薦使用中醫藥治療AM。課題組前期研究表明，桂樓復方宮內緩釋系統可明顯降低AM模型大鼠子宮內膜細胞增殖、侵襲能力［9］。

基于此，本課題擬結合Rho/ROCK途徑介導的細胞遷移、侵襲，進一步探討桂樓復方對人AM異位內膜細胞的影響，以尋求治療AM的有效手段，阻斷或減緩局部異位病灶的持續進展。

1 材料與方法

本研究于2021年10月—2023年4月在山東中醫藥大學附屬醫院實驗中心完成。

1.1 細胞

AM異位內膜標本取自臨沂市中心醫院就診的AM患者，病理檢查確診為AM。患者均簽署知情同意書，研究方案經山東中醫藥大學附屬醫院倫理委員會批準〔（2018）臨床研究申請號（021）號〕。于手術室無菌獲取AM病灶組織，立即置于冰浴PBS緩沖液中轉運至實驗室進行原代提取和細胞培養。課題組前期免疫熒光實驗鑒定為子宮腺肌病異位內膜細胞（AMDC）［10］。

1.2 藥物

重樓（產地：云南省麗江市；批號：210202；安徽賀林中藥飲片科技有限公司）、桂枝（產地：廣西壯族自治區北海市；批號：21070705；安徽協和成藥業飲片有限公司）、三七粉（產地：云南省文山市；批號：2105099；安徽億源藥業股份有限公司），以上飲片均符合2020年版《中國藥典》一部相關項下規定；遵循桂樓復方臨床用藥比例，按照桂枝∶重樓∶三七粉5∶4∶1比例稱取飲片，加6倍量70%乙醇回流提取2次，1.5 h/次，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇并濃縮至相對密度約1.10～1.15（60 ℃），減壓干燥（65～70 ℃，-0.08 MPa），粉碎，即得桂樓復方提取物。

1.3 試劑

無菌PBS、DMEM/F-12（1∶1）basic（1×）（上海源培生物科技股份有限公司，批號分別為：B310kj、L310KJ）；青-鏈霉素混合液、裂解液、PMSF100、蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑（北京索萊寶科技有限公司，批號分別為：20211016、20230407、20200619、20230407、20200619）；胎牛血清（上海雙洳生物科技有限公司，批號：S711-001S）；CCK-8 試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技有限公司，批號：E-CK-A362）；1%結晶紫（上海碧云天生物技術有限公司，批號：20191015）；BCA蛋白濃度測定試劑盒、無蛋白快速封閉液（上海雅酶生物醫藥科技有限公司，批號分別為：ZJ102、03652200）；山羊抗兔IgG/辣根酶標記（北京中杉金橋生物技術有限公司，批號：231400310）；RhoA 抗體、RhoB抗體、RhoC抗體、ROCK1抗體、ROCK2 抗體、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體（美國Proteintech公司，批號分別為：00080169、00054121、00017897、00052277、00019931、00097755）；ECL化學發光液（南京諾唯贊生物科技股份有限公司，批號：B2261KAA）；Simply P 總RNA提取試劑盒（北京博邁斯科技發展有限公司，批號：BSC52M1）；ReverTra AceTM qPCR RT Kit（日本TOYOBO公司，批號：233400）；SYBR?Green Pro Taq HS預混型qPCR試劑盒（湖南艾科瑞生物工程有限公司，批號：AG11701）。

1.4 儀器

INC153二氧化碳培養箱（德國Memmert公司）；Multiskan Go1510酶標儀（美國Thermo公司）；Axiovert 40型倒置相差顯微鏡（德國Carl zeiss公司）；Mini-Protean Tetra電泳系統、Trans-Blot Turbo 轉膜儀、Bio-Rad ChemiDoc TM化學發光成像系統（美國Bio-Rad公司）；Biometra TOne 96孔型PCR儀（德國Analytik-jena公司）；Light Cycler 480 Ⅱ熒光定量PCR儀（瑞士Roche公司）。

