CD25基因多態(tài)性與EV71感染手足口病患兒易感性及嚴重性的關系

崔云會

河南省商丘市第一人民醫(yī)院分子生物實驗室 476000

手足口病(HFMD)是一種由腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇A組16型(CVA16)等腸道病毒感染誘發(fā)的出疹性傳染病,該疾病在人群中普遍易感,其中多見于5歲以下兒童[1]。不同腸道病毒感染引起的HFMD病情存在顯著差異,其中重癥HFMD多由EV71感染引起,可并發(fā)病毒性腦炎、心肌炎、肺水腫等,嚴重者甚至會死亡[2]。相關研究發(fā)現,個體之間的EV71易感風險和感染程度懸殊較大,可能與基因突變、病毒毒性、免疫功能等多種因素有關[3]。目前已鑒定出多種與EV71易感風險相關的基因[4-5]。CD25又被稱為白介素-2受體α(IL2RA),是調節(jié)性T細胞(Treg)表面的特異性標記分子,在白介素-2(IL-2)信號傳導過程中發(fā)揮重要的調節(jié)作用,且與CD4+CD25+Treg存活密切相關[6]。既往研究發(fā)現,外周血中CD4+CD25+Treg表達減少與EV71感染HFMD的病情發(fā)展有關[7]。故推測CD25與EV71感染HFMD之間存在某種關系,但是目前尚未有研究對這一推論進行驗證。鑒于此,本次研究主要探討CD25基因rs7072793位點多態(tài)性與EV71感染HFMD患兒易感性及嚴重性的關系,旨在為臨床診療提供指導。

1 對象與方法

1.1 研究對象 將2020年11月—2022年11月我院收治的122例EV71感染HFMD患兒作為本次研究對象(HFMD組),根據疾病嚴重程度分為輕癥組(n=79)和重癥組(n=43)2個亞組。HFMD組男69例,女53例;年齡1～12歲,平均年齡(3.37±0.65)歲;體質量(13.85±2.74)kg;有70例體溫<39℃,52例體溫≥39℃;皮疹部位:單個部位33例;多個部位89例;腦電圖:正常95例;異常27例。納入標準:(1)HFMD診斷標準參考《手足口病診療指南(2018年版)》[8];(2)年齡1～10歲;(3)首次患病,EV71檢測結果呈陽性;(4)患兒的監(jiān)護人知情同意。排除標準:(1)合并先天性疾病、惡性腫瘤、臟器功能不全者;(2)由其他腸道病毒感染引起的HFMD;(3)病歷資料不完整者;(4)配合度差及謝絕參與本研究者。

另外將同時期在我院進行健康檢查的150例健康兒童納入對照組。其中男86例,女64例;年齡1～12歲,平均年齡(3.32±0.61)歲;體質量(13.82±2.72)kg。HFMD組性別、年齡、體質量與對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。我院醫(yī)學倫理委員已對本研究進行審核批準。

1.2 方法

1.2.1 標本采集和血清DNA提取。采集HFMD患兒入院次日的空腹靜脈血樣4mL,使用高速離心機(湖南凱達科學儀器有限公司)進行離心處理,離心速度3 500r/min,離心時間10min,分離上層血清,采用DNA提取試劑盒(上海源葉生物科技有限公司)提取血清中單核細胞DNA,檢測其濃度和光密度,并存儲于冰箱內待檢。

1.2.2 CD25基因rs7072793位點基因分型檢測。采用限制性片段長度多態(tài)性聚合酶鏈反應(PCR-RFLP)技術鑒定CD25基因rs7072793位點基因分型,檢測流程如下:取2μL稀釋后的DNA溶液作為模板與CD25基因rs7072793位點的特異性引物(上海研尊生物科技有限公司)進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增(上游引物:5’-ACGTTGGATGTCTTCTCACATCCCTGCATC -3’下游引物:5’-ACGTTGGATGTTACGCATGAACGCTCTGTC -3’),然后加入2%瓊脂糖凝膠上分離片段,并在紫外光下進行溴化乙錠染色。采用熒光原位雜交技術進行圖像掃描,并利用TL998系統(tǒng)分析圖像中各通道的信號值,根據信號值評估CD25基因rs7072793位點基因分型。反應條件:94℃預變性3min,94℃變性30s,50℃退火30s、72℃延伸30s,共35個循環(huán)。試劑盒與儀器使用方法參考說明書。

2 結果

2.1 Hardy-Weinberg遺傳平衡度檢驗 對照組和HFMD組CD25基因rs7072793位點基因型符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律,樣本具有代表性(P>0.05),見表1。

表1 CD25基因rs7072793位點基因型的Hardy-Weinberg遺傳平衡度檢驗

2.2 兩組CD25基因rs7072793位點基因型和等位基因分布情況比較 對照組CD25基因rs7072793位點CC、CT、TT基因型頻率和C、T等位基因頻率與HFMD組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表2。

表2 兩組CD25基因rs7072793位點基因型和等位基因分布情況比較[n(%)]

