環(huán)二肽生物活性的研究進(jìn)展

摘要：環(huán)二肽是兩個(gè)氨基酸通過(guò)肽鍵縮合而成的化合物。環(huán)二肽具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予其兩個(gè)氫供體與氫受體的特征，它與不同靶標(biāo)物質(zhì)結(jié)合后能產(chǎn)生諸多效應(yīng)，從而表現(xiàn)出多種生物活性。環(huán)二肽來(lái)源廣泛，隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，可以從真菌和細(xì)菌中提取分離出環(huán)二肽，也可以通過(guò)生物或化學(xué)方法合成環(huán)二肽。除了在抗生素、抗腫瘤藥物研發(fā)、抗氧化、降血糖等方面具有巨大的潛力外，在調(diào)節(jié)能量代謝、調(diào)控食欲、改善神經(jīng)系統(tǒng)和降低心臟傳導(dǎo)速率等方面也有很廣闊的前景。因此，本文對(duì)近5年來(lái)發(fā)現(xiàn)的環(huán)二肽進(jìn)行綜述，主要介紹了環(huán)二肽的來(lái)源、結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)，并對(duì)其生物活性展開(kāi)重點(diǎn)闡述，并提出了建議和展望。

關(guān)鍵詞：環(huán)二肽；生物活性；抗腫瘤；抑菌；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Research progress of cyclic dipeptide bioactivity

Zheng Tingli1， Zhu Ke1， Shi Zhaofeng2， Tan Jun2， Wang Lianghua3， Jiao Binghua3 and Sun Mingjuan3

（1 School of Basic Medical Science Five Students Brigade， Naval Medical University， Shanghai 200433; 2 School of Basic Medical Science Two Students Brigade， Naval Medical University， Shanghai 200433; 3 Department of Biochemistry and Molecular Biology， School of Basic Medical Science， Naval Medical University， Shanghai 200433）

Abstract Cyclic dipeptides are compounds formed by the condensation of two amino acids through peptide bonds. Owing to their unique structure， which consists of two hydrogen bond donors and two hydrogen bond acceptors， cyclic dipeptides can bind with numerous substances， triggering diverse reactions and exhibiting multiple effects. Cyclic dipeptides come from a wide range of sources. With the development of modern science and technology， cyclic dipeptides can be extracted and isolated from fungi and bacteria. Furthermore， cyclic dipeptides can also be synthesized by biological or chemical methods. The enormous potential of cyclic dipeptides in the research and development of antibiotics， antitumor drugs， antioxidants and hypoglycemia is explored. Moreover， cyclic dipeptides also have a broad outlook in regulating energy metabolism， regulating appetite， improving the nervous system and reducing cardiac conduction velocity. Herein， the review summarized the cyclic dipeptides discovered in the last five years and primarily delved into the sources， structures， and physicochemical properties of cyclic dipeptides， with a particular emphasis on their biological activities. And suggestions and prospects are listed.

Key words Cyclic dipeptide; Bioactivities; Antitumor; Bacteriostatic; Research progress

環(huán)二肽是由2個(gè)氨基酸首尾相連形成的、具有優(yōu)異剛性結(jié)構(gòu)和生物活性的哌嗪二酮類化合物（diketopiperazines，DKPs）。Curtius等[1]在1888年首次合成出第一種環(huán)二肽cyclo（Gly-Gly）。環(huán)二肽來(lái)源廣泛，隨著現(xiàn)代科技的發(fā)展，可以從真菌和細(xì)菌中提取分離出環(huán)二肽，也可以通過(guò)生物或化學(xué)方法合成環(huán)二肽。環(huán)二肽的結(jié)構(gòu)種類豐富，僅僅是常規(guī)天然氨基酸進(jìn)行環(huán)化所形成的環(huán)二肽種類就多達(dá)210種，其結(jié)構(gòu)的多樣性使得環(huán)二肽具有多種生物活性。在過(guò)去的幾年中，越來(lái)越多的研究報(bào)道了環(huán)二肽的生物活性，包括參與細(xì)胞間信息傳遞、抑菌和抗腫瘤等，其中研究最為廣泛的是其抗菌和抗腫瘤的功效。例如cyclo（D-Ala-D-Trp）能有效抑制人宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)[2]，以及cyclo（Tyr-Gly）抑制大腸埃希菌的繁殖[3]。

后又陸續(xù)報(bào)道證實(shí)了環(huán)二肽的抗氧化和降血糖等作用。如今病原菌的耐藥性越來(lái)越普遍，濫用抗生素等問(wèn)題也未受到重視，這些現(xiàn)象都促使對(duì)環(huán)二肽生物活性進(jìn)行深入研究。本文主要對(duì)環(huán)二肽的生物活性進(jìn)行綜述，同時(shí)對(duì)其藥物生產(chǎn)及臨床應(yīng)用等方面做出展望。

1 環(huán)二肽的來(lái)源

1.1 自然來(lái)源

環(huán)二肽來(lái)源廣泛，迄今為止，絕大多數(shù)環(huán)二肽來(lái)自革蘭陰性菌[4]，少部分來(lái)自于植物、動(dòng)物、革蘭陽(yáng)性菌以及真菌[5]。例如2017年，Gowrishankar等[6]從解淀粉芽胞桿菌（MMS-50）提取的cyclo（L-Leu-L-Pro）（CLP）能抑制細(xì)菌生物膜，但這并非殺菌作用。2020年，郭慶豐等[3]在大黃魚(yú)共生菌（Bacillus coagulans LL1103）的代謝產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的cyclo（Tyr-Gly）、cyclo（Pro-Gly）和cyclo（Pro-Val）對(duì)大腸埃希菌具有抑制作用。

1.2 合成途徑

目前環(huán)二肽的合成方法主要分為以下2種。

1.2.1 化學(xué)合成途徑

應(yīng)用最廣泛的方法是固相合成法，其合成流程如圖1所示。此方法的優(yōu)點(diǎn)是氨基酸通過(guò)樹(shù)脂這一媒介環(huán)化再分離，可以很有效地避免分子間的其他反應(yīng)，從而能夠生成更多的環(huán)二肽[7]。

而合成環(huán)二肽的經(jīng)典方法是溶液合成法。即將線性肽放置于溶液中，并使用縮合劑使其連接成環(huán)，也可以將線性肽的C端通過(guò)硫酯法等活化然后再進(jìn)行成環(huán)。優(yōu)點(diǎn)在于避免氨基酸的異構(gòu)化[8]。