1.5 方法

1.5.1 AMDC培養：使用DMEM/F-12培養基，加入10%胎牛血清、1%青-鏈霉素，配成完全培養基培養細胞，置于37 ℃、5% CO2的培養箱，每隔48 h傳一代。

1.5.2 CCK-8法檢測AMDC活力：將AMDC接種至96孔板中，3.5×103/孔，每組設置3個復孔，置于細胞培養箱培養24 h。分別加入不同質量濃度的桂樓復方醇提物，以檢測桂樓復方對AMDC活力的影響并確定半抑制濃度（IC50），終濃度分別為0、200、400、800、1 600、3 200 mg/L，分為空白組、桂樓復方200 mg/L組、桂樓復方400 mg/L組、桂樓復方800 mg/L組、桂樓復方1 600 mg/L組、桂樓復方3 200 mg/L組，放入培養箱中繼續培養48 h。棄去原培養液，加入含10%CCK-8試劑的完全培養基100 μL，放入培養箱中孵育4 h，酶標儀測定每孔細胞450 nm處吸光度A，并計算細胞存活率。細胞存活率=［實驗孔光密度值（OD）-空白孔OD］/（對照孔OD-空白孔OD）×100%。公式中OD為光密度值。

1.5.3 篩選最佳藥物濃度及分組給藥：以CCK-8法進一步篩選不影響細胞活性的最佳藥物濃度，設置藥物濃度梯度為0、100、200、300 mg/L，分為空白組、桂樓復方100 mg/L組、桂樓復方200 mg/L組、桂樓復方300 mg/L組。CCK-8檢測操作方法及細胞存活率計算方法同上。

分組給藥，根據CCK-8法篩選不影響細胞活性的最佳藥物濃度，將AMDC分為空白組和桂樓復方（50 mg/L、100 mg/L）組，以檢測桂樓復方對AMDC遷移、侵襲及對Rho/ROCK信號通路相關蛋白、mRNA表達的影響。Rescue實驗中加入激動劑U-46619（9，11-Methanoepoxy PGH2）［11-12］，上調RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的表達，將AMDC分為空白組、U-46619 1 μmol/L組、桂樓復方100 mg/L組和U-46619 1μmol/L聯合桂樓復方100 mg/L組，以檢測桂樓復方對上調后的Rho/ROCK信號通路相關蛋白表達的影響，進一步明確桂樓復方對Rho/ROCK信號通路的作用。

1.5.4 劃痕實驗檢測AMDC遷移能力：將AMDC接種于6孔板，2.0×105/孔，待細胞長至單層鋪滿，藍色1 000 μL無菌槍頭尖端均勻劃痕，分組并給藥（每孔含1%胎牛血清），終濃度分別為0、50 、100 mg/L，分為空白組、桂樓復方50 mg/L組、桂樓復方100 mg/L組。置于培養箱中孵育，在0、24、48 h對細胞進行跟蹤拍照，用Image-Pro Plus軟件計算遷移率。

1.5.5 Transwell實驗檢測AMDC侵襲能力：用不含 FBS 的培養基配置為終濃度分別為 0、50、100 mg/L含藥培養基，將AMDC消化并重懸后，接種于 Transwell 上室中，2.0×104 / 孔，下室添加完全培養基。待貼壁后分組并給藥，終濃度分別為0、50 、100 mg/L，下室添加完全培養基。置于培養箱孵育48 h，取出小室，結晶紫固定及染色，顯微鏡下拍照和計數各組AMDC細胞侵襲數量。

1.5.6 免疫印跡法（Western Blotting）檢測Rho/ROCK信號通路相關蛋白表達：將AMDC接種于大皿中，6.0×105/皿，待細胞貼壁后分組并給藥，置于細胞培養箱孵育48 h，收集細胞，配置RIPA組織液裂解，提取細胞中的蛋白；用BCA試劑盒測定蛋白濃度；加入適量的5×loading buffer，混勻加熱，高溫變性5 min。每孔加入10 μL蛋白，經過SDS-PAGE電泳分離，轉膜至PVDF膜，用快速封閉液封閉15 min，于4 ℃冰箱過夜孵育一抗，經TBST洗滌3次，室溫孵育二抗1 h，洗膜后加入ECL增強型化學發光試劑，曝光處理。檢測各組RhoA、RhoB、RhoC及ROCK 1、ROCK2蛋白表達情況。

1.5.7 實時熒光定量PCR（RT-qPCR）法檢測Rho/ROCK信號通路相關mRNA表達：將AMDC接種于六孔板中，1.5×105/孔，待貼壁后分組并干預，置于細胞培養箱孵育48 h，收集細胞，提取總RNA，進行逆轉錄反應和RT-qPCR。逆轉錄反應條件：65 ℃ RNA變性5 min，37 ℃逆轉錄15 min，98 ℃酶失活5 min。RT-qPCR反應條件：95 ℃預變性30 s，1個循環；95 ℃變性5 s，55 ℃退火10 s，72 ℃延伸15 s，共40個循環。以GAPDH為內參，檢測各組RhoA、RhoB、RhoC及ROCK1、ROCK2的mRNA表達，采用2-ΔΔCt法計算mRNA相對表達，引物由山東思科捷生物技術有限公司設計合成，見表1。

