石榴籽油不同極性部位的分離、納米乳制備及生物學(xué)活性

摘要：目的 將石榴籽油（pomegranate seed oil， PSO）分離為不同極性部位，并比較生物活性。方法 采用硅膠柱層析法分離出PSO甘油三酯（pomegranate seed oil triglyceride， PSO-TG）和甘油二酯（pomegranate seed oil diglycerides， PSO-DG），用無(wú)水乙醇提取PSO，制得富含多酚的PSO（polyphenol enriched pomegranate seed oil， P-PSO）；用自由基清除法考察各油的抗氧化活性；采用濾紙片法檢測(cè)油的抗菌能力；將4種油制成納米乳，考察各納米乳對(duì)α-糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性。結(jié)果 PSO、PSO-DG、PSO-TG和P-PSO的極性順序?yàn)镻-PSOgt;PSO-DGgt;PSOgt;PSO-TG；對(duì)DPPH自由基清除率為P-PSOgt;PSO-TGgt;PSOgt;PSO-DG；PSO-DG對(duì)枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）的抑制活性顯著高于其余3種油（Plt;0.05），PSO對(duì)少孢哈薩克斯坦酵母（Kazachstania exigua）有最強(qiáng)的抗菌作用；納米乳對(duì)α-糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用為PSO-DGgt;PSOgt;P-PSOgt;PSO-TG。結(jié)論 油的極性影響著其對(duì)細(xì)菌質(zhì)膜和細(xì)胞壁的穿透能力，以及與酶的親和作用，是油發(fā)揮生物活性的關(guān)鍵因素。

關(guān)鍵詞：石榴籽油；甘油二酯；甘油三酯；多酚油；生物活性

中圖分類(lèi)號(hào)：R978.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Isolation， nanoemulsion preparation and biological activity of pomegranate seed oil with different polarity

Luo Jinhua1， Yu Jianqiao1， Liu Hui1， Liang Li1， Zhang Ying1， Xie Hua2， and Yao Qian1

（Key Laboratory for Exploitation of Medicinal and Edible Plant Resources in Sichuan Province， Chengdu University， Chengdu 610106;

2 Sichuan Provincial Institute for Drug Control/NMPA Key Laboratory for Technical Research

on Drug Products In Vitro and In Vivo Correlation， Chengdu 611731）

Abstract Objective The pomegranate seed oil （PSO） into fractions with different polarities was isolated to compare their biological activities. Methods PSO triglyceride （PSO TG） and PSO diglyceride （PSO DG） were isolated by silica gel column chromatography， respectively. Polyphenol-enriched PSO （P-PSO） was prepared by extracting PSO with anhydrous ethanol. The antioxidant activity of the oils was estimated by the radical-scavenging method. The antibacterial capacity was assessed using the filter paper approach. The four oils were formulated into nanoemulsions， and the inhibitory effects of nanoemulsions against α-glucoside and α-amylase were examined， respectively. Results The polarity order was P-PSOgt;PSO-DGgt;PSOgt;PSO-TG. The scavenging rate against DPPH radicals was P-PSOgt;PSO-TGgt;PSOgt;PSO-DG. PSO-DG had a significantly higher inhibitory effect than the other oils against Bacillus subtilis （Plt;0.05）， while PSO possessed the strongest antibacterial activity against yeast （Kazachstania exigua）. The inhibitory strength of nanoemulsions on α-glucoside and α-amylase was PSO-DGgt;PSOgt;P-PSOgt;PSO-TG. Conclusion The polarity of oil could influence its capacity to penetrate through the plasma membrane and cell wall of bacteria， as well as its affinity with enzymes. It is a key factor in the biological activity of oil.

Key words Pomegranate seed oil; Triglyceride; Diglyceride; Polyphenol-enriched oil; Biological activity

石榴（Punica granatum L.）為石榴科多年生落葉灌木或喬木植物。目前，石榴的藥用價(jià)值主要是石榴皮，關(guān)于石榴籽的認(rèn)識(shí)和使用并不充分。石榴籽約占石榴總重11%，由石榴籽提取而得的石榴籽油（pomegranate seed oil， PSO）富含不飽和脂肪酸，含量為石榴籽重量的7.6%～20%[1]；其中，石榴酸為PSO最主要的不飽和脂肪酸，在脂肪酸中的占比超過(guò)60%[2]；PSO中的脂肪酸多以甘油酯的形式存在。此外，PSO富含多酚[3]。研究表明，PSO具有抗氧化，抗菌，降血糖以及抗腫瘤等作用[4-5]，有極大的藥用價(jià)值。弄清PSO發(fā)揮作用的影響因素對(duì)開(kāi)發(fā)利用PSO具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