1.2.2 生物合成途徑

迄今為止合成首尾相連環(huán)肽的途徑一般包含2種。第一種為非酶合成途徑。例如內(nèi)源性cyclo（His-Pro）的合成[9]。首先是TRH-Gly（pGlu-His-Pro-Gly）被焦谷氨酸氨基肽酶裂解生成His-Pro-Gly，后者再經(jīng)過(guò)非酶促環(huán)化合成cyclo（His-Pro）。另一種為酶合成途徑，即肽鏈必須在酶的參與下才能進(jìn)行自身環(huán)化。其包含NRPSs（non-ribosomal peptide synthetase， NRPS）以及CDPSs（cyclodipeptide synthase， CDPS）2種合成途徑。NRPSs合成途徑即非核糖體肽合成途徑[10]，NRPSs由腺苷酸化結(jié)構(gòu)域、肽酰載體蛋白結(jié)構(gòu)域和縮合結(jié)構(gòu)域3種結(jié)構(gòu)域組成。NRPSs合成途徑如圖2A示。NRPSs途徑優(yōu)點(diǎn)是其具有多樣性，從而使非核糖體肽的結(jié)構(gòu)和功能也有多樣性，因此可以使用不同的底物合成環(huán)二肽。CDPSs合成途徑即環(huán)二肽合酶合成途徑[11]，CDPSs合成途徑如圖2B所示，該CDPSs途徑優(yōu)點(diǎn)是能夠利用現(xiàn)有的aa-tRNA合成環(huán)二肽，所需流程較少[12]。

2 環(huán)二肽的結(jié)構(gòu)與理化性質(zhì)

環(huán)二肽具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予其2個(gè)氫供體與氫受體的特征。優(yōu)勢(shì)分子支架通常被定義為一種核心化學(xué)結(jié)構(gòu)。其通過(guò)結(jié)合各種官能團(tuán)來(lái)生成結(jié)構(gòu)多樣的生物活性分子[13-16]。比如范德華力在這種獨(dú)特的模式驅(qū)動(dòng)下產(chǎn)生的強(qiáng)分子間相互作用使環(huán)二肽具有較高的分子自組裝傾向；研究報(bào)道Kozlovsky等[17]用吲哚基團(tuán)修飾DKPs，分離得到的piscarine A（24）和piscarine B（25）在DKP結(jié)構(gòu)側(cè)鏈上具有三環(huán)或四環(huán)吲哚基雜環(huán)，在脯氨酸環(huán)上具有不飽和雙鍵。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步表明這2種化合物對(duì)前列腺癌細(xì)胞系具有一定的細(xì)胞毒性。此外，基于環(huán)二肽本身的剛性結(jié)構(gòu)和分子間相互作用等，可以通過(guò)生物、化學(xué)途徑合成來(lái)實(shí)現(xiàn)其結(jié)構(gòu)的多樣性。已知許多環(huán)二肽的天然產(chǎn)物具有抗腫瘤、抗菌和抗氧化等活性，而其固有的生物活性更是促進(jìn)了其在藥物合成和藥物輸送等領(lǐng)域的研究發(fā)展。近年來(lái)，CDP已迅速成為設(shè)計(jì)生物材料、先進(jìn)候選藥物和藥物輸送劑等的專用支架[18]。

具有多種功能的DKPs的代表性化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖3所示，例如參與細(xì)胞間信息傳遞（1～4）、抗腫瘤活性（5～11）、抗菌活性（12～21）、抗氧化與降血糖（22）、作為凝膠因子組成超分子水凝（23）、調(diào)控食欲及能量代謝（24）、抑制細(xì)胞周期（25～26）、改善神經(jīng)系統(tǒng)（13）。

大多數(shù)的環(huán)二肽呈弱堿性，常常微溶于水，易溶于甲醇等有機(jī)溶劑中，形態(tài)一般為結(jié)晶或粉末，熔點(diǎn)一般高于200 ℃[19]。通常采用強(qiáng)氧化劑去檢測(cè)環(huán)二肽的存在，環(huán)二肽與不同試劑反應(yīng)會(huì)呈現(xiàn)出不同顏色的斑點(diǎn)[20]，例如熒光指示劑、碘化鉍鉀試劑。

3 環(huán)二肽的生物活性

3.1 參與細(xì)胞間信息傳遞

近年來(lái)的研究表明：群體感應(yīng)（quorum sensing，QS）是細(xì)菌通過(guò)自誘導(dǎo)物質(zhì)（auto-inducer，AI）監(jiān)測(cè)其種群密度，用于調(diào)節(jié)生物的群體行為的一種信息傳遞機(jī)制。如生物膜形成、助細(xì)菌感染、分泌毒力因子等[21]。目前，最常見(jiàn)的是高絲氨酸內(nèi)酯（acyl-homoserine lactones，AHL）信號(hào)傳遞途徑，在群體感應(yīng)通路中，信號(hào)分子AHLs與LuxR型蛋白結(jié)合，產(chǎn)生反應(yīng)，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，從而使細(xì)菌進(jìn)行一定的生理活動(dòng)。由AHLs介導(dǎo)的群體感應(yīng)系統(tǒng)的物質(zhì)被認(rèn)定為群體感應(yīng)抑制劑。據(jù)報(bào)道，DKPs能夠調(diào)節(jié)LuxR型受體活性。如，創(chuàng)傷弧菌（Vibrio vulnificus）產(chǎn)生的cyclo（L-Phe-L-Pro）可以誘導(dǎo)費(fèi)氏弧菌V. fischerilux基因的表達(dá)[22]。DKPs還可以有效提高相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄水平。例如，在氣味沙雷菌（Serratia odorifera）中新發(fā)現(xiàn)了一種QS系統(tǒng)，其中cyclo（Pro-Phe）等AI可以提高真姬菇（H. marmoreus）木質(zhì)素降解酶基因的轉(zhuǎn)錄水平[23]。具體的相關(guān)信號(hào)分子及機(jī)制還待進(jìn)一步研究。