1.6 統計學分析

采用SPSS 27.0軟件進行統計學分析。計量資料用（x-±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以Plt;0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同質量濃度桂樓復方對AMDC活力的影響

與空白組比較，200、400、800、1 600、3 200 mg/L桂樓復方干預后AMDC細胞存活率降低，差異有統計學意義（Plt;0.001），見表2。IC50=（1 039.42±29.94）mg/L。

2.2 桂樓復方最佳藥物濃度的篩選

基于IC50進一步篩選不影響細胞活性的最佳藥物濃度，與空白組比較，100 mg/L桂樓復方干預后AMDC細胞存活率無明顯降低，差異無統計學意義（Pgt;0.05），200、300 mg/L桂樓復方干預后AMDC細胞存活率降低，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表3。依據此結果，不影響細胞活性的最佳藥物濃度為100 mg/L，選取50、100 mg/L桂樓復方進行后續實驗。

2.3 桂樓復方對AMDC遷移能力的影響

與空白組比較，50、100 mg/L桂樓復方干預后AMDC劃痕區域的愈合面積趨于減小（圖1），24、48 h遷移率低于空白組，差異有統計學意義（Plt;0.05），見表4。

2.4 桂樓復方對AMDC侵襲能力的影響

與空白組比較，50、100 mg/L桂樓復方干預后AMDC侵襲數量減少，差異有統計學意義（Plt;0.005），見圖2、表5。

2.5 桂樓復方對RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達的影響

與空白組比較，桂樓復方（50 mg/L、100 mg/L）組AMDC的RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達水平明顯下調，差異有統計學意義（Plt;0.05）。空白組與桂樓復方（50 mg/L、100 mg/L）組AMDC的RhoB蛋白表達水平比較，差異無統計學意義（Pgt;0.05），見圖3、表6。

2.6 桂樓復方對RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2 mRNA表達的影響

與空白組比較，桂樓復方（50 mg/L、100 mg/L）組AMDC的RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的mRNA表達水平下調，差異有統計學意義（Plt;0.05），RhoB的mRNA表達水平無統計學意義（Pgt;0.05），見表7。

2.7 U-46619和桂樓復方對RhoA、RhoB、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達的影響

與空白組比較，桂樓復方100 mg/L組AMDC的RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白水平表達下調，U-46619 1 μmol/L組AMDC的RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達水平明顯上調，U-46619 1 μmol/L聯合桂樓復方100 mg/L組的RhoA蛋白表達水平下調，差異有統計學意義（Plt;0.05），RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達水平無統計學意義（Pgt;0.05）。與U-46619 1 μmol/L組比較，U-46619 1 μmol/L聯合桂樓復方100 mg/L組的RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2蛋白表達水平下調，差異有統計學意義（Plt;0.05）。各組RhoB蛋白表達水平均無統計學意義（Pgt;0.05），見圖4、表8。

3 討論

AM是婦科常見的疑難病種，以子宮內膜細胞腺體和間質遷移和侵襲能力增強并深度浸潤至肌層為主要特征［13-14］。目前臨床治療上尚無理想的藥物及保守性手術治療方案［15］，除了切除子宮，AM是難以徹底治愈的［16］。西醫主要包括藥物治療、手術治療和介入治療［17-18］，但可能發生影響女性生育能力、破壞子宮解剖結構的不良事件，且難以治愈，停藥后極易復發［19］，亟需開發治療AM的新藥。

中醫學中尚無關于AM病名的記載，根據其臨床表現多歸納為癥瘕的范疇。該病以血瘀為主要病理因素［20］，核心病機為經血瘀阻胞脈胞宮，久而成癥，隨月經周期和沖任氣血的變化，發為不通則痛之“痛經”和血不歸經之“月經過多”。中醫藥治療AM的療效確切，在改善臨床癥狀以及降低復發率上有一定的優勢［2］，且無明顯不良反應。針對AM瘀血漸至癥瘕的核心病機，本課題組篩選了臨床治療AM療效顯著的3個中成藥：桂枝茯苓丸、宮血寧膠囊、散結鎮痛膠囊，形成中成藥聯用的治療方案，在前期臨床試驗中取得了明顯成效［21-22］。在此基礎上，進一步篩選其核心藥物組合，針對既要“活血通經緩疼痛”，亦要“固沖攝血止量多”的臨床治療難點，引入中醫學“通因通用”治法理念，形成了溫通與清解并用、活血與止血相兼的桂樓復方（桂枝、重樓、三七）。桂枝是桂枝茯苓丸中的君藥，辛甘溫而溫經通脈止痛；重樓是宮血寧膠囊的唯一藥物，苦小寒而解毒化瘀止血；三七是散結鎮痛膠囊主要藥物之一，甘微苦而化瘀定痛止血。組方“通脈化瘀消癥”以攻逐胞宮瘀癥而獲治療AM之效，在前期動物實驗中療效顯著［9］。

