基于EP9-A3文件對(duì)兩儀器測(cè)定血清甲胎蛋白、癌胚抗原結(jié)果的可比性評(píng)價(jià)

摘要：目的" 探討甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）在2檢測(cè)系統(tǒng)上測(cè)定結(jié)果的可比性。方法" 以羅氏cobas e 601全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為參比方法（X），透景Tesmi F4000全自動(dòng)流式熒光發(fā)光免疫分析儀作待測(cè)方法（Y），選擇待測(cè)方法（Y）的檢測(cè)線性內(nèi)樣本（AFP、CEA各40例）在兩儀器上測(cè)定。根據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）的EP9-A3文件，以1/2TEa（TEa為國(guó)家衛(wèi)生健康委臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)審允許總誤差）為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方法比對(duì)、偏倚評(píng)估及臨床可接受程度分析。結(jié)果" 兩儀器所測(cè)AFP、CEA結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），計(jì)算所得偏倚均在允許誤差范圍內(nèi)（均≤12.5%），線性回歸方程的相關(guān)性良好（r2＞0.95），在醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚為臨床可接受。結(jié)論" 在透景流式熒光發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定范圍內(nèi)，AFP和CEA在兩個(gè)儀器中的檢測(cè)結(jié)果呈顯著相關(guān)，二者在兩個(gè)醫(yī)學(xué)決定水平上的相對(duì)偏差在臨床可接受水平之內(nèi)，即兩臺(tái)檢測(cè)儀器間的測(cè)定果可比性良好，各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)可據(jù)此來選擇合適的儀器。

關(guān)鍵詞：EP9-A3；甲胎蛋白；癌胚抗原；測(cè)定方法；偏倚評(píng)估

中圖分類號(hào)：R446.1；R735.7" " " " " " " " " " " " " " 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A" " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.05.025

文章編號(hào)：1006-1959（2024）05-0138-05

Comparability of the Results of Serum Alpha-fetoprotein and Carcinoembryonic Antigen Measured

by the Two Instruments Based on the EP9-A3 Document

NING Ping1，WANG Xue-ting1，LI Fen-rong1，HE Jing1，XU Xiao-jie1，WANG Hong-hong2，YUN Fa-chao1

（1.Department of Laboratory Medicine，Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine，Urumqi 830000，Xinjiang，China;

2.Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，General Hospital of Xinjiang Military Region，

Urumqi 830000，Xinjiang，China）

Abstract：Objective" To investigate the comparability of the results of alpha-fetoprotein （AFP） and carcinoembryonic antigen （CEA） on two detection systems.Methods" The Roche cobas e 601 automatic chemiluminescence immunoassay analyzer was used as the reference method （X）， and the Tesmi F4000 automatic flow fluorescence immunoassay analyzer was used as the test method （Y）. The detection linear samples （AFP， CEA， with 40 cases in each sample） of the test method （Y） were selected and measured on the two instruments. According to the EP9-A3 document of the American Clinical and Laboratory Standards Institute （CLSI）， 1/2TEa （TEa is the total allowable error of the external quality assessment of the National Health Commission Clinical Laboratory Center） was used as the evaluation standard to compare the test results， evaluate the bias and analyze the clinical acceptability.Results" The results of AFP and CEA measured by the two instruments were not statistically significant （Pgt;0.05）. The calculated bias was within the allowable error range （all≤12.5%）. The correlation of the linear regression equation was good （r2gt;0.95）， and the bias at the medical decision level was clinically acceptable.Conclusion" Within the measurement range of the flow-through fluorescence luminescence detection system， the detection results of AFP and CEA in the two instruments are significantly correlated， and the relative deviations of the two at the two medical decision levels are within the clinically acceptable level， that is， the measurement results between the two detection instruments are comparable， and medical institutions at all levels can choose the appropriate instrument accordingly.