創(chuàng)傷弧菌產(chǎn)生的cyclo（L-phe-L-Pro）（CFP），作為一種信號(hào)分子控制先天細(xì)菌基因的toxR依賴性表達(dá)，同時(shí)也是一種毒力因子，通過(guò)提高細(xì)胞內(nèi)活性氧水平對(duì)人類細(xì)胞產(chǎn)生致病作用。Kim等[24]在2018年發(fā)現(xiàn)CFP促進(jìn)了創(chuàng)傷弧菌對(duì)過(guò)氧化氫的保護(hù)。它能通過(guò)提高RpoS的水平來(lái)誘導(dǎo)katG的表達(dá)，使得過(guò)氧化氫酶I的合成增加，達(dá)到解毒H2O2以克服氧化應(yīng)激的目的。并且發(fā)現(xiàn)CFP依賴性調(diào)節(jié)器LeuO能直接與vhuA和vhuB的上游區(qū)域結(jié)合以增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而發(fā)揮CLP上調(diào)組蛋白樣蛋白vHUα和vHUβ的作用。CFP介導(dǎo)的ToxR-LeuO-vHUαβ-RpoS通路也上調(diào)了已知的受RpoS調(diào)控的基因，提示CFP對(duì)受RpoS和LeuO調(diào)控的基因都具有調(diào)節(jié)作用，CFP作為毒力因子和同源病原體的保護(hù)信號(hào)發(fā)揮著重要功能，如圖4所示。

近年來(lái)，為了解決病原菌的耐藥性日益嚴(yán)重的問(wèn)題，人們?cè)絹?lái)越關(guān)注通過(guò)抑制生物膜的形成和毒力因子的合成等途徑阻礙其進(jìn)化為耐藥菌株的方法。2019年，Shanmugaraj等[25]研究了cyclo（L-Leu-L-Pro）（CLP）對(duì)黏質(zhì)沙雷菌（Serratia marcescens）的抗QS效果。他們進(jìn)行了體內(nèi)、體外的多種實(shí)驗(yàn)研究，其中包括最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration，MIC）試驗(yàn)、蛋白酶試驗(yàn)、游動(dòng)和群集運(yùn)動(dòng)試驗(yàn)，秀麗隱桿線蟲(chóng)（Caenorhabditis elegans）模型等。并通過(guò)qPCR技術(shù)證實(shí)了CLP確實(shí)能有效抑制黏質(zhì)沙雷菌中QS控制的靈桿菌素的產(chǎn)生。在分子水平上，通過(guò)下調(diào)fimA和fimC的表達(dá)，減少菌毛蛋白的合成，進(jìn)而抑制黏質(zhì)沙雷菌的附著，阻礙生物膜的組裝。此外，CLP還下調(diào)了FlhD、FlhC和bsmB基因的表達(dá)，發(fā)揮抑制黏質(zhì)沙雷菌的游泳和群集運(yùn)動(dòng)以及妨礙黏質(zhì)沙雷菌的體內(nèi)復(fù)制和移植的功效。其結(jié)果表明CLP對(duì)生物膜的抑制作用是開(kāi)發(fā)生物膜劑的基礎(chǔ)。2020年，從米曲霉（Aspergillus oryzae）的代謝產(chǎn)物中分離得到的環(huán)二肽對(duì)熒光假單孢菌（Pseudomonas fluorescens）的群體感應(yīng)表型具有很好的抑制作用，由此推測(cè)環(huán)二肽可能是一種新群體感應(yīng)抑制劑[26]。2021年，從海洋真菌DXY-1粗提物中分離鑒定出的cyclo（L-Tyr-L-Pro）對(duì)紫色色桿菌（Chromobacterium violaceum CV026）和銅綠假單胞菌（P. Aeruginosa PA01）表現(xiàn)出顯著的QS調(diào)控的毒力抑制作用[27]。環(huán)二肽有望成為一個(gè)抗菌藥物開(kāi)發(fā)的新的潛在靶點(diǎn)。

3.2 抗腫瘤活性

據(jù)統(tǒng)計(jì)，在我國(guó)盡管食管癌、肝癌等癌癥的腫瘤死亡率逐年降低，肺癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、宮頸癌和前列腺癌的發(fā)病率仍然呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)。研發(fā)針對(duì)性的靶向藥物的腳步刻不容緩[28]。

2020年，Lin等[29]在研究時(shí)發(fā)現(xiàn)cyclo（L-Leu-L-Pro）在20 μmol/L上表現(xiàn)出對(duì)ECA-109、HeLa-S3和PANC-1等3種癌細(xì)胞系中等的抑制作用，范圍從14%（pan-1）到55%（ECA-109）。Karanam等[30]的研究報(bào)道中提到cyclo（Pro-Tyr）（DP）具有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性，其對(duì)HepG2細(xì)胞有劑量依賴性的細(xì)胞毒性作用，而對(duì)小鼠成纖維McCoy細(xì)胞無(wú)顯著毒性作用，其作用機(jī)制如圖5所示。環(huán)二肽調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡為抗癌提供了一條清晰的思路。由此可知，DP可能成為一種潛在的治療肝細(xì)胞癌的替代藥物。Jinendiran等[31]在體外和體內(nèi)斑馬魚(yú)移植大腸癌HT-29細(xì)胞模型中，評(píng)價(jià)了4種來(lái)自于乙酰短桿菌（E. acetylicum S01）提取物的DKPs的抗癌潛力。4種DKPs對(duì)HT-29細(xì)胞活性抑制作用呈劑量依賴性，在非致死劑量范圍內(nèi)，這些DKPs顯著抑制斑馬魚(yú)異種移植瘤模型的腫瘤進(jìn)展，并且對(duì)小鼠正常成纖維3T3細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性作用。該研究結(jié)果提示：這4種環(huán)二肽在抗癌藥物研發(fā)方面很有前景。2021年，從極地真菌（Geomyces pannorum SA3-2-YM）的發(fā)酵液提取物中發(fā)現(xiàn)的cyclo（D-Ala-D-Trp）經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)得對(duì)HeLa細(xì)胞的抑制率可達(dá)62.28%[2]。2022年，Youssef等[32]發(fā)現(xiàn)cyclo（L-NMe-Leu-L-NAc-Phe）和cyclo（D-6-OH-Pro-D-Phe）對(duì)HCT 116的選擇性優(yōu)于MDA-MB-231（人乳腺癌細(xì)胞），而對(duì)HeLa細(xì)胞的作用較弱；其中cyclo（L-NMe-Leu-L-NAc-Phe）對(duì)HCT 116活性最強(qiáng)。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)兩個(gè)影響毒性作用的因素。首先是癌細(xì)胞的類型，Ye等[33]從紅樹(shù)林鏈霉菌（Mangrove Streptomyces sp. Q24）中分離出來(lái)的cyclo（L-Phel-L-Hyp）在人膠質(zhì)瘤U87-MG和U251細(xì)胞的增殖抑制實(shí)驗(yàn)中，分別當(dāng)IC50為5.8 和18.6 μmol/L時(shí)表現(xiàn)出一定效力，而在HCT-116、OVCAR-8和SF-295細(xì)胞系上測(cè)試時(shí)發(fā)現(xiàn)在25 μg/mL[34]上也無(wú)法顯示出明確的細(xì)胞毒性作用。除了靶向癌細(xì)胞的類別造成的差異外，環(huán)二肽本身的結(jié)構(gòu)對(duì)毒性作用的產(chǎn)生也有影響，例如cyclo（L-Leu-L-Hyp）及其結(jié)構(gòu)類似物cyclo（L-Leu-L-Pro）對(duì)U251和U87-MG細(xì)胞系的毒性實(shí)驗(yàn)中，二者分別在IC50為29.4與14.5 μmol/L以及IC50為19.8與

