補腎健腦膠囊質量標準研究

摘要：目的" 建立醫(yī)院制劑補腎健腦膠囊質量標準。方法" 觀察描述補腎健腦膠囊的性狀特征，采用顯微鑒別法對方中山茱萸、石菖蒲、牛膝、人參、熟地黃、遠志的顯微特征進行定性鑒別，采用薄層色譜法對方中龜甲、肉蓯蓉進行定性鑒別，按照《中國藥典》2020年版四部通則方法對膠囊劑常規(guī)檢查項進行檢驗。結果" 補腎健腦膠囊為硬膠囊，內容物呈棕褐色粉末。顯微鑒別可確認山茱萸、石菖蒲、牛膝、人參、熟地黃和遠志6種藥味的組織特征，針對處方中龜甲和肉蓯蓉的薄層色譜鑒別具有較強的專屬性。檢查項結果顯示，水分和崩解時限均符合《中國藥典》規(guī)定，而裝量差異限度檢查存在不符合標準規(guī)定的情況。結論" 本方法操作簡單，重復性好，結果準確，可作為補腎健腦膠囊的質量控制方法。

關鍵詞：補腎健腦膠囊；質量標準；性狀特征；顯微特征；薄層色譜

中圖分類號：R927.2" " " " " " " " " " " " " " " " "文獻標識碼：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.05.017

文章編號：1006-1959（2024）05-0102-06

Study on Quality Standard of Bushen Jiannao Capsule

DING Hui，JIA Qian，ZHU Ren-yuan，LI Jian，WU Fu-xiang，DING Ai-hua

（Lanzhou Institute for Food and Drug Contro/Key Laboratory of Pesticide and Veterinary Drug Monitoring for State Market Regulation/Gansu Engineering Research Center for Monitoring Exogenous Harmful Residues in Traditional Chinese Medicines，

Lanzhou 730050，Gansu，China）

Abstract：Objective" To establish the quality standard of Bushen Jiannao capsule.Methods" The characteristics of Bushen Jiannao capsule and the microscopic characteristics of Fructus Corni， Acori Tatarinowii Rhizoma， Achyranthes bidentata Blume， Radix Ginseng， Rehmannia glutinosa and Polygala tenuifolia Willd. were observed and described. The qualitative identification of Chinemys reevesii. and desertliving cistanche herb was carried out by thin layer chromatography， and the inspection items were checked according to the method of Chinese Pharmacopoeia.Results" Bushen Jiannao capsule wa a hard capsule， the contents were sepia powder. The microscopic identification could confirm the tissue characteristics of six kinds of medicinal tastes： Corni Fructus，Acori Tatarinowii Rhizoma， Achyranthes bidentata Blume， Radix Ginseng， Rehmannia glutinosa and Polygala tenuifolia Willd.， and the identification of Chinemys reevesii. and desertliving cistanche herb by TLC had strong specificity. The results of the examination showed that the moisture and the disintegration time limit conformed to the provisions of Chinese Pharmacopoeia， but load difference limit inspection did not meet the standard.Conclusion" The method is simple， reproducible and accurate， which can be used for the quality control of Bushen Jiannao capsule.

Key words：Bushen Jiannao capsule;Quality standard;Character characteristics;Microscopic characteristics;Thin layer chromatography

補腎健腦膠囊是蘭州市某醫(yī)院研制的醫(yī)院制劑，處方由制首烏、醋龜板、懷牛膝、熟地黃、山茱萸、肉蓯蓉、石菖蒲、益智仁、遠志、人參、鹿茸、冬蟲夏草等十二味藥材加工制成，具健脾補腎、益腦壯骨之效；主治腦發(fā)育不全、腦癱、腦萎縮，癥狀見身體虛弱或僵硬、抽搐和言語障礙、癡呆、記憶力減退等[1，2]。近年來，由于高齡產婦增多，致使腦癱患兒患病率上升，該醫(yī)院制劑通過醫(yī)者總結臨床治療經(jīng)驗，在對“補腎健腦湯”隨癥加減的基礎上確立而成，取得了良好療效。據(jù)院方統(tǒng)計，自1998年以來，補腎健腦共用于治療腦癱、腦萎縮病理近3萬例，治愈率33%，顯效率50%，無效率17%，總有效率達到83%。補腎健腦膠囊的處方來源于經(jīng)驗方“補腎健腦湯”，方中以醋龜板補腎陰、養(yǎng)血補心、益腎健骨，肉蓯蓉補腎陽、益精血，共為君藥；以懷牛膝、熟地黃、制首烏補益精血，山茱萸、人參、鹿茸、冬蟲夏草補氣補陽，共同為臣輔助君藥；以石菖蒲、遠志祛痰開竅、交通心腎而安神益智，共為佐使藥。研究顯示[3-6]，補腎健腦湯在老年性癡呆、老年輕度認知障礙、血管性癡呆和中風癡呆等疾病的治療中取得較好的療效。為了更全面地控制該醫(yī)院制劑的內在質量，本研究通過描述補腎健腦膠囊的性狀特征，同時建立處方中山茱萸、石菖蒲、牛膝、人參、熟地黃、遠志的顯微特征，以及龜甲、肉蓯蓉的薄層色譜鑒別方法，并對水分、裝量差異、崩解時限等檢查項目[7-9]進行了檢驗，為科學評價藥品質量提供參考依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1儀器" Canon EOS 6D數(shù)碼照相機（日本佳能公司）；BX53+DP73正置熒光生物顯微鏡，配有cellSensEntry成像系統(tǒng)（日本奧林巴斯公司）；CAMAGLinomat 5自動點樣儀，配備TLC Visualizer成像系統(tǒng)（瑞士卡瑪公司）；YP502電子天平（上海津平科學儀器有限公司）；DGG-9140B電熱恒溫鼓風干燥箱（上海森信實驗儀器有限公司）；MS105DU電子天平（上海梅特勒-托利多儀器公司）；ZB-1D智能崩解儀（天津精拓儀器科技有限公司）；SBL-10DT超聲清洗儀和SCG-4智能恒溫槽（寧波新芝生物有限公司）。