Key words：EP9-A3;Alpha-fetoprotein;Carcinoembryonic antigen;Assay method;Bias assessment

目前，各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)的臨床實(shí)驗(yàn)室為滿足檢測(cè)需求，常會(huì)為同一項(xiàng)目配置不同品牌、不同型號(hào)、不同檢測(cè)方法的分析儀[1]，但I(xiàn)SO/15189《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可》有相應(yīng)的要求，同一檢驗(yàn)項(xiàng)目在不同系統(tǒng)間的檢驗(yàn)結(jié)果需具有可比性[2]。美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)（CLSI）發(fā)布的EP9-A3文件，為廠家和臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供了方法學(xué)比對(duì)和偏移評(píng)估的驗(yàn)證流程[3]。現(xiàn)對(duì)羅氏cobas e 601全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（羅氏分析儀）和透景Tesmi F4000全自動(dòng)流式熒光發(fā)光免疫分析儀（透景分析儀）的AFP、CEA檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行方法比對(duì)，以了解兩種檢測(cè)系統(tǒng)間的可比性和偏倚情況[4]，旨在為各級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室選擇合適分析儀提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1一般資料" 樣本來源于烏魯木齊市某中醫(yī)三甲醫(yī)院2022年9月-2023年1月的住院、體檢、門診患者40例。本研究經(jīng)過院倫理委員會(huì)審批，對(duì)選定樣本的患者告知試驗(yàn)詳情，并簽訂知情同意書。

1.2樣本采集及保存" 使用無抗凝劑采血管靜脈采集血液。從AFP、CEA測(cè)定結(jié)果在兩儀器檢測(cè)范圍內(nèi)，保存無黃疸、溶血、脂血等其他影響測(cè)定因素，濃度涵蓋醫(yī)學(xué)決定水平的樣本，兩項(xiàng)目樣本數(shù)量符合EP9-A3文件要求。根據(jù)兩儀器操作SOP及配套試劑說明書，獲得合適樣本后，提取血清，可-20 ℃保存，3個(gè)月內(nèi)解凍1次完成檢測(cè)。

1.3儀器與試劑" 德國(guó)羅氏cobas e 601全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（電化學(xué)發(fā)光法），使用與之配套原裝試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品，以AFP：0.605～1210.000 ng/ml、CEA：0.200～1000.000 ng/ml檢測(cè)范圍作為參比方法（X）；透景Tesmi F4000全自動(dòng)流式熒光發(fā)光免疫分析儀（中國(guó)上海），使用流式熒光發(fā)光法測(cè)定，實(shí)驗(yàn)所用所有試劑以及各種耗材均為該儀器配套原裝，以AFP：4.000～320.000 ng/ml、CEA：3.200～360.000 ng/ml檢測(cè)范圍作待測(cè)方法（Y）。

1.4操作流程

1.4.1試驗(yàn)前準(zhǔn)備" 根據(jù)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)要求，使用兩檢測(cè)系統(tǒng)配套定標(biāo)品、質(zhì)控品完成兩儀器的保養(yǎng)、維護(hù)、校準(zhǔn)；按照EP9-A3文件規(guī)定，接連5 d，逐日檢測(cè)AFP、CEA待測(cè)樣本各8例，濃度處于兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)的測(cè)定范圍內(nèi)，且4例不在參考區(qū)間內(nèi)的樣本進(jìn)行檢測(cè)[5]。

1.4.2樣本測(cè)定" 將每份8例樣本隨機(jī)排列，在2系統(tǒng)中正序、反序均測(cè)1次，用以減少交叉污染及漂移對(duì)重測(cè)樣本均值的影響[6]；當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，補(bǔ)充樣本重新測(cè)定，直到達(dá)到要求樣本數(shù)為止，取各樣本在兩個(gè)系統(tǒng)的檢測(cè)均值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析[7]。