1.3 μmol/L[33]時(shí)對(duì)該細(xì)胞系表現(xiàn)出毒性作用。以上表明，環(huán)二肽雖然具有抗腫瘤的生理特性，但是環(huán)二肽類（CDPs）化合物不能對(duì)所有的腫瘤細(xì)胞都具有較強(qiáng)的抑制作用，其更強(qiáng)的毒性作用體現(xiàn)在細(xì)胞特異性方面[35]。

近年來(lái)，關(guān)于含硫DKPs的研究報(bào)道了一些環(huán)二肽對(duì)癌細(xì)胞的毒性作用，這些DKPs大多來(lái)自于真菌[36]。冠毛桿菌（C. cristatum）中發(fā)現(xiàn)的Cristazine通過(guò)死亡受體途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，對(duì)HeLa和A451具有細(xì)胞毒作用[32-37]。葉催產(chǎn)素是一種含二聚硫的DKPs，對(duì)實(shí)體腫瘤和血液腫瘤都表現(xiàn)出廣泛的細(xì)胞毒性作用[38-39]，在Lai等[40]的研究中，其在急性髓系白血病細(xì)胞HL-60、U937和KG-1a中誘導(dǎo)分化，并與其他表觀遺傳藥物顯示協(xié)同細(xì)胞毒性。除了細(xì)胞毒性作用，部分DKPs還能抑制一些腫瘤相關(guān)物質(zhì)的合成[36]。BRD4蛋白經(jīng)常在各種類型的腫瘤中表達(dá)，在Yu等[41]的報(bào)道中，基于脯氨酸的幾種五環(huán)、六環(huán)或二聚體DKPs可能是BRD4蛋白（含溴域蛋白4）的有效抑制劑。

3.3 抗菌與抑菌活性

Song等[42]在2018年分離并鑒定了3株對(duì)茄科雷爾氏菌（Ralstonia Solanacearum GMI1000）具有高抗菌活性的新菌株。在前期工作中發(fā)現(xiàn)大腸埃希菌（Escherichia coli GZ-34）對(duì)茄科雷爾菌相對(duì)防治效果最佳，達(dá)到82.27%，且疾病指數(shù)降低至最小，達(dá)到16.67。研究人員對(duì)大腸埃希菌GZ-34的抗青枯病活性做進(jìn)一步研究。在活性研究中發(fā)現(xiàn)cyclo（L-Pro-D-Ile）和cyclo（L-Pro-L-Phe）是大腸埃希菌GZ-34產(chǎn)生的主要抗青枯病活性物質(zhì)。且后者是該菌株對(duì)稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）孢子形成的抑制活性的關(guān)鍵成分。這些發(fā)現(xiàn)提示，大腸埃希菌中的環(huán)二肽可能被開(kāi)發(fā)為新的潛在抗菌劑，用于農(nóng)業(yè)防治。

2020年郭慶豐等[3]在研究抑菌活性中發(fā)現(xiàn)：化合物cyclo（Tyr-Gly）、cyclo（Pro-Gly）和cyclo（Pro-Val）對(duì)大腸埃希菌有較強(qiáng)的抑制作用，MIC分別為16.0、4.0和8.0 μg/mL。2022年，Youssef 等[43]在對(duì)曲菌屬中新發(fā)現(xiàn)的兩種化合物進(jìn)行的圓盤擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：cyclo（L-NMe-Leu-L-NAc-Phe）和cyclo（D-6-OH-Pro-D-Phe）對(duì)大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抑菌作用高于白念珠菌（Candida albicans）。目前已知的比較有效的是cyclo（Phe-Pro）（CFP）和為 cyclo（His-Pro）（CHP）。其中CFP主要是通過(guò)刺激外膜孔蛋白OmpU的表達(dá)進(jìn)而發(fā)揮作用；CHP主要通過(guò)增加抗促凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)，降低由氧化應(yīng)激所引起的細(xì)胞凋亡進(jìn)而發(fā)揮作用[44]。