1.2試劑試藥" 龜甲對照藥材（121494-201604）、膽固醇對照品（111618-200301）及肉蓯蓉對照藥材（121101-200402）均購自中國食品藥品檢定研究院。硅膠G薄層板（德國默克公司），聚酰胺薄膜（浙江路橋四甲生化塑料廠）。甲醇、甲苯、乙酸乙酯、甲酸、硫酸、乙醇、正丁醇、冰醋酸、水合氯醛均為分析純，水為純化水。補腎健腦膠囊試制樣品3批，均由蘭州市某醫(yī)院制備提供，批號：BSJN-S-1、BSJN-S-2和BSJN-S-3。

2方法與結果

2.1性狀特征" 利用數(shù)碼照相機拍照，記錄補腎健腦膠囊的性狀特征[10]。結果可見：本品為硬膠囊，見圖1A，內容物為棕褐色的粉末，見圖1B。取內容物進行口、鼻實驗，可知其氣微香，味淡、微甜、苦。

2.2顯微特征鑒別" 取補腎健腦膠囊的內容物，用研缽研細，置載玻片上，滴加水合氯醛試液，加蓋玻片加熱透化，放置10 min后用生物顯微鏡及數(shù)碼成像系統(tǒng)觀察記錄粉末顯微特征[11，12]。結果可見：山茱萸的果皮表皮細胞橙黃色，表面觀多角形或類長方形，垂周壁連珠狀增厚，外平周壁顆粒狀角質增厚，胞腔含淡橙黃色物，圖2A。石菖蒲纖維束周圍細胞中含草酸鈣方晶，形成晶纖維，見圖2B。牛膝的草酸鈣砂晶存在于薄壁細胞中，見圖2C。人參的草酸鈣簇晶直徑20～68 μm，棱角銳尖，見圖2D。熟地黃的薄壁組織灰棕色至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物，見圖2E。遠志的木栓細胞表面觀呈多角形、類方形或類長方形，垂周壁較薄，有紋孔，呈斷續(xù)狀，見圖2F。

2.3薄層色譜鑒別

2.3.1龜甲的檢測" ①供試品溶液的制備：取10粒補腎健腦膠囊的內容物，置研缽中研細，粉末全部放入錐形瓶中，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1 ml使溶解[13，14]。②對照藥材溶液的制備：取龜甲對照藥材1 g，依照供試品溶液制備方法進行操作。③對照品溶液的制備：取膽固醇對照品1 g，加甲醇10 ml使溶解，即濃度為1 mg/ml。用自動點樣儀的微量取樣器吸取上述供試品溶液和對照品溶液各10 μl、對照藥材溶液20 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-無水甲酸（15∶2∶1∶0.6）為展開劑，展開18 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，于110 ℃加熱直至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖3。

2.3.2肉蓯蓉的檢測" ①供試品溶液的制備：取10粒補腎健腦膠囊的內容物，置研缽中研細，粉末全部放入錐形瓶中，加甲醇25 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 ml溶解，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解[15，16]。②對照藥材溶液的制備：取肉蓯蓉對照藥材1 g，加75%乙醇30 ml加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇25 ml，依照供試品溶液制備方法進行操作。用自動點樣儀的微量取樣器吸取上述供試品溶液和對照藥材溶液各5 μl，分別點于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-醋酸-水（2∶1∶7）為展開劑，展開，展距8 cm，取出，晾干，在紫外光（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖4。