1.4.3離群值檢測(cè)" 根據(jù)EP9-A3文件描述[3]，應(yīng)用廣義極端學(xué)生化偏差（ESD）法進(jìn)行離群值檢驗(yàn)，離群值數(shù)量的上限低于樣本容量的5%，如有則需要擴(kuò)大樣本量，尋找出現(xiàn)偏差的原因，補(bǔ)充后再次測(cè)量。

1.4.4方法比對(duì)與偏倚評(píng)估" 計(jì)算實(shí)驗(yàn)方法（Y）與比較方法（X）之間的誤差（SE）和相對(duì)偏差（SE%）。SE=|Yc-Xc|，SE（%）=（SE/Xc）×100%[8]。按照EP9-A3文件要求，繪制偏差圖、散點(diǎn)圖，依照數(shù)據(jù)特點(diǎn)篩選合適的回歸分析模型，計(jì)算回歸方程，若r≥0.975或r2≥0.95，將各項(xiàng)目給定醫(yī)學(xué)決定水平濃度（Xc）代入回歸方程，計(jì)算在給定值處偏倚（Yc），以NCCL規(guī)定（CEA、AFP≤25%）為可接受標(biāo)準(zhǔn)，判斷參比方法測(cè)定結(jié)果的可接受性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法" 用Microsoft Excel 2010、SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。2項(xiàng)目待測(cè)方法和參比方法間的檢測(cè)結(jié)果比較均采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)算回歸方程和相關(guān)系數(shù)，以及方法間的SE和SE%[9]。

2結(jié)果

2.1離群值檢測(cè)" 采用ESD法檢驗(yàn)本次比對(duì)試驗(yàn)中各項(xiàng)目的測(cè)試結(jié)果，未發(fā)現(xiàn)離群值。

2.2檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析" AFP、CEA實(shí)驗(yàn)方法（X）與參比方法（Y）檢測(cè)結(jié)果比較，兩項(xiàng)目結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3回歸分析" 根據(jù)偏差圖（圖1～圖4）可知，待測(cè)方法的APF、CEA測(cè)定結(jié)果偏倚均在允許誤差范圍內(nèi)，差值散點(diǎn)帶隨X軸濃度或秩次增大而成比例變寬，百分比散點(diǎn)帶寬隨X軸濃度或秩次增大基本不變，偏差呈恒定CV變化（SD呈比例變化）；在散點(diǎn)圖（圖5、圖6）中隨X軸濃度增大，散點(diǎn)帶寬逐漸增大，呈恒定CV的數(shù)據(jù)特征，因此采用WLS回歸模型進(jìn)行分析。結(jié)果顯示，兩臺(tái)檢測(cè)儀器測(cè)定結(jié)果AFP、CEA均有顯著相關(guān)性（AFP：r2=0.9912；CEA：r2=0.9915）；回歸方程分別為 AFP：Y=0.9611X-0.0162；CEA：Y=0.9892X+0.2738。

2.4偏倚評(píng)估" 將AFP、CEA的醫(yī)學(xué)決定水平處值代入回歸方程，計(jì)算預(yù)期偏倚[10]。分析結(jié)果表明，AFP醫(yī)學(xué)決定水平為20 ng/ml和200 ng/ml時(shí)，待測(cè)方法相對(duì)參比方法的SE和SE%臨床可接受；CEA在醫(yī)學(xué)決定水平為5 ng/ml和20 ng/ml時(shí)的SE和SE%臨床可接受，見表2。

3討論

兩檢測(cè)儀器測(cè)定同一項(xiàng)目時(shí)檢測(cè)值是否具備可比性，以及偏倚程度能否被臨床接受，會(huì)對(duì)患者病情的診斷、治療及預(yù)后產(chǎn)生直接影響。EP9文件則用于驗(yàn)證兩儀器可比性，CLSI最新發(fā)布的EP9-A3文件與EP9-A2文件比較[11]，對(duì)此有著更為合理詳盡的要求，在實(shí)驗(yàn)標(biāo)本量、離群值選擇及處理方法、回歸模型選擇、醫(yī)學(xué)決定水平處的偏倚計(jì)算等方面有明顯修改[12]，如EP9-A3文件要求，須先對(duì)偏差圖和散點(diǎn)圖進(jìn)行目測(cè)分析，根據(jù)方法間差值的變化特點(diǎn)選擇合適回歸模型進(jìn)行分析[13]。