本文采用硅膠柱對(duì)PSO進(jìn)行分離洗脫，得到PSO甘油三酯（triglycerides， TG）和甘油二酯（diglycerides， DG）；以無(wú)水乙醇為溶劑提取PSO制得富含多酚的PSO（polyphenolenriched PSO， P-PSO）；以PSO為對(duì)照，考察3種油的體外抗氧化、抗菌和降糖活性，以闡明PSO不同極性部位對(duì)其藥理作用的貢獻(xiàn)，為PSO物質(zhì)基礎(chǔ)研究及相關(guān)高效低毒產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

7890B氣相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；WAY-2WAJ阿貝折光儀（上海易測(cè)儀器設(shè)備有限公司）；DNM-9602G全自動(dòng)酶標(biāo)儀（北京普朗有限公司）；DHP060型恒溫培養(yǎng)箱（上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司）；SHZ-B水浴恒溫振蕩器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）；RE5203型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；CT14RD臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（上海天美生化儀器設(shè)備工程有限工程）；UV5100B型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海元析儀器有限公司）；KQ-400KDE型高功率數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ZEN3600型激光粒度儀（英國(guó)馬爾文儀器有限公司）。

1.2 材料與試劑

石榴籽（批號(hào)010170101，中藥世家中藥材有限公司）；石榴酸對(duì)照品（實(shí)驗(yàn)室自制，經(jīng)GC分析純度大于95%）；癸酸甲酯、1.1-二苯基-2-苦肼基（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl， DPPH）（上海麥克林生化科技有限公司）；1-（4-硝基苯基）-1，2，3-丙三醇（p-nitrophenyl-glycerol， pNPG）、α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶（上海源葉生物科技有限公司）；聚氧乙烯蓖麻油植物油（上海阿拉丁公司）。大腸埃希菌（Escherichia coli）、枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）和少孢哈薩克斯坦酵母（Kazachstania exigua，簡(jiǎn)稱少孢酵母）由成都大學(xué)生物實(shí)驗(yàn)中心提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 PSO的提取

取石榴籽，粉碎，過(guò)80目篩，稱取一定量的粉末，按1：10的比例加入石油醚，在40 ℃下以400 W功率超聲提取35 min，抽濾，40 ℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去石油醚，制得PSO[6]。

2.2 PSO-TG和PSO-DG的分離

以硅膠為填充劑裝柱，按硅膠重量的10%將PSO添加至柱頭，使用二氯甲烷-正己烷（2：3）、二氯甲烷、二氯甲烷-乙醚（35：1）、二氯甲烷-乙醚（9：1）、二氯甲烷-甲醇（10：1）及二氯甲烷-甲醇（1：1至1：20）進(jìn)行洗脫[7]，洗脫量為2倍柱體積，以每管3 mL收集洗脫液，濃縮，進(jìn)行TLC分析，展開(kāi)劑為正己烷-乙醚-醋酸（45：25：1），碘蒸氣顯色。由斑點(diǎn)位置確定洗脫物組成[7]，合并PSO-TG和PSO-DG，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，稱重，與上樣量作比較，計(jì)算TG和DG在PSO中的含量。

2.3 P-PSO的制備

取PSO 5 mL，加入25 mL無(wú)水乙醇，混勻，于40 ℃下超聲提取40 min，取醇層；平行操作3次，合并提取液，于50 ℃下減壓蒸發(fā)除去乙醇，得P-PSO；稱重，計(jì)算P-PSO在PSO中的比例。

2.4 介電常數(shù)與折光率測(cè)定

取不同極性部位的PSO，用自制電容板測(cè)定介電常數(shù)；用阿貝折光儀測(cè)定樣品折光率。

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 脂肪酸組成

取PSO、PSO-TG、PSO-DG及P-PSO各15 mg，置具塞試管中，加入4 mL濃度為0.5 mol/L的甲醇-氫氧化鈉溶液，在70 ℃水浴下加熱5 min進(jìn)行甲酯化反應(yīng)，冷卻至室溫，甲醇定容至4 mL，用濃HCl調(diào)pH至4～5，加入癸酸甲酯內(nèi)標(biāo)，用正己烷提取3次，每次2 mL，合并提取液，濾過(guò)，取續(xù)濾液1 μL，注入GC儀。