2.3 輕癥組和重癥組CD25基因rs7072793位點基因型和等位基因分布情況比較 輕癥組CD25基因rs7072793位點CC、CT、TT基因型頻率和C、T等位基因頻率與重癥組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

表3 輕癥組和重癥組CD25基因rs7072793位點基因型和等位基因分布情況比較[n(%)]

2.4 EV71感染重癥HFMD發(fā)病的多因素Logistic回歸分析 本研究將是否發(fā)生EV71感染重癥HFMD作為因變量(否=0,是=1),將臨床資料、CD25基因rs7072793位點基因型和等位基因作為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,腦電圖結果異常、CD25基因rs7072793位點TT基因型、CD25基因rs7072793位點T等位基因是EV71感染重癥HFMD發(fā)病的獨立危險因素(P<0.05),見表4。

表4 EV71感染重癥HFMD發(fā)病的多因素Logistic回歸分析

3 討論

在新冠疫情的背景下,2020年我國HFMD的新發(fā)病例數明顯減少,但是隨著疫情管控的逐步開放,人們的自我防護意識減弱,HFMD的發(fā)病率已逐漸恢復至疫情前水平,防控形勢仍然非常嚴峻[9]。HFMD是一種自限性疾病,主要通過接觸和呼吸道進行傳播,具有較強的傳染性。大部分HFMD患兒在接受對癥支持治療后1周內即可痊愈,但是少數重癥患兒因病情發(fā)展迅速,容易累及神經系統(tǒng),嚴重者甚至會出現呼吸循環(huán)功能障礙,預后較差[10]。其中EV71是引起重癥HFMD的主要病原體[11],但是發(fā)病機制尚未完全闡明。因此,深入研究EV71感染所致重癥HFMD的發(fā)病機制,尋找潛在的治療靶點是現階段臨床研究的熱點。

Treg是一群具有免疫調節(jié)作用的T細胞亞群,包括自然Treg、適應性Treg、CD8+Treg等,在維持免疫微環(huán)境穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用,與多種疾病8的發(fā)生、發(fā)展相關[12-13]。CD25是CD4+、CD25+Treg表面的特異性標記分子,能夠與效應T細胞競爭性結合IL-2,并激活相關信號傳導通路,調控Treg的增殖、分化、成熟等過程[14]。既往研究已證實,CD25基因多態(tài)性與腫瘤免疫逃逸、免疫炎癥、慢性感染等有關[15-16]。Li等[17]研究發(fā)現,CD25與急性髓系白血病預后生存有關,其表達上調與低生存率有關。王微等[18]研究發(fā)現,CD25基因rs7072793位點 TT 基因型是肺癌發(fā)生的危險因素,可通過增加CD25表達水平,從而提高腫瘤細胞免疫逃逸能力。Tang等[19]研究發(fā)現,CD25基因rs2104286位點多態(tài)性與EB病毒相關性噬血細胞綜合征的易感風險有關,且攜帶AA基因型患兒的易感風險更高。

本研究發(fā)現,HFMD組CD25基因rs7072793位點TT、CT基因型頻率和T等位基因頻率高于對照組,CC基因型頻率和C等位基因頻率低于對照組(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位點多態(tài)性與EV71感染HFMD患兒的易感風險有關。本研究還發(fā)現,輕癥組CD25基因rs7072793位點CC、CT、TT基因型頻率和C、T等位基因頻率與重癥組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位點多態(tài)性與EV71感染HFMD患兒的病情嚴重程度有關。分析原因:外周誘導獲得的Treg與白介素-10(IL-10)、轉化生長因子-β(TGF-β)等細胞因子相互作用后,可刺激CD4+、CD25+Treg活化,促使CD25表達增加,發(fā)揮免疫抑制作用[20]。而CD25基因多態(tài)性會阻斷IL-2信號轉導通路,影響Treg的生長發(fā)育過程,進而造成機體的免疫功能紊亂,增加EV71感染的風險。故推測CD25基因rs7072793位點多態(tài)性可參與EV71感染HFMD的發(fā)生、發(fā)展過程。本研究影響因素分析發(fā)現,腦電圖結果異常、CD25基因rs7072793位點TT基因型、CD25基因rs7072793位點T等位基因是EV71感染重癥HFMD發(fā)病的獨立危險因素(P<0.05)。提示CD25基因rs7072793位點多態(tài)性與EV71感染HFMD患兒的重癥化有關,且攜帶TT基因型、T等位基因患兒的重癥化風險更高。

綜上所述,CD25基因rs7072793位點多態(tài)性與EV71感染HFMD患兒的易感風險和病情嚴重程度存在關聯(lián),且攜帶TT基因型、T等位基因患兒進展為重癥的風險更高。但是本研究納入病例數較少,且來自同一單位,存選擇偏倚,今后可設計大樣本、多中心研究,進一步探討CD25基因其他位點多態(tài)性與EV71感染HFMD的關系。