目前，AFP、CEA已作為常規(guī)項(xiàng)目在體檢中在臨床中廣泛應(yīng)用[14]。AFP與肝細(xì)胞癌、睪丸腫瘤、21三體（唐氏綜合征）等密切相關(guān)[15]，而CEA是一種廣譜性腫瘤標(biāo)志物，主要用于對(duì)惡性腫瘤患者進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及輔助判斷疾病進(jìn)程或治療效果。Hao C等[16]也闡述了其在不同類型癌癥和非癌癥疾病中應(yīng)用。兩者常聯(lián)合其他腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)用于輔助診斷腫瘤，均是診療效果評(píng)價(jià)、疾病情況進(jìn)展、疾病觀測(cè)和預(yù)后評(píng)估的重要標(biāo)志物[17-20]。

另有數(shù)據(jù)顯示，AFP、CEA的檢測(cè)下限，透景分析儀是羅氏分析儀的6.612倍和16倍，羅氏遠(yuǎn)比透景靈敏；在某些疾病診斷或監(jiān)測(cè)中，例如肝細(xì)胞性肝癌患者，血清AFP水平超過400.000 ng/ml[21]，但透景分析儀檢測(cè)上限為320.000 ng/ml，無法對(duì)AFP高值患者的病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后效果提供支持。對(duì)于CEA檢測(cè)，羅氏免疫分析儀臨床應(yīng)用廣泛[22]，且有同樣的優(yōu)勢(shì)，還可進(jìn)行自動(dòng)或手動(dòng)稀釋，結(jié)果上限可提高50倍。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，兩方法測(cè)定AFP、CEA的結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.5），表示兩種方法測(cè)定時(shí)并無明顯差異。根據(jù)偏差圖、散點(diǎn)圖采用WLS回歸模型進(jìn)行分析，相關(guān)系數(shù)r2均大于0.99，即AFP和CEA的檢測(cè)結(jié)果在兩儀器間具有良好的相關(guān)性。經(jīng)過計(jì)算，使用待測(cè)方法測(cè)定AFP和CEA的結(jié)果，在其醫(yī)學(xué)決定水平上SE%均在允許偏差范圍之內(nèi)，因此可被臨床所接受。

綜上所述，在儀器均使用原裝試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，且定期進(jìn)行校準(zhǔn)和保養(yǎng)等情況下，透景流式熒光發(fā)光免疫分析儀對(duì)其檢測(cè)線性內(nèi)的結(jié)果，有著良好的可比性，可得到具有一致臨床意義的檢測(cè)結(jié)果。但也有著一定的局限性，各級(jí)醫(yī)療單位實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)患者類別、財(cái)政分配情況以及日檢測(cè)樣本數(shù)量等選擇合適的檢測(cè)儀器。

參考文獻(xiàn)：

[1]林巧智，王德成，馬嘉瑋，等.6家通過ISO15189認(rèn)可醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室血清白蛋白檢測(cè)結(jié)果一致性研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2022，29（2）：353-355，360.

[2]Assadi Gazvini C，Coquemont C，Bluze E，et al.A simulation model for organization and management skills assessment that meets ISO 15189[J].Clin Chem Lab Med，2022，61（3）：e67-e70.

[3]CLSI.Measurement procedure comparison and bias estimationusing patient samples; approved guideline - third edition [S].CLSI document EP09 -A3， Wayne，PA，USA，Clinical andLaboratory Standards Institute，2013.