GC測(cè)定條件為：載氣為高純氮?dú)猓髁?/p>

1.2 mL/min，進(jìn)樣口溫度270 ℃，分流比20：1；FID溫度310 ℃。柱溫采用程序升溫，初始溫度90 ℃，保持3 min，以15 ℃/min升至180 ℃，保持10 min，以2.5 ℃/min升至250 ℃。以峰面積歸一化法計(jì)算各脂肪酸百分含量[8]。

2.5.2 多酚含量測(cè)定

分別取0.5 mL PSO及P-PSO，依次加入3.5 mL稀釋10倍的Folin酚溶液，混勻，靜置5 min，加7.5%碳酸鈉溶液（W/V）2.5 mL，混勻，30 ℃下反應(yīng)30 min，用蒸餾水稀釋至10 mL，搖勻，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值[9]。以沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算多酚含量。

2.6 PSO不同極性部位的抗氧化活性

用無(wú)水乙醇配制濃度為0.02 mg/mL的DPPH自由基溶液。取不同體積PSO、PSO-TG、PSO-DG及P-PSO，分別置于試管中，加入200 μL異丙醇使溶解，用無(wú)水乙醇補(bǔ)充至1 mL，混勻，加DPPH溶液2 mL，搖勻，室溫暗處放置30 min，于517 nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)。以無(wú)水乙醇作空白對(duì)照，同前操作，測(cè)得的吸光度值記為Ao。按照公式（1）計(jì)算DPPH清除率[10]；維生素E（VE）為陽(yáng)性對(duì)照。

清除率（%）=（A0-A）/A0×100% （1）

2.7 PSO不同極性部位的抗菌活性

大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌使用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)，少孢酵母使用酵母浸出粉胨-葡萄糖培養(yǎng)。以DMSO為溶劑分別稀釋各油得到濃度為60%、30%和15%的系列稀釋液。吸取10 μL樣品溶液，加至直徑約為7 mm的濾紙片上；各細(xì)菌用培養(yǎng)液稀釋至密度為105 CFU/mL，取100 μL，平鋪于培養(yǎng)基上，待上層液體膠凝后，將紙片放入其中，于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。以溶劑DMSO為陰性對(duì)照，以3 mg/mL頭孢噻肟鈉為大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌的陽(yáng)性對(duì)照；少孢酵母的陽(yáng)性對(duì)照為10 mg/mL水楊酸。每個(gè)濃度水平重復(fù)測(cè)定3次[10]。

2.8 PSO不同極性部位的降糖活性

2.8.1 納米乳的制備

分別以PSO、PSO-TG、PSO-DG及P-PSO為油相，聚乙二醇400為助乳化劑，聚氧乙烯蓖麻油為乳化劑，按植物油-乳化劑-助乳化劑（V：V：V，1：4：4）將3者混合均勻，在40 ℃攪拌下滴加3倍體積的蒸餾水，加畢，繼續(xù)攪拌30 min，制得呈藍(lán)色乳光、油濃度為1 mg/mL的納米乳[6]。用蒸餾水稀釋納米乳，使得油濃度為0.0625～1 mg/mL。同時(shí)按處方制備僅含聚乙二醇400和聚氧乙烯蓖麻油的對(duì)照溶液，并同法稀釋。

2.8.2 粒徑與Zeta電位

采用馬爾文激光粒度測(cè)定儀測(cè)定各納米乳的粒徑及Zeta電位。

2.8.3 對(duì)α-糖苷酶的抑制活性

取96孔板，分別加入不同濃度樣品液50 μL，

0.1 U/mL的α-葡萄糖苷酶100 μL，混勻，37 ℃下水浴加熱15 min，加1 mmol/L的底物pNPG 50 μL，37 ℃下繼續(xù)反應(yīng)15 min，加0.2 mmol/L碳酸鈉溶液50 μL終止反應(yīng)，冷卻，于405 nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值（A1）；分別以0.1 mmol/L PBS溶液（pH6.8）和各對(duì)照溶液50 μL代替pNPG及樣品溶液，同法操作，測(cè)得的吸光度值分別記為Ab（背景值）和A0，按公式（2）計(jì)算對(duì)α-糖苷酶的抑制率[11]；以阿卡波糖為陽(yáng)性對(duì)照。

