miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌組織中的表達及其與超聲血流參數的相關性研究

常正江 陳小龍

作者單位：716000 陜西省延安市人民醫院

乳腺癌是目前臨床上常見的女性惡性腫瘤,每年新增病例數位居世界第一[1]。傳統的手術切除、放化療以及免疫、靶向治療等手段可在一定程度上改善乳腺癌的預后,但由于患者的早期診斷率較低,患者長期預后仍然存在巨大挑戰[2]。由于乳腺癌早期不易與其他良性腫瘤區分,加上缺乏有效的腫瘤標志物對高危患者進行早期識別,導致乳腺癌的預后不理想。因此,進一步探索乳腺癌早期診斷及病情評估的相關分子標志物在疾病防治中極其重要。乳腺癌組織中微小核糖核酸-92a(miR-92a)的表達與臨床分期以及淋巴結轉移相關[3];可溶性細胞間黏附分子-1(sICAM-1)與乳腺癌病情密切相關,可用于術后動態監測病情[4];血管內皮生長因子(VEGF)與乳腺癌腫瘤大小、腋窩淋巴結轉移及不良預后密切相關[5]。本研究主要探討 miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌患者中的表達及與超聲血流參數的相關性,旨在為疾病的早期診斷及病情評估提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 一般資料

回顧性收集2021年1月到2021年12月期間本院收治的乳腺癌患者102例作為乳腺癌組,年齡30～70歲,平均年齡(52.3±8.4)歲。納入標準:①首次確診且臨床資料記錄完整;②符合《中國晚期乳腺癌規范診療指南(2020版)》[6]的診斷標準,術后病理組織均經病理檢查證實。排除標準:①合并其他系統的惡性腫瘤;②肝、腎功能受損;③合并嚴重感染性疾病;④合并自身免疫系統疾病。⑤合并心腦血管疾病。同期收集100例乳腺良性結節患者作為對照組,年齡30～70歲,平均年齡(51.9±8.0)歲,經術后病理組織切片確診為良性結節。兩組研究對象的年齡、性別等比較差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經醫院倫理委員會批準備案通過,所有患者知情同意。

1.2 超聲檢查方法

超聲檢測儀器為日本東芝Aplio 500儀器,線陣探頭頻率4～11 MHz。患者采取仰臥位,使乳腺病變部位充分暴露。圖像穩定后測定血流參數,測量3次PSV、EDV、PI、RI值,取平均值進行記錄。以上操作由2名資深B超醫生進行。

1.3 血清學檢測方法

所有研究對象空腹8小時以上于次日8點左右抽取靜脈血3 ml注入無添加劑的干燥試管,顛倒混勻數次后靜置30 min,再以3000 rpm的速度離心10 min,吸取上清液置于-80 ℃超低溫冰箱中保存備用。miR-92a采用實時熒光定量聚合酶鏈反應法檢測,其逆轉錄引物是5'-CTCAACTGGTGTCGT,GGAGTCGGCAATTCAGTTGAGACAGGCCG-3',上游引物是5'-ACACTCCAGCTGGGTATTGCACTTGT CCCG-3',下游引物是5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'。通過2-△△CT法計算相對表達量,每個標本檢測3次,儀器為美國ABI7500型PCR儀。sICAM-1采用酶聯免疫方法進行檢測,檢測試劑盒由上海玉博生物科技有限公司提供,儀器為雷杜公司RT-6100酶標分析儀。VEGF應用羅氏cobas e601全自動電化學發光免疫分析儀及其配套試劑進行檢測。同一檢測項目均在同一臺儀器完成,嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 兩組miR-92a、sICAM-1、VEGF水平比較

乳腺癌組miR-92a、sICAM-1、VEGF水平明顯高于對照組,差異具有統計學意義(P<0.05),見表1。

表1 兩組miR-92a、sICAM-1、VEGF水平比較

2.2 miR-92a、sICAM-1、VEGF檢測對乳腺癌的診斷價值

繪制miR-92a、sICAM-1、VEGF對乳腺癌的ROC 曲線,結果顯示,三項聯合檢測的曲線下面積(AUC)為0.897,靈敏度為89.3%,特異度為90.0%,提高了診斷效能,具體見表2和圖1。

圖1 miR-92a、sICAM-1、VEGF對乳腺癌的ROC曲線

表2 miR-92a、sICAM-1、VEGF檢測對乳腺癌的診斷價值分析

2.3 乳腺癌發生的影響因素分析

以是否發生乳腺癌為因變量,將miR-92a、sICAM-1、VEGF作為自變量進行多因素Logistic回歸分析,結果顯示,miR-92a、sICAM-1、VEGF是乳腺癌發生的重要危險因素(P<0.05),見表3。

