結直腸癌組織中CK7、CDX2、P53表達及與臨床病理特征的關系

蘇瑜嬌 沈艷玲 葉承祖 中國人民解放軍陸軍第七十三集團軍醫(yī)院,福建省廈門市 361003

結直腸癌(CRC)是中老年人群常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤,其病死率與發(fā)病率僅次于胃癌、食管癌、原發(fā)性肝癌,隨著社會不斷發(fā)展,人們工作方式與飲食習慣改變,其發(fā)病率逐漸增高,而發(fā)病年齡趨于年輕化[1-2]。早期CRC癥狀不明顯,不易受到患者重視,當患者發(fā)生腸梗阻、便血、腹痛等癥狀時,病情相對嚴重,常錯過最佳醫(yī)治時期,預后較差。故早期尋找特異性指標評估患者病情及預后至關重要。尾型同源盒轉錄因子-2(CDX2)、細胞角蛋白7(CK7)、P53是調控細胞分化與凋亡的關鍵信號分子,其表達與多種惡性腫瘤的侵襲、轉移密切相關[3-4]。但對CRC組織中CK7、P53、CDX2表達情況臨床研究較少。本文分析結直腸癌組織中CDX2、CK7、P53表達及與臨床病理特征的關系,為臨床診治提供新的思路。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2020年1月—2023年2月在本院行手術治療的82例CRC患者為觀察對象,術中會陰部采集癌組織和癌旁組織(距離腫瘤邊緣>3cm的正常組織)。納入標準:符合《中國結直腸癌診療規(guī)范(2017年版)》[5]內CRC診斷標準,經病理組織學檢查證實;臨床資料完整;腫瘤病灶明確,病理資料齊全;患者或家屬簽署知情同意書。排除標準:重要臟器功能衰竭;凝血功能障礙;術前接受放化療等輔助治療;存在自身免疫功能缺陷病;合并其他惡性腫瘤。82例患者中男49例,女33例;年齡41～70歲,平均年齡(56.96±5.12)歲;腫瘤分化程度:高分化18例,中分化49例,低分化15例;病理類型:漿膜浸潤型18例,非漿膜浸潤型64例;存在淋巴結轉移48例;Dukes分期:A期16例,B期40例,C期18例,D期8例。

1.2 方法 CK7、P53、CDX2單克隆抗體試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。對術中采集的癌組織和癌旁組織行免疫組化檢測:石蠟包埋切片(切片厚度為3μm)后將組織黏附于防脫載玻片上,65℃烤片40min。二甲苯溶液脫蠟(3缸二甲苯,每缸浸泡5min),無水乙醇洗去二甲苯,然后使用由高到低梯度酒精進行水化。通過DAKO Autostainer Link48免疫組化儀實施抗原修復及免疫組化染色,結束后手工蘇木素復染,1%鹽酸乙醇分化,稀氨水返藍,無水乙醇脫水,吹干,蓋玻片封片后于顯微鏡下觀察。由2名經驗豐富的病理科醫(yī)師采用雙盲法獨立閱片,意見不一致時協(xié)商達成一致。陽性細胞比例評分:無表達為0分,陽性細胞比例1%～24%為1分,陽性細胞比例為25%～50%為2分,陽性細胞比例>50%為3分。染色強度評分:無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分、棕褐色為3分。以陽性細胞比例評分×染色強度評分進行評價,其中≥2分為陽性,0、1分為陰性。

1.3 觀察指標 分析癌組織和癌旁組織內CK7、P53、CDX2陽性表達情況,對比癌組織內各指標陽性表達與CRC患者臨床病理特征的關系。

2 結果

2.1 癌組織和癌旁組織內CK7、P53、CDX2陽性表達對比 癌組織內CK7、CDX2陽性表達率低于癌旁組織,P53陽性表達率高于癌旁組織,有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 癌組織和癌旁組織內CK7、P53、CDX2陽性表達對比[n(%)]

2.2 不同臨床病理特征者癌組織內CK7、P53、CDX2陽性表達對比 漿膜浸潤型、低分化、有淋巴結轉移、C+D期CRC癌組織內P53陽性表達率高于非漿膜浸潤型、中及高分化、無淋巴結轉移、A+B期,CDX2陽性表達率低于非漿膜浸潤型、中及高分化、無淋巴結轉移、A+B期,且有淋巴結轉移CRC癌組織內CK7陽性表達率低于無淋巴轉移者,有統(tǒng)計學差異(P<0.05);不同腫瘤分化程度、病理類型、Dukes分期癌組織內CK7陽性率表達比較,無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。見表2。

表2 不同臨床病理特征者癌組織內CK7、P53、CDX2陽性表達對比[n(%)]