抑制率（%）=（A1-Ab）/A0×100%（2）

2.8.4 對(duì)α-淀粉酶的抑制活性

取96孔板，分別加入pH6.8 PBS溶液50 μL，各樣品溶液25 μL和0.27 mg/mL的α-淀粉酶溶液25 μL，于37 ℃下孵育10 min；加1%淀粉溶液（W/V）50 μL，繼續(xù)37 ℃下孵育30 min。加3，5-二硝基水楊酸試液100 μL，85～90 ℃下水浴加熱10 min，冷至室溫，在540 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度值（A1）；分別以PBS緩沖液及各對(duì)照溶液代替二硝基水楊酸試液和樣品溶液，同法操作，測(cè)得Ab和A0，按公式（2）計(jì)算對(duì)α-淀粉酶的抑制率[12]。

3 結(jié)果

3.1 PSO-TG、PSO-DG和P-PSO的制備

PSO-TG與PSO-DG的薄層鑒別見(jiàn)圖1。由圖可知，TG與DG的分離較為完全。PSO-TG、PSO-DG和P-PSO在PSO中的占比分別為76.16%、6.77%及29.25% ，可見(jiàn)，PSO中的脂肪酸主要以甘油三酯的形式存在，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[7]。

3.2 介電常數(shù)和折光率

結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可知，4種油的極性順序?yàn)镻-PSOgt;PSO-DGgt;PSOgt;PSO-TG，折光率與油的極性也有較好的相關(guān)性。

3.3 含量測(cè)定

3.3.1 脂肪酸組成

對(duì)PSO、PSO-DG、PSO-TG及P-PSO重復(fù)測(cè)定6次，各脂肪酸相對(duì)百分含量的RSD均小于3%，說(shuō)明方法有較好的重復(fù)性。4種油的脂肪酸組成見(jiàn)表2。由表可知，石榴酸在4種油中占比都在78%以上，其中在PSO及PSO-TG中達(dá)到85%以上，此外，極性油PSO-DG和P-PSO中油酸和亞油酸比例較大。

3.3.2 多酚含量

多酚測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=0.0138X+0.0274 （R2=0.9995），沒(méi)食子酸在1.25～40 μg/mL范圍內(nèi)，濃度與吸光度值的線性關(guān)系良好。P-PSO與PSO的多酚含量測(cè)定結(jié)果分別為（1471.2±3.82）及（138.24±1.70） μg/mL。可見(jiàn)P-PSO較原油多酚含量提高了9.6倍。

3.4 不同極性PSO的抗氧化活性

結(jié)果見(jiàn)圖2。在濃度0.3%時(shí)4種油對(duì)DPPH自由基的清除能力為P-PSOgt;PSO-TGgt;PSOgt;PSO-DG，PSO-DG清除率顯著低于另外3種油。在濃度小于0.8%時(shí)，4種PSO的清除率均顯著高于VE油（Plt;0.05）；濃度達(dá)0.8%時(shí)，除P-PSO清除率較高外，其余3種油的抗氧化活性與VE油類(lèi)似（P＞0.05）。這是因?yàn)?種油在濃度為0.4%時(shí)清除率即達(dá)平衡，此后繼續(xù)增大油濃度，清除率無(wú)明顯變化；VE油在含量0.8%以下清除率隨濃度增加而直線增大，在0.8%時(shí)達(dá)平衡，各油平衡狀態(tài)的最大清除率差異較小。

3.5 PSO不同極性部位的抗菌活性

不同極性PSO對(duì)3種菌的抑菌活性如圖3所示。油的抑菌活性隨濃度增大而增強(qiáng)；各PSO對(duì)不同細(xì)菌的抗菌活性有較大差異；對(duì)大腸埃希菌，對(duì)照頭孢噻肟鈉的抑菌作用顯著高于各植物油（Plt;0.05）；濃度為15%時(shí)不同PSO的抑菌活性相當(dāng)；濃度30%時(shí)，PSO-TG對(duì)大腸埃希菌的抑制作用顯著低于另外3種油（Plt;0.05）；濃度60%時(shí)抑菌順序?yàn)镻SO DGgt;PSO， P-PSOgt;PSO TG（Plt;0.05），TG表現(xiàn)出了最弱的抑菌能力。