此外，環(huán)二肽發(fā)揮抗菌、抑菌特性的機(jī)制之一是通過(guò)抑制生物膜的形成。2017年，Gowrishankar等[6]發(fā)現(xiàn)了cyclo（L-Leu-L-Pro）（CLP）能抑制細(xì)菌生物膜，但這并非殺菌作用。她們利用表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis RP62A）以及各種定性和定量分析來(lái)解釋CLP的抗菌膜功效的生物化學(xué)基礎(chǔ)。已知胞外聚合物（extracellular polymeric substances， EPS）及固著細(xì)胞群可以抵抗抗生素的作用以及宿主的免疫反應(yīng)。CLP通過(guò)調(diào)節(jié)EPS來(lái)抑制表皮葡萄球菌的生物膜機(jī)制如圖6所示。CLP主要通過(guò)3條途徑影響EPS的元素組成。第一，CLP下調(diào)icaA基因的水平來(lái)抑制PIA/PNAG的合成，減少多糖的合成以削弱菌膜的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。第二，已知絕大多數(shù)酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)。EPS的幾種胞外酶的存在利于抗生素的失活，且其能將高分子聚合物分解為低分子量產(chǎn)物，進(jìn)而提高生物膜基質(zhì)內(nèi)微量營(yíng)養(yǎng)素的利用率。CLP通過(guò)抑制蛋白質(zhì)的合成來(lái)阻止相關(guān)酶發(fā)揮作用。第三，CLP抑制eDNA的合成以阻礙生物膜結(jié)構(gòu)的建立。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，他們首先進(jìn)行MIC測(cè)定，結(jié)果顯示CLP在512 μg/mL濃度時(shí)對(duì)表皮葡萄球菌RP62A具有較強(qiáng)的體外抗菌作用。其次通過(guò)定量（XTT分析）和定性（共聚焦顯微鏡和掃描電子顯微鏡）分析，證實(shí)了CLP是通過(guò)改變EPS的固有官能團(tuán)和電荷來(lái)發(fā)揮抗菌膜作用的。EPS是表皮葡萄球菌生物膜形成的關(guān)鍵因素，而生物膜的形成是表皮葡萄球菌耐藥的主要原因。已知早期兒童齲病（early-childhood caries，ECC）的患病率及嚴(yán)重程度與白色念珠菌和變形鏈球菌（Streptococcus mutans）的菌斑和唾液攜帶有關(guān)。Simon等[45]的研究證實(shí)了cyclo（L-Phe-L-Tyr）、cyclo（D-Phe-D-Tyr）等對(duì)變形鏈球菌和白色念珠菌生物膜形成的抑制效果，但不影響真菌生長(zhǎng)。這個(gè)結(jié)論將有助于兒童齲病的進(jìn)一步治療。CLP的生物膜抑制效果可能會(huì)限制病原體對(duì)抗菌素/抗生素的耐藥性。因此開(kāi)發(fā)針對(duì)這種病原體的EPS的治療策略可能是一種比抗生素治療更有前景的替代方案。

3.4 抗氧化、降血糖的活性

已知CHP屬于內(nèi)源性環(huán)二肽，在抗氧化、降血糖等方面有明顯效果。2016年，樊紅秀等[46]對(duì)經(jīng)高溫高壓環(huán)化的玉米蛋白水解物進(jìn)行分離純化。在測(cè)定其體外降血糖活性的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)水解物中能夠很好地抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性最終達(dá)到降血糖目的主要分子是CHP；此外他們還通過(guò)并通過(guò)DPPH自由基清除活性實(shí)驗(yàn)和還原力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CHP是在其中對(duì)抗氧化起主要作用的分子。

在Minelli等[47]的研究中可以發(fā)現(xiàn)，PC12細(xì)胞通過(guò)表達(dá)保護(hù)自身免受氧化劑和親電化合物介導(dǎo)的應(yīng)激的基因來(lái)對(duì)環(huán)境損傷做出反應(yīng)。這些基因的誘導(dǎo)主要由Nrf2介導(dǎo)，在細(xì)胞核中，Nrf2與小Maf家族的成員形成異源二聚體，并識(shí)別并結(jié)合抗氧化反應(yīng)元件（ARE）啟動(dòng)子序列，從而促進(jìn)抗氧化基因的轉(zhuǎn)錄激活，如圖7所示。

迄今為止，已有3種可能的機(jī)制來(lái)解釋CHP的降血糖作用[48]。①腸促胰島素樣機(jī)制，促進(jìn)胰島素分泌。Mori等[49]在測(cè)定大鼠胰腺提取物中的CHP時(shí)推論cyclo（His-Pro）可能通過(guò)參與兒茶酚胺代謝、促進(jìn)胰島素及胃腸激素的分泌來(lái)參與糖代謝。②促進(jìn)腸道對(duì)鋅的吸收以及刺激肌肉細(xì)胞對(duì)葡萄糖的吸收的機(jī)制。已知Goto-Kakizaki大鼠模型是研究與肥胖無(wú)關(guān)的糖尿病的最佳模型。Song等[50]利用此模型研究鋅加CHP在遺傳性糖尿病中的抗高血糖活性時(shí)發(fā)現(xiàn)，CHP能通過(guò)刺激葡萄糖利用來(lái)改善血糖代謝。其過(guò)程可能是通過(guò)影響胰島素受體亞基的自磷酸化來(lái)刺激大鼠肌肉組織中的葡萄糖攝取。③基于對(duì)活性羰基物種（reactive carbonyl species，RCS）具有顯著的解毒作用的特性，促進(jìn)高級(jí)脂質(zhì)氧化終產(chǎn)物（advanced lipoxi-dation end-products，ALEs）的生成減少。已知持續(xù)的高血糖水平會(huì)促進(jìn)自由基的生成，而自由基會(huì)催化RCS的生成，最后造成β細(xì)胞的功能障礙[51]。這些生物效應(yīng)對(duì)抗氧化、降血糖等肽類藥物的研發(fā)具有提示意義。

3.5 改善神經(jīng)系統(tǒng)

環(huán)二肽可以通過(guò)抑制酶的活性來(lái)改善中樞神經(jīng)系統(tǒng)。申麗等[52]在研究裙帶菜內(nèi)生菌（Bacillus sp. QD4）發(fā)酵液的化學(xué)成分時(shí)發(fā)現(xiàn)，在400 μg/mL濃度時(shí)，cyclo（L-Pro-D-Tyr）和cyclo（L-Pro-L-Tyr）對(duì)AChE的抑制率分別為5.62％±1.63％和11.62％±2.29％。據(jù)研究表明，部分阿爾茨海默病 （alzheimerdisease，AD）患者的海馬和新皮質(zhì)的乙酰膽堿（acetylcholine，ACh）會(huì)顯著減少。上述2種環(huán)二肽抑制AChE活性，導(dǎo)致AChE的減少，達(dá)到明顯改善和緩解AD患者的癥狀的成果。這為研發(fā)AChE抑制劑提供了新方向。