表3 乳腺癌發生的多因素Logistic回歸分析

2.4 兩組超聲血流參數的比較

乳腺癌組患者的PSV、EDV明顯高于對照組,PI、RI明顯低于對照組,差異具有統計學意義(P<0.05),見表4。

表4 兩組超聲血流參數比較

2.5 miR-92a、sICAM-1、VEGF與乳腺癌患者超聲血流參數的相關性

采用Spearman相關性分析 miR-92a、sICAM-1、VEGF與超聲血流參數的關系,結果顯示,miR-92a、sICAM-1、VEGF與PSV、EDV呈正相關(P<0.05),與PI、RI呈負相關(P<0.05),見表5。

表5 miR-92a、sICAM-1、VEGF與乳腺癌患者超聲血流參數的相關性分析

3 討論

乳腺癌已成為全世界范圍內最常見的女性惡性腫瘤之一。根據全球癌癥數據統計顯示,2020年全球約有1000萬人死于惡性腫瘤,其中乳腺癌占11.7%[7]。乳腺癌早期的臨床表現為乳頭溢液、乳房包塊、腋窩淋巴結腫大等等,晚期可發生侵襲、轉移,出現多器官病變,嚴重威脅患者生命安全。血清腫瘤標志物在惡性腫瘤的早期診斷中起著重要作用,但乳腺癌的診斷缺乏高靈敏度和特異度的標志物[8]。因此,尋求有效的血清學標志物對乳腺癌的早期診斷及病情評估具有重要作用。

miR-92a是目前研究最多的微小核糖核酸之一,主要參與調控心、肺、免疫系統等器官的發育以及新生血管的形成過程,可促使惡性腫瘤細胞增殖,提高腫瘤細胞侵襲、轉移能力,在腫瘤進展過程中發揮致癌作用[9]。s ICAM-1是粘附分子中的免疫球蛋白超家族成員之一,具有介導細胞與細胞、細胞與細胞外基質相互粘著、相互識別、傳遞信號的作用,正常情況下不表達或低表達[10]。sICAM-1作為介導細胞間黏附的一種黏附分子,其與配體結合可介導腫瘤細胞與不同細胞、基質之間的黏附,促進腫瘤的侵襲、轉移[11]。VEGF是一種寡二聚體糖蛋白,由腫瘤細胞和基質細胞分產生,是參與血管生成的正向調節因子,能夠促進腫瘤新生血管生成,為腫瘤細胞增殖提供氣體交換與營養,其水平隨腫瘤的進展程度而逐漸升高[12]。本研究為乳腺癌的診斷篩選了miR-92a、sICAM-1、VEGF這3個指標,結果顯示,其水平在乳腺癌患者中均明顯升高,這與上述研究結論一致。利用ROC曲線分析了這3個指標的診斷效能,結果顯示,聯合檢測的靈敏度和特異度可達到89.3%、90.0%,相比較單一檢測而言,可進一步提高診斷效能。進一步利用多因素Logistic回歸分析結果顯示miR-92a、sICAM-1、VEGF是乳腺癌發生的重要危險因素,這在邱曉陽[13]、徐小艷[14]的報道中也有體現。

超聲是臨床常用輔助檢查手段,因具有操作簡單、無創傷性等優點而廣泛應用。乳腺惡性腫瘤可促使機體產生血管生成因子,加速血管生長,造成腫瘤內部血流增多,且流速加快、分布紊亂,再加上腫瘤缺乏肌層、血管壁薄、彈性不佳,導致血流信號異常[15]。惡性腫瘤常呈現高流速、低阻力的情況。臨床上常常采用PI、RI作為惡性腫瘤的參考指標,PSV、EDV則是輔助參考標準[16]。本研究顯示,乳腺癌患者的PSV、EDV明顯升高,PI、RI明顯降低,正好與上述研究相符。利用Spearman相關性分析可知 miR-92a、sICAM-1、VEGF與超聲血流參數密切相關,提示 miR-92a、sICAM-1、VEGF在一定程度上可以反映乳腺癌的血流情況,用于評估病情。

綜上所述,miR-92a、sICAM-1、VEGF在乳腺癌患者中明顯升高,且與患者超聲血流參數密切相關,是乳腺癌發生的重要危險因素,三項聯合檢測有助于乳腺癌的早期診斷及病情評估。但本次研究屬回顧性研究,未進行前瞻性設計,可能存在一定的選擇偏倚,待日后進行改進來進一步驗證此次研究的正確性。