對(duì)革蘭陽(yáng)性菌枯草芽胞桿菌，頭孢噻肟鈉的抑菌作用顯著高于各植物油（Plt;0.05）；各PSO不同濃度下的抑菌活性均為PSO DGgt;PSO， P-PSOgt;PSO TG（Plt;0.05），DG作用最強(qiáng)，TG活性最弱。

對(duì)少孢酵母，水楊酸的抑菌活性顯著高于各植物油（Plt;0.05）；在各濃度下，PSO具有最強(qiáng)的抑菌作用，其次為PSO-DG。

3.6 PSO不同極性部位對(duì)糖苷酶的抑制作用

3.6.1粒徑與Zeta電位

PSO不同極性部位制備的納米乳的粒徑與Zeta電位如表3所示。各納米乳粒徑均在30 nm以下，PDI在0.2左右，說(shuō)明粒徑較均勻；PSO與PSO-DG納米乳基本不帶電，PSO-TG與P-PSO納米乳荷少量負(fù)電。

3.6.2 對(duì)α-糖苷酶的抑制活性

PSO不同極性部位納米乳對(duì)α-糖苷酶的抑制作用如圖4A所示。在濃度低于0.25 mg/mL時(shí)，隨著油濃度的增加，納米乳對(duì)糖苷酶的抑制活性增大；當(dāng)濃度達(dá)0.25 mg/mL，抑制率達(dá)平衡，此后繼續(xù)增大油濃度，抑制率基本保持不變。阿卡波糖的抑制率顯著高于不同極性的PSO納米乳（Plt;0.05），各納米乳的抑制率順序?yàn)镻SO-DGgt;PSOgt;P-PSOgt;PSO-TG。

3.6.3 對(duì)淀粉酶的抑制活性

PSO不同極性部位納米乳對(duì)α-淀粉酶的抑制作用如圖4B所示。不同極性的PSO納米乳對(duì)淀粉酶的抑制作用也呈現(xiàn)濃度依賴性，隨濃度增加而增大，當(dāng)濃度升至0.5 mg/mL 時(shí)，抑制率達(dá)穩(wěn)態(tài)，繼續(xù)增大油濃度，抑制率基本保持不變。阿卡波糖對(duì)淀粉酶的抑制活性顯著高于不同極性的PSO納米乳（Plt;0.05），各納米乳的抑制作用為PSO-DGgt;PSOgt;P-PSOgt;PSO-TG。

4 討論

甘油酯的極性順序?yàn)楦视鸵恢琯t;DGgt;TG，因此在硅膠薄層板上Rf值為T(mén)Ggt;DGgt;甘油一酯；隨著洗脫液極性逐漸增大，依次洗脫下蠟質(zhì)、TG、DG和甘油一酯，根據(jù)斑點(diǎn)位置可對(duì)甘油酯的種類(lèi)進(jìn)行判斷，合并同一類(lèi)型的洗脫液，減壓蒸餾除去溶劑，制得PSO-TG和PSO-DG；由于甘油一酯含量過(guò)低，而未對(duì)其進(jìn)行分析。

介電常數(shù)主要反映分子的偶極矩，偶極矩越大，分子的極性越大；折光率為光線在空氣與介質(zhì)中的傳播速率比；介質(zhì)澄清度越高，折光率越大，根據(jù)此性質(zhì)，可以檢測(cè)PSO中的油和蠟質(zhì)含量[13]；折光率還與油中的不飽和脂肪酸含量相關(guān)，不飽和脂肪酸含量越大，折光率越高[14]。PSO與PSO-TG折光率近似，但介電常數(shù)相差較大，說(shuō)明介電常數(shù)能更準(zhǔn)確地反映油的極性；P-PSO與PSO-DG均具有較大的折光率，表明極性大的油澄清度較高。

4種油對(duì)DPPH自由基的清除能力為P-PSOgt;PSO-TGgt;PSOgt;PSO-DG，P-PSO中富含多酚，PSO-TG和PSO-DG的石榴酸含量分別為最高和最低，顯示不同PSO的抗氧化活性與多酚和石榴酸含量有較大的相關(guān)性，實(shí)驗(yàn)同時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同極性PSO的抗氧化活性均顯著高于VE油，這可能與PSO的主成分石榴酸有關(guān)，石榴酸為含3個(gè)共軛雙鍵的C18酸，極易氧化，對(duì)自由基有很強(qiáng)的清除能力[15]。