2.4檢查" 按《中國藥典》2020年版四部制劑通則膠囊劑（通則 0103）項下有關的規(guī)定對水分、裝量差異和崩解時限進行檢驗，為考察補腎健腦膠囊樣品的均勻性以及保證檢驗結果的準確可靠，每批樣品平行進行三組測定。

2.4.1水分" 按照《中國藥典》2020年版四部通則0832水分測定法中第二法（烘干法）測定。取補腎健腦膠囊內容物粉末取5 g，精密稱定，平鋪于干燥至恒重的扁形稱量瓶中，開啟瓶蓋在105 ℃干燥5 h。將瓶蓋蓋好，移置干燥器中，放冷30 min，精密稱定，再在上述溫度干燥1 h，放冷，精密稱重，至連續(xù)兩次稱重的差異不超過5 mg為止。根據(jù)減失的重量，計算補腎健腦膠囊中的含水量，結果見表1，3批次補腎健腦膠囊的水分結果均符合標準規(guī)定[17]。

2.4.2裝量差異" 取補腎健腦膠囊10粒，分別精密稱定重量，傾出內容物，囊殼用小刷拭凈，再分別精密稱定囊殼重量，根據(jù)減失的重量計算出每粒內容物的裝量，結果見表2。本品規(guī)格為0.45 g/粒，根據(jù)《中國藥典》標準規(guī)定，每粒裝量與標示裝量比較，超出裝量差異限度的應不得多于2粒，并應不得有1粒超出限度1倍，其中裝量差異限度為±10%，即限度范圍為0.405～0.495 g/粒，1倍限度范圍為0.36～0.54 g/粒。結果顯示，BSJN-S-1的裝量差異均符合規(guī)定；BSJN-S-3的第二組和第三組中各有1份樣品裝量差異超出限度范圍，但均未超出限度的1 倍，故符合標準規(guī)定；BSJN-S-2中，第一組有4份樣品超出限度范圍，第二組有6份樣品超出限度范圍，第三組有4份樣品超出限度范圍，不符合標準規(guī)定[18]。

2.4.3崩解時限" 按照《中國藥典》2020年版四部通則0921崩解時限檢查法測定。取補腎健腦膠囊6粒，分別置崩解儀吊籃的玻璃管中，放上擋板，浸入盛有水的燒杯中，設定溫度為37 ℃，記錄膠囊全部崩解的時間，測定結果見表3，3批次補腎健腦膠囊的崩解時限結果均符合標準規(guī)定[19]。

3討論

3.1顯微鑒別" 由于制劑處方中的各藥味原料在生產過程中已被粉碎，因此選取具有代表性的顯微組織特征極其關鍵。補腎健腦膠囊中，山茱萸是干燥成熟果肉，果皮表皮細胞是其主要特征；石菖蒲含有大量草酸鈣方晶，且易形成晶纖維；人參的典型組織特征是棱角銳尖的草酸鈣簇晶。薄壁細胞和木栓細胞是植物中常見的組織，但牛膝的薄壁細胞含有草酸鈣砂晶，熟地黃的薄壁細胞內含類圓形核狀物，遠志的木栓細胞呈多角形、類方形或類長方形，垂周壁較薄。

3.2薄層鑒別" 龜甲的薄層鑒別中，通過梯度點樣對比發(fā)現(xiàn)，對照藥材、對照品及供試品溶液的點樣量分別為20、10及10～15 μl時，薄層板上的斑點清晰，分離度較好。檢視條件選用噴以10%硫酸乙醇溶液，在加熱后即可直接觀察到粉紅色斑點，需要注意加熱溫度不易過高，避免導致薄層板被烤焦。肉蓯蓉的薄層色譜鑒別中，考察了3種前處理方法，分別是：①取10粒內容物，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水25 ml溶解，加水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取肉蓯蓉對照藥材1 g，加75%乙醇30 ml加熱回流1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇25 ml，同法制成對照藥材溶液。②取10粒內容物，加乙醚60 ml，超聲處理30 min，棄去乙醚液，殘渣揮干，加甲醇100 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10 ml微熱使溶解，通過D101型大孔吸附樹脂柱（柱內徑為1.5 cm，柱高為15 cm），用水70 ml洗脫，棄去水液，再用20%乙醇70 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用60%甲醇100 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。另取松果菊苷對照品，加甲醇制成1 mg/ml的溶液，作為對照品溶液。③取10粒內容物，加甲醇30 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液回收溶劑至干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。另取肉蓯蓉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。經(jīng)過對比分析，最終確定采用方法①，其結果準確可靠，操作性強。通過梯度點樣對比，對照藥材及供試品的點樣量分別為2～5 μl時，薄層板上的斑點清晰，分離度好。