2.3 CK7、P53、CDX2陽性表達與CRC患者臨床病理特征的相關性分析 CK7、CDX2陽性表達率與CRC患者淋巴結轉移呈負相關(P<0.05),CDX2陽性表達率與CRC患者腫瘤分化程度、病理類型呈負相關(P<0.05),與Dukes分期呈正相關(P<0.05)。P53陽性表達率與CRC患者腫瘤分化程度、病理類型、淋巴結轉移呈正相關(P<0.05),與Dukes分期呈負相關(P<0.05)。見表3。

表3 CK7、P53、CDX2陽性表達與CRC患者臨床病理特征的相關性分析

3 討論

CRC發(fā)生與吸煙、遺傳因素、高脂肪低纖維素飲食、環(huán)境因素等有關,因早期發(fā)現(xiàn)難度較大,多數(shù)患者就診時已發(fā)展為中晚期,可經血液循環(huán)、淋巴等途徑蔓延,擴散至鄰近器官與組織內,預后較差,生存期短[6]。在CRC發(fā)生、進展中存在多種癌基因的失活、突變與激活,癌基因表達調控異常或基因突變一定程度上會增加癌細胞過度擴增風險,造成癌細胞促凋亡或正常分化過程失常[7]。故早期篩查高敏感的標志物,對腫瘤診斷和發(fā)生、轉移評估有重要意義。

CK7是一種主要標記于腺上皮和移行上皮的堿性角蛋白,在乳腺上皮、子宮內膜、卵巢、肺和間皮細胞可呈陽性表達,但在源自胃腸道腺瘤中一般為陰性表達[8]。P53是重要的腫瘤基因編碼蛋白,可影響細胞的低分化,增加組織學分級的惡化,參與細胞錯配修復機制的形成,還可經激活akt或notch信號通路,促使腸道上皮細胞分裂象異常,增加癌細胞對腸道基底膜層的突破作用,已被認為與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關[9-10]。CDX2屬于酸性蛋白,多存在于腸上皮細胞的細胞核內,具有嚴格的上皮組織特異性,可維持腸上皮細胞的表型和調節(jié)腸上皮細胞的分化、增殖,且對消化道上皮細胞發(fā)育也起到重要作用[11-12]。本文結果顯示,癌組織內CK7、CDX2陽性表達率低于癌旁組織,P53陽性表達率高于癌旁組織,提示CRC組織中CK7、CDX2、P53均異常表達。進一步分析顯示,CK7、CDX2陽性表達率與CRC患者淋巴結轉移呈負相關,CDX2陽性表達率與CRC患者腫瘤分化程度、病理類型呈負相關,與Dukes分期呈正相關;P53陽性表達率與CRC患者腫瘤分化程度、病理類型、淋巴結轉移呈正相關,與Dukes分期呈負相關,提示CK7、CDX2、P53表達可能參與CRC疾病進展,可作為CRC診斷和病情進展評估指標。正常情況下,P53處于低表達狀態(tài),而在細胞應激時間會被激活而大量表達,能夠與目標DNA序列相結合,抑制或激活大量靶基因的表達,觸發(fā)一系列生物反應,影響細胞代謝、衰老、增殖、死亡及細胞DNA修復,抑制惡性腫瘤細胞的異常增殖與擴張,在降低惡性腫瘤患病風險及維持細胞遺傳穩(wěn)定性中發(fā)揮重要作用。P53能夠通過亞細胞易位或激活具有促進細胞凋亡作用的Bcl-2家族中的BH3蛋白,促進細胞凋亡。腫瘤細胞中TP53突變多為錯義突變,使得野生型P53蛋白質的DNA結合區(qū)域內單一的殘基被替換,形成突變的P53蛋白,喪失對腫瘤細胞的調控作用,致使癌細胞增殖失控,且突變的P53蛋白可經轉錄調節(jié)因子、細胞內的酶、細胞蛋白等生物活性物質建立新的相互關系和調節(jié)通路,對野生型P53蛋白的活性起到抑制作用,促進癌細胞的侵襲、增殖、轉移與化療耐藥,進而促進疾病進展。另外,腫瘤細胞中P53突變與丟失可經抑制MHC-Ⅰ類分子的抗原提呈作用和加強抑制性髓系免疫細胞和調節(jié)性T細胞的招募與活性,對腫瘤細胞免疫識別能力調節(jié),幫助腫瘤細胞逃逸免疫系統(tǒng)的監(jiān)視,促進癌癥進展。

綜上所述,CRC組織中CK7、CDX2、P53均異常表達,與CRC發(fā)生、進展存在一定相關性,可作為CRC診斷和病情進展評估指標。