AM雖是良性病變，但具有類似惡性腫瘤的遷移、侵襲等生物學行為［4］，且與子宮內膜癌、卵巢癌的發病率和嚴重程度增加相關［23-25］。有研究發現，與正常子宮內膜細胞相比，AMDC具有更強的黏附、增殖、遷移、侵襲能力［26-27］。本研究中，CCK-8實驗結果表明，桂樓復方可有效抑制AMDC的細胞活力，且lt;100 mg/L時不影響細胞的活性，故選擇50、100 mg/L進行后續實驗。劃痕和Transwell實驗結果表明，桂樓復方能夠顯著抑制AMDC細胞的遷移和侵襲能力，且抑制作用呈濃度依賴性。

Rho/ROCK信號通路在惡性腫瘤的黏附和浸潤過程中發揮重要作用，特別是在具有高度轉移性和強侵襲性表型的腫瘤細胞中［28］。RhoA、RhoB和RhoC是ROCK1/2活性的上游調節因子，活化的Rho通過結合并激活ROCK，調節肌動蛋白細胞骨架的聚合，參與細胞的多種生物學行為，包括細胞增殖、分化、遷移、侵襲等［29-30］。臨床上經常發現RhoA和RhoC的在癌癥中過度表達，且RhoC已被反復鑒定為與轉移相關的基因［31］，而RhoB因半衰期短而表達不穩定［32］。本研究表明，桂樓復方能夠顯著下調RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的蛋白及mRNA表達水平。U-46619是一種G蛋白偶聯受體激動劑，可有效激動RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2［11-12］，對RhoB的作用尚不明確。本研究中，與空白組相比，U-46619 1 μmol/L組 RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2 的蛋白表達水平顯著升高，與U-46619 1 μmol/L組相比，U-46619 1 μmol/L聯合桂樓復方100 mg/L組 RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2 的蛋白表達水平顯著降低，各組RhoB的蛋白表達水平無統計學意義，提示桂樓復方可逆轉U-46619對RhoA、RhoC、ROCK1、ROCK2的上調作用。

綜上所述，桂樓復方可有效抑制AMDC的遷移、侵襲能力，從而抑制或減緩AM局部異位病灶的持續進展，其作用可能與調控Rho/ROCK通路密切相關，但其具體機制仍待進一步探索。本研究結果提示桂樓復方可能是治療AM的有效手段，為桂樓復方的臨床應用提供一定的理論依據，為中醫藥精準治療AM提供了科學

基礎。

作者貢獻：張一諾負責研究結果的分析，論文的構思、撰寫及修訂；王子璐、石雅馨負責設計研究方案，指導并推進研究實施；王信負責實驗藥物的制備；高新宇、張全英負責研究實施，整理數據；喻夢蝶負責指導研究實施；徐麗負責文章的質量控制與審校；師偉提出研究思路，對文章整體負責、監督管理。

本文無利益沖突。

張一諾：https：/orcid.org/0009-0009-6025-3644

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（本文編輯：趙躍翠）

*通信作者：徐麗，副主任醫師；E-mail：xulisw@126.com

師偉，主任醫師/博士生導師；E-mail：71000131@sdutcm.edu.cn

基金項目：國家自然科學基金面上項目（81873330）；山東省泰山學者工程泰山學者青年專家（tsqn201909185）；山東省自然科學基金（ZR2021MH198）；山東省中醫藥科技項目（2021M186）

引用本文：張一諾，王子璐，石雅馨，等. 桂樓復方對子宮腺肌病異位內膜細胞遷移和侵襲的影響研究［J］. 中國全科醫學，2024，27（24）：3007-3014. DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0491.［www.chinagp.net］

ZHANG Y N，WANG Z L，SHI Y X，et al. Effect of Guilou compound on migration and invasion of adenomyosis derived cells［J］. Chinese General Practice，2024，27（24）：3007-3014.

? Editorial Office of Chinese General Practice. This is an open access article under the CC BY-NC-ND 4.0 license.