3.3檢查" 本實驗按《中國藥典》2020年版四部通則膠囊劑項下規(guī)定，分別對三批補腎健腦膠囊的常規(guī)檢查項目進行了檢驗，結果顯示3批樣品的水分和崩解時限結果均符合規(guī)定，BSJN-S-1和BSJN-S-3的裝量差異限度檢測也符合規(guī)定，但是BSJN-S-2的裝量差異超出限度范圍，不符合規(guī)定，表明該醫(yī)院制劑在生產過程中，灌裝過程存在一定的風險，還需進一步加強質量控制[20]。

總之，中藥制劑的質量是否均一穩(wěn)定，直接影響臨床有效性與安全性，因此對其質量的控制尤其重要。本實驗建立了醫(yī)院制劑補腎健腦膠囊的性狀特征、顯微特征和薄層色譜鑒別方法，操作簡單，專屬性強，對于實驗條件要求不高，有利于全面控制制劑質量，為保障藥品安全有效提供技術支持，可為其后續(xù)進一步開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

參考文獻：

[1]王寶盛，張寧寧，陳海鵬，等.從少陽為樞論治兒童多動癥[J].河北中醫(yī)藥學報，2022，37（6）：7-10.

[2]房國林.基于益氣補腎、祛瘀化痰法的黃蒲通竅膠囊對于非癡呆型血管性認知功能障礙的臨床療效評價及對血清炎性指標、血漿Hcy水平的影響[D].合肥：安徽中醫(yī)藥大學，2018.

[3]黃橋生，徐止浩.補腎健腦方聯(lián)合奧氮平治療精神行為障礙老年癡呆療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志，2019，28（24）：2701-2703，2713.

[4]羅倫，蘇文淵，袁茵，等.健腦補腎丸聯(lián)合認知康復訓練治療腦卒中后認知功能障礙療效及對血液流變學指標影響[J].臨床軍醫(yī)雜志，2019，47（11）：1197-1199，1203.

[5]胡勇軍，徐艷麗.補腎祛痰化瘀健腦湯聯(lián)合多奈哌齊治療阿爾茨海默病的療效觀察[J].中國中醫(yī)藥科技，2022，29（5）：848-850.

[6]張勇，李媛.健腦補腎通絡方治療腎虛血瘀型腦動脈硬化癥臨床研究[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2020，40（4）：68-71.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典四部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：5-6.

[8]宿曼筠，王友蘭，吳愛英.珍母丸質量標準研究[J].中國現(xiàn)代應用藥學，2020，37（6）：685-688.

[9]喬衛(wèi)林，張禮行，彭麗華，等.壯腰健腎片的物質基礎及質量標準提升研究[J].分析測試學報，2023，42（4）：402-410.

[10]林翠，董靜文，王田田.復合亞氯酸鈉泡騰膠囊的制備及質量研究[J].煤炭與化工，2022，45（11）：123-127.

[11]沙馬里牛，李文兵，沙冬梅，等.鏵頭草質量標準研究[J].中成藥，2023，45（4）：1270-1274.

[12]崔靜，趙南，崔國濤.通脈化瘀膠囊制備工藝及質量標準研究[J].中國處方藥，2023，21（4）：27-31.

[13]呂曉娜.龜甲、龜甲膠的氨基酸類成分分析及質量評價研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學，2019.

[14]史兆松，馬棟棟，張淹，等.龜鹿二仙口服液質量標準研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2019，21（4）：494-497，507.

[15]李洋，秦亞迪，布比阿加爾·哈依拉提，等.肉蓯蓉飲片及相關產品中苯乙醇苷的鑒別及測定[J].中國食品添加劑，2022，33（3）：228-235.

[16]蘇學秀，張富嫻，賈存勤，等.甘肅栽培肉蓯蓉的鑒別研究[J].中國民族民間醫(yī)藥，2021，30（21）：25-27.

[17]胡楊，丁曉倩，嚴輝，等.川芎質量標準的研究[J].中成藥，2021，43（3）：692-699.

[18]潘南，鄧玉鳳，徐清云，等復方紫海膽黃油軟膠囊制備工藝的研究[J].漁業(yè)研究，2021，43（6）：587-596.

[19]路婷婷，范月瑩，呂娜，等QbD質量源于設計在軟膠囊工藝開發(fā)中的應用[J].化工設計通訊，2023，49（3）：203-205.

[20]張翠蓮，許婷婷，王彪，等基于國家藥品監(jiān)督管理局藥品質量公告發(fā)布不合格軟膏與乳膏類藥品的數(shù)據(jù)分析與提示[J].中國藥事，2022，36（9）：1078-1086.

收稿日期：2023-05-08；修回日期：2023-05-31

編輯/成森