此外，環(huán)二肽還可以發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)和神經(jīng)調(diào)節(jié)功能。已知cyclo（Gly-Pro）（CGP）對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有良好作用，包括抗健忘、促進(jìn)記憶作用[53]，神經(jīng)保護(hù)作用[54]。 Kaneko等[55]對(duì)口服CGP促進(jìn)大鼠中風(fēng)模型的任務(wù)學(xué)習(xí)展開(kāi)研究。已知達(dá)到學(xué)習(xí)標(biāo)準(zhǔn)所需天數(shù)的主要影響因素可能是病變區(qū)的大小。而且腦室下區(qū)（subventricular zone，SVZ）神經(jīng)干細(xì)胞數(shù)量的增加被認(rèn)為是皮質(zhì)損傷后新神經(jīng)元的來(lái)源。在該實(shí)驗(yàn)中，他們監(jiān)測(cè)到大鼠在口服CGP后損傷體積減小，干細(xì)胞數(shù)量增加。低CGP組大鼠學(xué)會(huì)任務(wù)的所需時(shí)間更短。據(jù)研究表明[56]：大多數(shù)內(nèi)源性IGF-1與IGFBP-3結(jié)合，少部分游離的IGF-1通過(guò)與IGF-1R結(jié)合，影響神經(jīng)元生長(zhǎng)、存活和生長(zhǎng)。CGP可以通過(guò)與內(nèi)源性IGF-1競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合IGFBP-3來(lái)調(diào)節(jié)游離的IGF-1。他們認(rèn)為是因?yàn)橥庠葱訡GP的添加調(diào)節(jié)了IGF-1的量。損傷區(qū)域附近的IGF-1濃度增加，促進(jìn)了學(xué)習(xí)。該報(bào)道首次闡述了口服最佳劑量的CGP可通過(guò)神經(jīng)可塑性和網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)的方式，促進(jìn)局灶性缺血性梗死大鼠的感覺(jué)-運(yùn)動(dòng)聯(lián)想學(xué)習(xí)，而非通過(guò)神經(jīng)保護(hù)作用。該研究結(jié)果提示CGP給藥有望成為加速腦損傷修復(fù)的策略[55]。

3.6 其他

除了上述的生物活性以外，已有研究還發(fā)現(xiàn)：cyclo（Leu-Phe）可作為凝膠因子組成超分子水凝膠[57]；cyclo（His-Pro）能調(diào)控食欲及能量代謝[58]、可抑制人類酗酒[59]；cyclo（Gly-Gln）對(duì)脫癮性腦綜合征有治療意義[60]；cyclo（Tyr-Tyr）對(duì)增加心率（HR）和冠脈血流量（CF）有幫助；cyclo（Phe-Tyr）可以降低HR、CF、左心室收縮壓（LVSP） 和心臟傳導(dǎo)速率[61]；cyclo（Ala-Leu）、cyclo（Ala-Ile）、cyclo（Ala-Val）、cyclo（Phe-Leu）、cyclo（Ala-Pro）、cyclo（Phe-Val）具有細(xì)胞周期抑制活性[62]；cyclo（Ala-Va1）、 cyclo（Gly-Leu）、cyclo（Tyr-Asp）可以能極顯著地促進(jìn) HUVECs血管生成（Plt;0.01或0.001）[63]；cyclo（Val-Pro）抑制泛細(xì)胞因子，有望成為新的抗炎藥等[54]。

4 總結(jié)和展望

綜上所述，環(huán)二肽的生物活性不僅限于抗菌、抗腫瘤，還包括影響抗氧化、降血糖、加速腦損傷修復(fù)等作用?，F(xiàn)在的科學(xué)技術(shù)越來(lái)越發(fā)達(dá)，我們能夠更容易地提取出環(huán)二肽類化合物，也能更容易合成環(huán)二肽類化合物，環(huán)二肽是環(huán)肽類化合物里最小，最簡(jiǎn)單的環(huán)肽化合物，也是最有特點(diǎn)的化合物。本課題組在對(duì)20余種化學(xué)合成的環(huán)二肽樣品進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)幾種對(duì)NIH-3T3細(xì)胞生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用的活性結(jié)構(gòu)。由此可見(jiàn)，通過(guò)合理設(shè)計(jì)與化學(xué)合成有望開(kāi)發(fā)出新型功能環(huán)二肽。

根據(jù)最新的文獻(xiàn)及數(shù)據(jù)總結(jié)了多種環(huán)二肽的生理活性，它們可以作為信息分子參與細(xì)胞間信息傳遞，也可以抗腫瘤、抑菌、抗氧化、降血糖和提高心血管系統(tǒng)能力等，如表1所示等。綜上所述，希望加強(qiáng)環(huán)二肽的生物學(xué)活性和藥理價(jià)值方面的研究，更加充分地了解它的特性，發(fā)掘它在抗菌、抗腫瘤藥物研發(fā)、農(nóng)業(yè)應(yīng)用等方面更大的潛力，創(chuàng)造出更大的應(yīng)用價(jià)值。

參 考 文 獻(xiàn)

Curtius T， Goebel F. Ueber glycocollaether[J]. J Fur Praktische Chemie-leipzig， 1888， 37（1）： 150-181.

周曉怡， 馬鋼華， 陳嘉穎， 等. 極地真菌Geomyces pannorum SA3-2-YM 次級(jí)代謝產(chǎn)物的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)， 2021， 33（1）： 48-56.

郭慶豐， 陳林， 尹震花， 等. 大黃魚(yú)共生菌Bacillus coagulans LL1103的代謝產(chǎn)物研究[J]. 微生物學(xué)報(bào)， 2020， 60（2）： 387-396.

Fenical W. Chemical studies of marine bacteria： Developing a new resource[J]. Chem Rev， 1993， 93（5）： 1673-1683.

Zhu H， Sun S W， Li H， et al. Significantly improved production of Welan gum by Sphingomonas sp. WG through a novel quorum-sensing-interfering dipeptide cyclo（L-Pro-L-Phe）[J]. Int J Biol Macromol， 2019， 126： 118-122.

Gowrishankar S， Pandian S K. Modulation of Staphylococcus epidermidis （RP62A） extracellular polymeric layer by marine cyclic dipeptide-cyclo（L-leucyl-L-prolyl） thwarts biofilm formation[J]. BBA-Biomembr， 2017， 1859（7）： 1254-1262.

Martins M B， Carvalho I. Diketopiperazines： Biological activity and synthesis. Tetrahedron， 2007， 63（40）： 9923-9932.

Santagada V， Fiorino F， Perissutti E， et al. A convenient strategy of dimerization by microwave heating and using 2， 5-diketopiperazine as scaffold[J]. Tetrahedron Lett， 2003， 44（6）： 1145-1148.