此外，石榴酸能夠抑制不同類(lèi)型細(xì)菌的生長(zhǎng)，其在高濃度下對(duì)革蘭陰性菌的抑制作用可與頭孢噻肟鈉媲美[8]。PSO-DG石榴酸含量相對(duì)較低，但其對(duì)大腸埃希菌和枯草芽胞桿菌的抗菌活性顯著高于其余3種油（Plt;0.05）；PSO-TG石榴酸含量為最高，而抑制3種菌的作用為最弱，顯示了油的極性對(duì)抗菌活性的重要性。適宜的極性利于油穿過(guò)細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，發(fā)揮抗菌作用，引起細(xì)菌死亡；PSO-TG極性過(guò)小，而P-PSO極性太大，均不利于與細(xì)菌的相互作用，導(dǎo)致其抑菌活性弱于PSO-DG和PSO。

董葛等[16]采用濾紙片法考察了艾油與枸杞提取液聯(lián)合使用對(duì)不同菌株的抗菌活性，發(fā)現(xiàn)對(duì)單一菌株，抑菌順序?yàn)榘蚲t;聯(lián)合應(yīng)用gt;枸杞提取液。彭燕等[17]的研究結(jié)果顯示，香草根油對(duì)金黃色葡萄球菌和枯草芽胞桿菌有很強(qiáng)的抑制作用，對(duì)大腸埃希菌無(wú)作用；梁青等[18]考察了山蒼子油對(duì)白假絲酵母的抗菌活性，發(fā)現(xiàn)山蒼子油可能通過(guò)破壞細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使其大分子外泄，引起細(xì)菌死亡。細(xì)菌對(duì)不同植物油的敏感性有較大差異，植物油破壞細(xì)菌細(xì)胞壁的能力與油的哪些性質(zhì)相關(guān)，值得深入探討；本實(shí)驗(yàn)顯示，油的極性將影響油與細(xì)菌細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的相互作用，是其發(fā)揮藥效的關(guān)鍵因素，為開(kāi)發(fā)以植物油為基礎(chǔ)的藥物與保健食品提供了重要指導(dǎo)。

由于油不溶于水相介質(zhì)，加入糖苷酶和淀粉酶體系引起溶液渾濁，而無(wú)法進(jìn)行定量分析。因此將PSO的不同極性部位制成納米乳，再加至酶測(cè)定體系，并以不含油、僅含乳化劑和助乳化劑的溶液為對(duì)照。納米乳在水中溶解度好，體系澄清，可采用比色法進(jìn)行定量分析。PSO-DG納米乳對(duì)α-糖苷酶和α-淀粉酶有最強(qiáng)的抑制作用，其次為PSO納米乳，PSO-TG納米乳抑制能力最弱，表明適宜的極性也是PSO系列納米乳抑制酶活性的關(guān)鍵，PSO-TG脂溶性過(guò)大，P-PSO極性過(guò)大，均降低了與酶的親和力，引起抑制力減弱。此外，PSO-TG與P-PSO荷少量負(fù)電荷，可能也影響了與酶的結(jié)合。PSO系列納米乳對(duì)二種酶均顯示了抑制活性，可作為包載降糖藥的載體，發(fā)揮協(xié)同降糖的作用。

綜上，4種油的極性順序?yàn)镻-PSOgt;PSO-DGgt;PSOgt;PSO-TG，抗氧化活性為P-PSOgt;PSO-TGgt;PSOgt;PSO-DG，表明多酚和石榴酸是PSO抗氧化的主要成分；PSO-DG對(duì)枯草芽胞桿菌有最強(qiáng)的抑制作用，PSO對(duì)少孢酵母抑制活性最強(qiáng)，PSO-TG的抗菌作用最弱，表明油的抑菌效果與其極性密切相關(guān)；納米乳對(duì)α-糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用為PSO-DGgt;PSOgt;P-PSOgt;PSO-TG，說(shuō)明油的極性也是影響納米乳抑酶作用的關(guān)鍵因素。本實(shí)驗(yàn)顯示PSO的多種生物活性與其極性密切相關(guān)。

參 考 文 獻(xiàn)

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