[4]孫嘉峰，王軍軍，邱麗萍，等.兩臺(tái)熒光定量PCR儀檢測(cè)HBVDNA結(jié)果的一致性分析[J].臨床醫(yī)藥實(shí)踐，2019，28（2）：122-124．

[5]時(shí)磊，劉晨，歐紅玲，等.依據(jù)CLSIEP9-A3文件評(píng)價(jià)兩種方法學(xué)檢測(cè)降鈣素原的可比性[J].標(biāo)記免疫分析與臨床2022，29（7）：1184-1188.

[6]王秋慧，李娜，張和平，等.根據(jù)CLSIEP9-A3文件對(duì)兩種方法檢測(cè)降鈣素原的可比性分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，38（22）：3198-3200.

[7]Zhu G，F(xiàn)u X，Ren Y，et al.Comparative analysis of three serum-free light-chain detection systems in the diagnosis of multiple myeloma[J].Int J Lab Hematol，2022，44（3）：576-581.

[8]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].3版.南京：中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司，2006：68.

[9]王治國(guó).臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：274.

[10]李敏，孟祥兆，孫江漫，等.基于CLSIEP9-A3的總膽紅素方法學(xué)比對(duì)及偏移評(píng)估[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2022，29（07）：1215-1218.

[11]Huang R，F(xiàn)u S，Lv YJ，et al.The Application of the EP9-A Protocol in the Analysis of the Performance of the Immunofluorescence Assay for HCG Detection[J].Int J Gen Med，2021，14：2459-2464.

[12]王秋慧，云發(fā)超，薛克儉，等.根據(jù)CLSIEP9-A3方案對(duì)2種儀器測(cè)定血脂水平的可比性分析[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2018，39（4）：489-492.

[13]傅金可，趙華，陳亞芳.基于CLSIEP9-A3的血清人絨毛膜促性腺激素β亞單位方法學(xué)比對(duì)及偏移評(píng)估[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2020，30（11）：1352-1355.

[14]劉宏濤，柴秀華，孫琰.流式熒光發(fā)光法檢測(cè)北京市23566名健康人群血清AFP、CEA結(jié)果分析[J].臨床檢驗(yàn)志，2015，33（05）：400.

[15]馬燕粉，王曉琴，樊雪英，等.3283例健康體檢者血清AFP水平和血脂指標(biāo)的相關(guān)性分析[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2022，26（11）：1581-1586.

[16]Hao C，Zhang G，Zhang L.Serum CEA levels in 49 different types of cancer and noncancer diseases[J].Prog Mol Biol Transl Sci，2019，162：213-227.

[17]孫忠怡，孟凡東，隋承光，等.GPC3聯(lián)合AFP、CEA、CA199檢測(cè)對(duì)肝細(xì)胞癌的臨床診斷價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2022，26（1）：31-34.

[18]張瑩，李靜，徐有青.血清CEA、AFP、CA199、CA125聯(lián)合檢測(cè)診斷胃癌的ROC曲線分析及臨床指導(dǎo)意義[J].湖南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2022，19（4）：81-84.

[19]魏麗，劉博，趙楠.CEA、AFP、CA125、CA199聯(lián)合檢測(cè)對(duì)結(jié)腸癌的早期診斷價(jià)值分析[J].實(shí)用癌癥雜志，2022，37（8）：1335-1338.

[20]余道武，余天霧，茍毅，等.血AFP/CEA與HCY聯(lián)合檢測(cè)在診斷原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的應(yīng)用[J].分子診斷與治療雜志，2022，14（4）：552-555.

[21]陳家豪，葉彩玲，孫恒昌，等.血清AFP和AFP-L3及PIVKA-Ⅱ在肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2022，22（5）：677-680.

[22]楊壽林，吳路發(fā)，李勇.羅氏CobasE601全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)癌胚抗原（CEA）的臨床分析[J].現(xiàn)代診斷與治療，2021，32（17）：2769-2770.

收稿日期：2023-04-02；修回日期：2023-04-26

編輯/肖婷婷