Bellezza I， Grottelli S， Mierla A L， et al. Neuroinflammation and endoplasmic reticulum stress are coregulated by cyclo（His-Pro） to prevent LPS neurotoxicity. Int J Biochem Cell Biol， 2014， 51： 159-169.

薛永常， 張成鎖， 李根. 非核糖體肽合成酶基因腺苷?；Y(jié)構(gòu)域序列克隆及分析[J]. 微生物學(xué)雜志， 2019， 39（1）： 20-25.

張京星， 姚婷婷， 劉晶， 等. 環(huán)二肽合酶生物合成途徑研究進(jìn)展[J]. 有機(jī)化學(xué)， 2019， 39（2）： 328-338.

魏貴香. 環(huán)二肽的研究進(jìn)展[J]. 當(dāng)代化工， 2020， 49（2）： 406-409.

Hu Y， Stumpfe D， Bajorath J. Lessons learned from molecular scaffold analysis[J]. J Chem Inf Model， 2011， 51（8）： 1742-1753.

Varin T， Schuffenhauer A， Ertl P， et al. Mining for bioactive scaffolds with scaffold networks： Improved compound set enrichment from primary screening data[J]. J Chem Inf Model， 2011， 51（7）： 1528-1538.

Ertl P. Intuitive ordering of scaffolds and scaffold similarity searching using scaffold keys[J]. J Chem Inf Model， 2014， 54（6）： 1617-1622.

Hu Y， Stumpfe D， Bajorath J. Computational exploration of molecular scaffolds in medicinal chemistry： Miniperspective[J]. J Med Chem， 2016， 59（9）： 4062-4076.

Kozlovsky A， Vinokurova N G， Adanin V M， et al. Piscarinines， new polycyclic diketopiperazine alkaloids from Penicillium piscarium NKM F-691[J]. Nat Prod Lett， 2000， 14（5）： 333-340.

Balachandra C， Padhi D， Govindaraju T. Cyclic dipeptide： A privileged molecular scaffold to derive structural diversity and functional utility[J]. Chem Med Chem， 2021， 16（17）： 2558-2587.

丁中濤， 保志娟， 楊雪瓊， 等. 金鐵鎖根中的3個(gè)環(huán)二肽[J]. 中國(guó)中藥雜志， 2003， 28（4）： 337-339.

楊子娟， 向蘭， 邢杰， 等. 環(huán)二肽的研究進(jìn)展[J]. 現(xiàn)代藥物與臨床， 2009， 24（2）： 73-81.

Antunes L C M， Ferreira R B R， Buckner M M C， et al. Quorum sensing in bacterial virulence[J]. Microbiology， 2010， 156（8）： 2271-2282.

Wang Y， Zheng Q， Li L， et al. Anti-quorum-sensing activity of tryptophan-containing cyclic dipeptides[J]. Mar Drugs， 2022， 20（2）： 85-99.

Sun S J， Liu Y C， Weng C H， et al. Cyclic dipeptides mediating quorum sensing and their biological effects in Hypsizygus marmoreus[J]. Biomolecules， 2020， 10（2）： 298.

Kim I H， Kim S Y， Park N Y， et al. Cyclo-（L-Phe-L-Pro）， a quorum-sensing signal of Vibrio vulnificus， induces expression of hydroperoxidase through a ToxR-LeuO-HU-RpoS signaling pathway to confer resistance against oxidative stress[J]. Infect Immun， 2018， 86（9）： 10-1128.

Gowrishankar S， Pandian S K， Balasubramaniam B， et al. Quorum quelling efficacy of marine cyclic dipeptide-cyclo （L-leucyl-L-prolyl） against the uropathogen Serratia marcescens[J]. Food Chem Toxicol， 2019， 123： 326-336.

Ding T， Li Y. Inhibition on quorum sensing of Pseudomonas fluorescens by cyclic dipeptide isolated from Aspergillus oryzae and its mechanism[J]. Chin J Bioprocess Eng， 2020， 18（2）： 234-244.

Yu X， Li L， Sun S， et al. A cyclic dipeptide from marine fungus Penicillium chrysogenum DXY-1 exhibits anti-quorum sensing activity[J]. ACS omega， 2021， 6（11）： 7693-7700.

邱海波， 曹素梅， 徐瑞華. 基于2020年全球流行病學(xué)數(shù)據(jù)分析中國(guó)癌癥發(fā)病率、死亡率和負(fù)擔(dān)的時(shí)間趨勢(shì)及與美國(guó)和英國(guó)數(shù)據(jù)的比較[J]. 癌癥， 2022， 41（4）： 165-177.

Lin W X， Chen T T， Yang H F， et al. Chemical constituents from the deep sea-derived Streptomyces xiamenensis MCCC 1A01570 and their effects on RXRα transcriptional regulation[J]. Nat Prod Res， 2020， 34（10）： 1461-1464.

Karanam G， Arumugam M K. Reactive oxygen species generation and mitochondrial dysfunction for the initiation of apoptotic cell death in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells by a cyclic dipeptide Cyclo （-Pro-Tyr）[J]. Mol Biol Rep， 2020， 47（5）： 3347-3359.

Jinendiran S， Teng W， Dahms H U， et al. Induction of mitochondria-mediated apoptosis and suppression of tumor growth in zebrafish xenograft model by cyclic dipeptides identified from Exiguobacterium acetylicum[J]. Sci Rep-UK， 2020， 10（1）： 13721.

Jo M J， Patil M P， Jung H I， et al. Cristazine， a novel dioxopiperazine alkaloid， induces apoptosis via the death receptor pathway in A431 cells[J]. Drug Develop Res， 2019， 80（4）： 504-512.

Ye X， Chai W， Lian X Y， et al. Novel propanamide analogue and antiproliferative diketopiperazines from Mangrove Streptomyces sp. Q24[J]. Nat Prod Res， 2017， 31（12）： 1390-1396.

Ferreira E G， Torres M D C M， Da Silva A B， et al. Prospecting anticancer compounds in Actinomycetes recovered from the sediments of Saint Peter and Saint Paul’s Archipelago， Brazil[J]. Chem Biodivers， 2016， 13（9）： 1149-1157.

強(qiáng)薇， 梅剛. 真菌中環(huán)二肽及其衍生物的抗腫瘤活性研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥房， 2014， 25（21）： 2007-2010.

Bojarska J， Mieczkowski A， Ziora Z M， et al. Cyclic dipeptides： The biological and structural landscape with special focus on the anti-cancer proline-based scaffold[J]. Biomolecules， 2021， 11（10）： 1515.

Yun K， Khong T T， Leutou A S， et al. Cristazine， a new cytotoxic dioxopiperazine alkaloid from the mudflat-sediment-derived fungus Chaetomium cristatum[J]. Chem Pharm Bull（Tokyo）， 2016， 64（1）： 59-62.

Isham C R， Tibodeau J D， Jin W， et al. Chaetocin： A promising new antimyeloma agent with in vitro and in vivo activity mediated via imposition of oxidative stress[J]. Blood， 2007， 109（6）： 2579-2588.

Isham C R， Tibodeau J D， Bossou A R， et al. The anticancer effects of chaetocin are independent of programmed cell death and hypoxia， and are associated with inhibition of endothelial cell proliferation[J]. Brit J Cancer， 2012， 106（2）： 314-323.

Lai Y S， Chen J Y， Tsai H J， et al. The SUV39H1 inhibitor chaetocin induces differentiation and shows synergistic cytotoxicity with other epigenetic drugs in acute myeloid leukemia cells[J]. Blood Cancer J， 2015， 5（5）： e313-e313.

Yu L， Ding W， Wang Q， et al. Induction of cryptic bioactive 2， 5-diketopiperazines in fungus Penicillium sp. DT-F29 by microbial co-culture[J]. Tetrahedron， 2017， 73（7）： 907-914.

Song S， Fu S， Sun X， et al. Identification of cyclic dipeptides from Escherichia coli as new antimicrobial agents against Ralstonia solanacearum[J]. Molecules， 2018， 23（1）： 214-227.

Youssef D T A， Shaala L A， Genta-Jouve G. Asperopipe-razines A and B： Antimicrobial and cytotoxic dipeptides from a tunicate-derived fungus Aspergillus sp. DY001[J]. Mar Drugs， 2022， 20（7）： 451.

盧曦元， 徐德昌. 環(huán)二肽生物活性的研究進(jìn)展[J]. 生物信息學(xué)， 2011， 9（4）： 289-291.

Simon G， Bérubé C， Voyer N， et al. Anti-biofilm and anti-adherence properties of novel cyclic dipeptides against oral pathogens[J]. Bioorgan Med Chem， 2019， 27（12）： 2323-2331.

樊紅秀， 劉鴻鋮， 董欣， 等. 玉米環(huán)二肽 （組氨酸-脯氨酸） 的分離純化， 結(jié)構(gòu)鑒定及其生物活性[J]. 食品科學(xué)， 2016， 37（21）： 53-60.

Minelli A， Conte C， Grottelli S， et al. Cyclo （His-Pro） promotes cytoprotection by activating Nrf2‐mediated up-regulation of antioxidant defence[J]. J Cell Mol Med， 2009， 13（6）： 1149-1161.

Regazzoni L， Fumagalli L， Artasensi A， et al. Cyclo （his-pro） exerts protective carbonyl quenching effects through its open histidine containing dipeptides[J]. Nutrients， 2022， 14（9）： 1775.

Mori M， Pegues J， Prasad C， et al. Histidyl-proline diketopiperazine cyclo （His-Pro）： Identification and characterization in rat pancreatic islets[J]. Biochem Bioph Res Co， 1983， 115（1）： 281-286.

Song M K， Hwang I K， Rosenthal M J， et al. Anti-hyperglycemic activity of zinc plus cyclo （his-pro） in genetically diabetic Goto-Kakizaki and aged rats[J]. Exp Biol Med， 2003， 228（11）： 1338-1345.

Zhang P， Li T， Wu X， et al. Oxidative stress and diabetes： antioxidative strategies[J]. Front Med-PRC， 2020， 14： 583-600.

申麗， 秦云， 李明， 等. 裙帶菜內(nèi)生菌Bacillus sp. QD-4 發(fā)酵液化學(xué)成分研究[J]. 中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2015， 12（31）： 53-56.

Gudasheva T A， Boyko S S， Akparov V K， et al. Identification of a novel endogenous memory facilitating cyclic dipeptide cyclo-prolylglycine in rat brain[J]. FEBS Lett， 1996， 391（1-2）： 149-152.

Ahil S B， Hira K， Shaik A B， et al. L-Proline-based-cyclic dipeptides from Pseudomonas sp.（ABS-36） inhibit pro-inflammatory cytokines and alleviate crystal-induced renal injury in mice[J]. Int Immunopharmacol， 2019， 73： 395-404.

Kaneko H， Namihira M， Yamamoto S， et al. Oral administration of cyclic glycyl-proline facilitates task learning in a rat stroke model[J]. Behav Brain Res， 2022， 417： 113561.

Guan J， Gluckman P， Yang P， et al. Cyclic glycine-proline regulates IGF-1 homeostasis by altering the binding of IGFBP-3 to IGF-1[J]. Sci Rep-UK， 2014， 4（1）： 4388.

Yang M Y， Xing R R， Shen G Z， et al. A versatile cyclic dipeptide hydrogelator： Self-assembly and rheology in various physiological conditions[J]. Colloid Surface A， 2019， 572： 259-265.

Kow L M， Pfaff D W. The effects of the TRH metabolite cyclo （His-Pro） and its analogs on feeding[J]. Pharmacol Biochem Be， 1991， 38（2）： 359-364.

Prasad C. Role of endogenous cyclo （His-Pro） in voluntary alcohol consumption by alcohol-preferring C57BL mice[J]. Peptides， 2001， 22（12）： 2113-2117.

G?ktalay G， Cavun S， Levendusky M C， et al. Glycyl-glutamine inhibits nicotine conditioned place preference and withdrawal[J]. Eur J Pharmacol， 2006， 530（1-2）： 95-102.

Kilian G， Jamie H， Brauns S C A， et al. Biological activity of selected tyrosine-containing 2， 5-diketopiperazines[J]. Pharmazie， 2005， 60（4）： 305-309.

韓冰， 李文欣， 崔承彬. 黃直絲鏈霉菌 18522 生產(chǎn)的環(huán)二肽類細(xì)胞周期抑制劑[J]. 沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2015， 32（2）： 107-110.

Wang X L， Xiang B， Li Y M， et al. Water soluble compounds from Periplaneta americana and their angiogenesis activity[J]. Nat Prod Res Develop， 2018， 29（12）： 2004-2009.